漆酶

摘要： 本研究采用传统分离法从渥堆六堡茶中共分离出42株菌,然后利用平板初筛和液体发酵进行复筛,从42株微生物中筛选出10株产PPO的微生物并测定其酶活。用盐析及透析法对产酶活性最高的菌株所产的多酚氧化酶进行纯化,纯化后的酶液用SDS-PAGE及Native-PAGE电泳方法确定PPO的分子量范围和PPO种类。结果表明,渥堆六堡茶中发现的10株产多酚氧化酶菌株,其中,细菌的产酶活性普遍要高于霉菌;Pantoea vagans(成团泛菌)菌株产酶活性最高,酶活高达37 U/mL,其所产的多酚氧化酶分子量在16~48 kDa之间,属于漆酶。此研究为微生物对六堡茶茶叶品质作用的后续研究奠定了基础,同时也为功能六堡茶的研发提供资料数据。

摘要： 为实现漆酶基因稳定高效的异源表达,利用基因工程技术构建同源整合表达载体pGQLR,删除其来自原核的DNA序列后电转化至产朊假丝酵母菌(Candida utilis,C.utilis),构建一株表达漆酶的产朊假丝酵母工程菌ZHQX1,并对其遗传稳定性和酶活进行评价。ZHQX1在连续传代100代时外源基因仍稳定存在,保持了良好的遗传稳定性,培养96 h时其漆酶酶活是同时期原始菌—云芝栓孔菌酶活的4.8倍,达到1078.9 U/L。

摘要： 采用铜/锌复合金属磷酸盐晶体和海藻酸钙凝胶双重包覆技术对漆酶进行固定化,制得石榴状Alg@Cu_(3)/Zn_(3)(PO_(4))_(2)@Lac的凝胶微球.SEM,EDX和FTIR表征结果表明,在凝胶微球内部,漆酶被成功固定于由海藻酸钙凝胶包覆的铜/锌复合金属磷酸盐晶体内,铜/锌复合金属磷酸盐晶体镶嵌于海藻酸钙凝胶网格的孔隙中而呈石榴状.以2,2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)为底物,经酶学性质研究表明,在无机盐晶体和海藻酸钙凝胶的双重保护下,Alg@Cu_(3)/Zn_(3)(PO_(4))_(2)@Lac的耐热性、耐酸性以及储存稳定性比游离漆酶均有不同程度增强.将Alg@Cu_(3)/Zn_(3)(PO_(4))_(2)@Lac应用于双酚A(BPA)的降解,采用孔径约1 mm滤网实现快速回收,经6次循环利用,对BPA的降解率下降约14%,显示出比较稳定的重复利用性和便捷的可操作性,这主要得益于海藻酸钙和铜/锌无机盐晶体对漆酶蛋白分子的双重保护.

摘要： 采用纤维素纳米晶(NCC)为模板,正硅酸甲酯为硅源前驱体,蒸发自组装、高温碳化制备了手性向列型介孔碳.SEM和BET比表面积及孔隙分析表明该介孔碳材料保持了NCC高度有序的左旋手性向列型微观结构,比表面积高达449 m^(2)g^(-1),孔体积为0.51 cm^(3)g^(-1),平均孔径5.43 nm.以手性向列型介孔碳为载体固定漆酶制备漆酶电极,研究了该漆酶电极对邻苯二酚的直接电化学行为和催化氧化还原性能,并成功应用于邻苯二酚的定量检测.结果表明,邻苯二酚在漆酶电极表面能进行直接的电化学反应,该漆酶电极构成的生物传感器对邻苯二酚具有良好稳定的电流响应,线性检测范围为1.1~22.8μmol/L,选择灵敏度为0.016 A/(mol/L),检测限为0.217μmol/L.该漆酶电极具有良好的选择性、稳定性和重现性,较高的灵敏度和较低的检测限,在废水邻苯二酚检测领域具有广阔的应用前景.

