雷藤舒(LLDT-8)对TNF-α诱导的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞促凋亡、抗炎作用及对Ras-MAPKs信号通路的调节作用

摘要

目的:观察雷藤舒(LLDT-8)对TNF-α诱导的RA-HFLS促凋亡作用;探讨LLDT-8对炎症因子的影响;研究LLDT-8对Ras-MAPKs信号通路的作用机制.rn 方法:在体外培养RA-HFLS体系中,加入50nM LLDT-8与20ng/ml TNF-α共孵育,同时设置对照组,采用TUNEL法检测RA-HFLS细胞的凋亡;RT-PCR检测Bcl-2mRNA的表达水平;ELISA、RT-PCR检测IL-6、MMP-3的表达;Western-blot检测Ras-MAPKs信号通路的磷酸化水平和蛋白的表达.rn 结果:LLDT-8组细胞凋亡率明显增加(P＜0.01);LLDT-8能显著抑制TNF-α诱导的RA-HFLS分泌的IL-6、MMP-3的表达(P＜0.01).LLDT-8能明显抑制Ras、p-P38、c-Jun和c-Myc蛋白的磷酸化和蛋白的表达,而各组之间p-ERK、p-JNK、c-Fos磷酸化水平和蛋白表达无明显变化.rn 结论:LLDT-8能促进TNF-α诱导的RA-HFLS细胞凋亡,且能抑制抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达;LLDT-8能通过抑制炎性细胞因子的产生而发挥抗炎作用;LLDT-8降低Ras、p38、c-Jun、c-Fos、c-Myc的磷酸化和蛋白表达水平,从而抑制Ras-p38MAPK信号传导通路的异常活化,间接抑制核内转录因子向细胞进一步分化、增殖或产生炎症,这可能是LLDT-8抑制RA滑膜的增殖,减轻滑膜炎症,抑制RA关节损伤的部分机制.