扶正化瘀方对大鼠纤维化肝脏差异蛋白质组表达的影响

摘要

背景与目的 扶正化瘀方是抗肝纤维化的有效临床药物，既往研究表明该方具有多途 径的抗肝纤维化作用机制。进一步的蛋白质组学观察初步发现扶正化瘀方对CCl4大鼠肝纤 维化模型预防作用与调节糖脂肪代谢（磷酸甘油酸激酶）、蛋白质代谢（过氯酸可溶性蛋白 质）等有关。但是，对于已经成模的肝纤维化的逆转，扶正化瘀方能否与如何影响病理差异蛋白质组的表达？药物影响的差异蛋白质组特点如何？因此，本实验采用二甲基硝胺 （DMN）大鼠纤维化模型，治疗用药，通过比较正常大鼠、模型大鼠与治疗组大鼠肝组织 的差异蛋白质组表达变化，进一步探讨扶正化瘀方促进肝纤维化逆转的复杂作用机制。方法 通过DMN造模复制大鼠肝纤维化模型，以扶正化瘀方口服灌胃进行干预，利用双向凝胶电泳(2-DE)分离肝组织总蛋白，以Image Master 软件分别对正常、模型、药物治疗组大鼠肝组 织各两组间的全蛋白质组表达谱进行差异分析，应用MALDI-TOF-MS和数据库搜索鉴定差异显著的蛋白点；以免疫印迹法验证典型的差异蛋白质。结果 正常组（N）、模型组（Ｍ） 及扶正化瘀组（FZHY）肝组织蛋白质2-DE 图谱分别检测到1120±154、1122±113、932±160个蛋白点。经ImageMaster 6.0software 分析共得到53个差异蛋白点，其中11 个点是在正常、扶正化瘀与模型组中均存在，且正常、扶正化瘀组与模型组相比具有相同变化趋势的蛋 白点，35个是在正常与模型中特有的差异蛋白点，7个是在模型与扶正化瘀组特有的蛋白 点。最后通过MAID-TOF-MS获得了18张肽质量指纹（PMF）图谱，鉴定了11个蛋白质/多肽。免疫印迹结果提示正常组有少量波形蛋白（vimentin）的表达，模型组的表达显著性 上调（P﹤0.01），扶正化瘀组与模型组相比波形蛋白的表达显著性下降（P﹤0.01），Western blot的结果与二维电泳的结果一致。结论 肝纤维化的形成过程涉及物质代谢、氧化应急、分子伴侣、细胞骨架及离子通道调节等多种蛋白质的改变；扶正化瘀抗肝纤维化的作用是通 过除调节物质代谢相关蛋白质外，尚与氧化应急、细胞骨架等功能相关蛋白质组的调节密切相关。扶正化瘀方对波形蛋白的抑制提示该方除了抑制肝脏细胞外基质生成，尚与抑制多途 径的肌成纤维细胞活化等有关。