摘要： 为挖掘适用于脱除有毒染料孔雀石绿(malachite green,MG)的DUF152家族漆酶,利用生物信息学方法在嗜热菌水生栖热菌中筛选候选酶TaLac,构建重组表达载体pET28a-TaLac,在大肠杆菌中进行过量表达和纯化,测定TaLac的酶学性质,探究TaLac对MG的脱色和脱毒能力。结果表明,TaLac具有DUF152家族保守铜原子结合位点,利用Ni亲和层析纯化得到高纯度的TaLac具有氧化2,6-二甲基苯酚(2,6-dimethylphenol,DMP)等漆酶底物的催化活性。以DMP为底物,该酶的最适pH为5.0,最适温度为60°C,K_(m)为0.74 mmol/L。此外,TaLac在50°C热处理4 h后,仍保留80%的原始活力;该酶可耐受高浓度的Mg^(2+)、Ca^(2+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)和Ba^(2+)等金属离子。TaLac可于3 h内使50 mg/L MG完全脱色,并彻底消除MG对玉米萌发的毒害作用。因此,TaLac是具有活性的DUF152家族漆酶,具有良好的热稳定性,可高效催化MG的脱色与脱毒。

摘要： 漆酶能够在有氧条件下催化酚类化合物聚合生成有色物质,从而对羊毛纤维原位上染。不同酚类化合物苯环上酚羟基与氨基基团的位置与数目影响纤维颜色及耐水洗/摩擦色牢度。与原羊毛相比,经酶促染色的羊毛纱线断裂强力、耐磨性、耐热性能均有提升,增重明显。

摘要： 系统考察漆酶催化条件对二氢杨梅素衍生物的颜色、α-葡萄糖苷酶抑制及抗氧化活性的影响,并运用波谱手段对产物结构进行表征。结果表明漆酶可用于二氢杨梅素的氧化聚合,且漆酶浓度、pH值、反应时间及温度对衍生物的颜色有规律性影响。所得二氢杨梅素衍生物的α-葡萄糖苷酶抑制活性(IC_(50)6.2μg/mL)显著高于二氢杨梅素(IC_(50)85.95μg/mL),但其1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力逊于二氢杨梅素。波谱分析表明漆酶通过催化二氢杨梅素酚羟基氧化,而使其以醚键结合成聚合物。本研究结果可促进二氢杨梅素在食品中的应用,并推动新型的功能性食品开发。

摘要： 针对现有材料对漆酶的负载率低,负载漆酶后重复使用性能差等缺点,以甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)为单体,采用原子转移自由基聚合(ATRP)技术对工业化生产的水刺粘胶纤维膜进行改性处理,然后将改性后的水刺粘胶纤维膜(即SV-poly(HEMA))进行Fe^(3+)吸附,最后将吸附Fe^(3+)后的SV-poly(HEMA)(即SV-poly(HEMA)-Fe(Ⅲ))作为配位法固定漆酶的载体,探究其对漆酶固定化的含量、活性、稳定性和重复使用性能,同时对纤维形貌和结构进行表征。结果表明:SV-poly(HEMA)-Fe(Ⅲ)对漆酶的固定化量达到132.9 mg/g;与自由漆酶相比,固定化漆酶对温度变化(20~70°C)表现出更强的抵抗力,对pH值(2.0~7.0)表现出更低的敏感性;将负载漆酶的SV-poly(HEMA)-Fe(Ⅲ)重复使用10次后,漆酶的活性依然保持在55%以上。

摘要： 尝试在棉织物的拔染印花中采用环保型漆酶代替有害拔染剂。研究了漆酶用量、酶活化时间与活化温度对棉织物活性染料拔染效果的影响。探讨了染料拔染的最佳工艺条件。结果表明,漆酶是一种环保型替代品,可代替目前广泛应用于纺织品染料拔染的亚磺酸钠甲醛。

