绵羊成熟叠朊在大肠杆菌中的表达

摘要

以含有绵羊叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒OvPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段,并将其插入原核表达载体pET-30a(+)的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pET-OvmDpl.将pET-OvmDpl电转化到宿主菌株BL21(DE3)中,以1.0 mM IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示绵羊成熟叠朊被大肠杆菌表达.以Ni-NTA树脂纯化表达产物,电泳结果显示纯化产物中存在与预计表达蛋白分子量23Ku二倍相当的蛋白条带,分析该蛋白可能是成熟叠朊在大肠杆菌表达时形成的二聚体结构.