脑脊液HCVE1巢式荧光定量RT-PCR诊断方法的建立和应用研究

摘要

目的：建立脑脊液丙型肝炎病毒(HCVE1)巢式荧光定量RT-PCR检测方法，为快速、准确地定量检测脑脊液HCV奠定基础。rn 方法：根据HCV基因序列，设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的HCV基因片段克隆入载体，重组质粒经筛选、鉴定后，作为阳性模板，用于标准曲线的制定和样品检测。rn 结果：应用重组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板具有良好的线性关系，相关系数为0.943，建立了检测HCV的巢式逆转录荧光定量PCR方法。检测36例HCV感染患者及26例健康人脑脊液中HCVE1，5例HCV感染患者呈阳性，其余均为阴性。rn 结论：荧光定量套式RT-PCR方法能够避免PCR后处理导致的假阳性污染，并实现准确定量，对于进一步研究HCV对中枢神经系统损伤具有很好的应用价值。