摘要： 高效获得金针菇闽金1号产漆酶条件,为实现漆酶大规模生产提供参考。采用单因素试验、P-B试验、响应面法(RSM)、中心组合试验(CCD)对闽金1号产漆酶的液体培养基组成进行优化。结果表明:最优碳源和氮源为蔗糖、蛋白胨+酵母粉,蔗糖、MgSO_(4)、KH_(2)PO_(4)对漆酶活性有显著影响,最优产漆酶培养基组成为蔗糖22.27 g/L、MgSO_(4)0.96 g/L、KH_(2)PO_(4)1.25 g/L,在此条件下,漆酶活性为945.981 U/L,是原始条件下(334.73U/L)的2.83倍。

摘要： 利用漆酶催化氧化木材中的木质素作为胶黏剂制造纤维板,可以有效地解决由于使用传统胶黏剂而引起的甲醛排放、生物质原料的循环利用等问题.本文概述了漆酶在纤维板制造中的应用方法及其研究进展.

摘要： 本文系统研究了卤代酚在在漆酶催化过程中的反应动力学，探讨了腐植酸(HA)和金属离子对卤代酚转化的影响.实验结果表明，在一定的漆酶浓度下，卤代酚的去除符合一级反应动力学的规律，通过动力学模型拟合可得到表观一级反应动力学常数。比较在不同漆酶浓度下得到的一级反应动力学常数，发现两者之间线性关系。综上，可以推测漆酶催化氧化卤代酚遵循二级反应动力学。

摘要： 探讨了漆酶催化木素连接谷氨酸提高纤维强度性能的机理,利用LC-MS分析了木素模型物连接谷氨酸反应产物的可能性结构,利用FT-IR、CP/MAS13CNMR分析方法阐述了漆酶催化木素连接谷氨酸后木素结构的变化.结果表明,漆酶可催化木素模型物形成不同自由基,自由基之间通过偶合反应发生聚合,通过迈克尔加成反应谷氨酸可连接到木素模型物上;红外光谱图在波数1156.68cm-1处出现新的吸收峰,表明处理后的木素结构中出现-COOH基团;在固体核磁共振中,漆酶可催化氧化木素侧链末端羰基转变为C=N,将谷氨酸连接到木素上.

摘要： 采用漆酶DENILITEⅡ对酸性染液进行催化脱色.对于0.1g/L酸性蓝80染液,单因素优化脱色工艺为:漆酶DENILITEⅡ1.0g/L,pH=6,60°C处理7min.在该工艺条件下,酸性蓝80染液的脱色率为77％;硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠均对酶的活力有较大影响,但在低质量浓度下影响较小.通过响应面优化法和回归分析,得出在染料浓度0.1g/L,DENILI-TEⅡ1.2g/L,pH=7,70°C处理7min时,得到理论最大脱色率为79.4％.

摘要： 利用漆酶能引发酚类物质发生聚合反应生成有色聚合物的性质,将漆酶用于催化没食子酸聚合,对羊毛织物“原位”染色.染色后的羊毛织物有较好的耐水洗牢度、耐摩擦牢度和耐晒牢度,并具有一定的抗氧化性和抗菌性.

摘要： 研究了邻苯二酚和丁香酸2种腐殖质模型化合物在漆酶催化氧化对氨基苯胂酸过程中的作用及产物情况.结果发现:在漆酶-对氨基苯胂酸单一体系中,漆酶并不能降解对氨基苯胂酸;当体系中加入邻苯二酚或者丁香酸时,对氨基苯胂酸的去除效果非常显著,且邻苯二酚使得对氨基苯胂酸的去除效果更加彻底;在去除过程中,加入2种腐殖质模型化合物后均产生了交叉耦合产物,其中邻苯二酚与对氨基苯胂酸的结合符合1,4加成,丁香酸与对氨基苯胂酸的结合符合1,2加成;产物中均没有发现砷酸基团的脱落,始终以有机胂形态存在,使得此反应工艺的安全性明显提高.

