高效液相色谱-电喷雾质谱快速分析磷脂

摘要

磷脂分子是生物膜的主要构成成分.它不仅在维持细胞正常结构和功能方面起重要作用,同时也参与细胞信号转导和细胞代谢过程.根据其极性头部的不同,磷脂可分为不同的类别,如丝氨酸磷脂(PS),乙酰胆碱磷脂(PC)等;根据甘油骨架上所含脂肪酸链长短和双键数目的不同,每一类磷脂又包含许多不同的分子.研究表明,在不同的组织,或者是不同的生理病理情况下,磷脂的组成会发生特异的变化,因此,开发快速,高效和高灵敏度的磷脂分析方法对于生理和病理研究有重要的意义.目前不同磷脂种类的分离主要有薄层色谱(TLC)和正相高效液相色谱法(NP-HPLC);对于同一类磷脂中不同分子的分析,多采用反相柱来进行分离.检测方法主要是紫外-可见(UV-Vis),蒸发光散射(ELSD)和质谱(MS).在上述方法中,以高效液相色谱-质谱联用技术的灵敏度最高,选择性最好,同时能对磷脂分子做结构鉴定.本文采用反相高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱联用的方法,在5分钟之内对长链乙酰胆碱磷脂分子得到很好的分离.在正模式条件下,乙酰胆碱磷脂的检测限达到0.21-0.29 pmol,线性范围为两个数量级.除了在正模式下检测PC和鞘氨醇磷脂外,此方法可以在负模式下对丝氨酸磷脂和肌醇磷脂等带负电的磷脂进行分离和检测。