基于CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立

摘要

本研究旨在建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法。用终浓度分别为3μg/mL、6μg/mL、9μg/mL和12μg/mL的刀豆素A(ConA)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色的猪外周血单个核细胞(PBMC)3d、5d和7d，然后用荧光标记的单克隆抗体对CD4+和CD8+细胞进行标记，最后利用流式细胞术分析。结果表明，不同浓度ConA刺激后，猪PBMC增殖能力不同，ConA浓度为6μg/mL时CD4+和CD8+细胞的细胞分裂指数最大，用MTT试验也获得相似结果。对PBMC刺激5d后进行分析相对较好。本研究建立了一种基于活细胞染料CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法，该方法可以在单个细胞水平上有效地分析刺激后CD4+和CD8+细胞亚群的增殖水平，进而评价细胞免疫水平。