摘要： 漆酶是一种木质素降解酶,因具有广泛的底物特异性,在各种工业应用上具有巨大潜力.以实验室前期获得的高产漆酶的一色齿毛菌(Cerrena unicolor)HYB07菌株为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术(real-time quantitative PCR,qPCR)对其中8条漆酶基因(Lac1-Lac8)的表达调控进行研究.主要研究结果如下:rn 1、HYB07菌株在PDY和YSJ培养基中发酵4-5天,漆酶产量达到最高,分别为194.8U/mL和280.0U/mL.Lac7和Lac2分别是PDY培养基中发酵前期和后期主要表达的基因.在YSJ培养基中,Lac7是主要表达的基因.rn 2、Cu2+和Zn2+通过调控漆酶基因表达提高漆酶产量。主要表达基因Lac7受Cu2+和Zn2+诱导，以Cu2+效果尤为显著。rn 3、烟酸和香草酸会降低HYB07菌株的漆酶产量，ABTS和愈创木酚会提高漆酶产量。PDY培养基中，Lac1转录受烟酸抑制最显著，而Lac2受香草酸抑制最显著.YSJ培养基中，Lac1和Lac6表达受ABTS上调，Lac4转录受愈创木酚诱导。rn 4、HYB07菌株在高氮高碳培养基中漆酶产量最高，在低氮低碳培养基中产量最低。Lac1和Lac7被低碳和低氮条件抑制;Lac2和Lac5受低碳条件诱导;Lac3和Lac4受低氮条件诱导;Lac6同时受低碳和低氮条件诱导。rn 5、在YSJ产酶培养基中，糊精是最适合HYB07菌株产漆酶的碳源。葡萄糖和蔗糖会微弱抑制漆酶基因表达。以甘油取代糊精会诱导Lac2和Lac5表达，抑制Lac1和Lac7表达，从而使产酶量下降。rn 6、以麦芽提取物取代酒石酸铵会微弱诱导Lac3表达;以酵母提取物取代酒石酸铵会诱导Lac8表达;以NH4NO3取代蛋白肽在促进Lac3和Lac4转录的同时抑制Lac7表达，从而降低漆酶产量。

摘要： 漆酶是多酮氧化酶家族的成员之一,它含有四个典型铜离子,Ⅰ型铜用于将多酚类底物还原的电子传递给Ⅱ和Ⅲ型铜组成的三铜核心簇,氧气进入漆酶后在三铜核心簇与传递而来的质子和电子反应形成水,整个过程不含其他副反应,因而是环境友好型多酚氧化酶.同时,因为漆酶底物特异性较低,小分子介体可进一步拓宽漆酶作用的底物范围,使得漆酶受到工业应用领域,特别是染料脱色应用的青睐.rn 本文从实验室前期筛选菌株Cerrena sp. HYB07出发，克隆得到多条漆酶基因(包括启动子)及cDNA序列，并进行了生物信息学分析;3条漆酶基因在毕赤酵母中进行异源表达，并对高效表达策略进行初步探讨;对表达的重组漆酶进行酶学性质表征和脱色应用研究，具体研究结果如下:rn 1、通过简并PCR，TAIL-PCR和Site-Finding PCR共克隆出6条新的漆酶同工酶基因，与己知的4条漆酶基因共同构成HYB07漆酶同工酶家族，都具有担子菌漆酶的典型结构特征，上游启动子序列包含了多个顺式作用元件，根据内含子特点、氨基酸组成比例、序列比对、保守性和进化分析，预测Lac3, Lac6和Lac8将具有特殊的生理生化特性。rn 2、共构建了7个pPICZa-Lac载体，将其中的pPICZa-Lac3,Lac6和Lac8转入毕赤酵母X33中进行异源表达和筛选，并通过培养基优化、密码子优化、信号肽选择等高效表达策略的探索，使rLac6在28°C发酵16d达到最高表达量6.33U·mL-1，并将其进行分离纯化和反应动力学测定。rn 3、通过比较HYB07漆酶和重组漆酶的酶学性质可以发现，HYB07家族的漆酶最适pH为3.0-3.5，最适温度为30-55°C，当pH≧4和≦50°C时稳定，对7种常见的水互溶性有机溶剂具有较强的耐受性，Cu2+, Al3+和Mn2+对部分漆酶有促进作用，对EDTA、曲酸和Triton X-100有较强的耐受能力，纯化后的漆酶对多种有机溶剂、金属离子和抑制剂耐受能力得到提高。rn 4、HYB07漆酶发酵液对两种来源的工业废水脱色率达80.3%和58.8%，并可对偶氮类、三苯甲烷类、蕙醒类、靛类等19种染料具有良好的脱色效果，因而具有广泛的工业应用前景。

摘要： 探究了漆酶酶促茶叶色素的催化氧化作用及其在棉织物染色中的应用.分别讨论了漆酶用量、温度、时间以及pH值对茶叶色素的催化氧化效果的影响和染色温度,染色时间以及染色pH值对棉织物的染色效果的影响.对茶叶色素进行红外光谱分析其结构变化.对染色棉织物进行摩擦牢度、皂洗牢度、日晒牢度测试.结果表明,酶促茶叶色素的最佳工艺条件为酶浓度40g/L、温度50°C、时间120min、处理pH值为5,对棉织物染色工艺条件为温度90°C、时间90min、pH值为6.染色棉织物的各项牢度优良.

摘要： 竹林中每年更新大量的木质素,本文通过对木质素及木质素降解菌的相关研究的综述,详细介绍了木质素的结构及成分,讲述其储量丰富,应用范围广但利用效率低的现状.提供了利用木质素降解菌降解木质素的一种可能途径,为相关木质素降解菌的研究人员提供有力帮助.

摘要： 本发明涉及一种基于中药药渣生产漆酶酶液及粉状漆酶的方法，步骤：⑴、PDA固体培养基的准备；⑵、种子培养基的准备；⑶、发酵产酶种子液的制备；⑷、发酵产酶培养基的制备；⑸、发酵产酶；⑹、漆酶酶液提取：⑺、上述漆酶酶液经过喷雾干燥后即得粉状漆酶。本发明发酵条件温和，工艺简单，成本低廉且变废为宝，降低了中药药渣对环境的污染；利用中药药渣中的有效成分诱导真菌产酶，缩短了发酵时间，产漆酶活性高，稳定性好，所产漆酶可广泛应用于造纸、印染、污水处理等领域。

摘要： 本发明公开了一种漆酶固载材料及其固定漆酶的方法，漆酶固载材料的制备是通过与六水氯化铁、七水硫酸亚铁的反应使埃洛石纳米管上负载上四氧化三铁，具备一定的磁性。然后将具有磁性的埃洛石纳米管与硅烷偶联剂反应引入氨基，在表面上提供多个活性位点，使其固定化作用更加稳定。本发明制备的m‑HNTs‑Fe3O4，在表面引入了氨基，为交联剂提供了多个活性位点，能够让被固定化的酶的数量增多，在处理染料废水、农药废水以及养殖场废水时的效率更高、速度更快。

摘要： 本发明公共了一株生产漆酶的菌株、利用该菌株生产漆酶的方法和生产的漆酶以及应用，涉及微生物酶学领域。本发明生产漆酶的菌株为绒毛栓孔菌(Trametes pubescens BJFC-C1108)，微生物保藏编号为CGMCC No.10308。利用本发明的菌株绒毛栓孔菌(Trametes pubescens BJFC-C1108)生产的漆酶产量较高，酶活力可达到28.687U/mL，制备的漆酶对碱性条件(pH 7.0-10.0)具有较高的活性、稳定性和耐受性，对金属离子的耐受力也较高，在一定程度上能够缩短偶氮染料刚果红完全脱色所需的时间，具有潜在的应用价值，可被应用于较多工业领域，具有良好的开发应用前景。

摘要： 本发明涉及一种基于中药药渣生产漆酶酶液及粉状漆酶的方法，步骤：⑴、PDA固体培养基的准备；⑵、种子培养基的准备；⑶、发酵产酶种子液的制备；⑷、发酵产酶培养基的制备；⑸、发酵产酶；⑹、漆酶酶液提取：⑺、上述漆酶酶液经过喷雾干燥后即得粉状漆酶。本发明发酵条件温和，工艺简单，成本低廉且变废为宝，降低了中药药渣对环境的污染；利用中药药渣中的有效成分诱导真菌产酶，缩短了发酵时间，产漆酶活性高，稳定性好，所产漆酶可广泛应用于造纸、印染、污水处理等领域。

摘要： 本发明属于生物发酵技术领域，具体涉及一种用于生产漆酶的组合物及发酵基质及其生产漆酶的方法。用于生产漆酶的组合物，包括污泥和三七渣，其质量比为1:4‑3:2；然后与氮源、硫酸铜、磷酸二氢钾、硫酸镁混合制成发酵基质；发酵基质灭菌后接种菌种进行固态发酵，然后干燥制得漆酶。本发明提供的污泥与三七渣作为或者制备的发酵基质用于生产漆酶与单独采用污泥或三七渣做为发酵基质相比，可以显著提高所产漆酶的酶活，而且变废为宝，不仅减少了其对环境造成的污染，还能提供一种低成本漆酶。

摘要： 本发明公开了一种运用特定区段随机突变法改造漆酶的方法及漆酶菌株lac123。本发明通过分析，选定LAC1第二结构域和第三结构域靠近漆酶活性位点附近的重要功能区段作为靶标序列，在对该序列DNA进行化学合成时，采用简并引物法在特定的若干个碱基位点引入随机突变，并将合成好的随机片段通过同源重组的方法，对野生酶的相同片段进行替换，构建包含特异区段特定位点DNA序列的随机突变库，通过二代测序对库容量进行检测，并对随机突变库中的大肠杆菌克隆进行漆酶活性的批量筛选，初筛到了5株酶活有所提升的漆酶，经过摇瓶复筛得到一株酶活提升2.3倍的突变漆酶菌株LAC123，其表达蛋白序列如SEQ ID NO:3所示。

摘要： 本发明涉及生物工程技术领域，公开了一种漆酶定向进化方法及突变漆酶基因、表达载体、重组菌株及其脱毒黄曲霉毒素应用，所述漆酶的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示，所述SEQ ID No:1中第235位氨基酸由Ser变为Pro得到突变漆酶，所述突变漆酶的氨基酸序列如SEQ ID No:3所示。本发明的有益效果在于：本发明以在Pichiapastoris中异源表达的漆酶为基础，通过定点饱和突变，并在P.pastoris中异源表达突变漆酶基因，构建了一个“小而精”的饱和突变体文库；最终通过筛选获得了一株重组毕赤酵母突变菌株，其发酵产生的酶蛋白脱毒AFB1的效率提升至1.34倍，突变体蛋白可应用于生物乙醇制备过程中干酒糟及其可溶物(DDGS)中AFB1的同步脱毒。

摘要： 本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种毛栓孔菌漆酶基因的克隆、重组漆酶的制备以及重组漆酶在水稻秸秆产糖中的应用。本发明公开了一种来自毛栓孔菌MX2的漆酶基因LacF，DNA序列如SEQ ID No：1所述。本发明还同时公开了漆酶基因LacF的克隆方法、重组漆酶工程菌的制备方法。本发明的重组漆酶的用途是：用于水稻秸秆产糖。

摘要： 本发明公开一种漆酶EcLac及其应用、以及漆酶基因eclac及其应用；所述漆酶EcLac的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所述。与原始的漆酶Lac相比较，漆酶EcLac的活性提高约3.9倍，使得所述漆酶EcLac具有高产、高活性的优点，且制造成本低，适于工业化生产，解决了现有漆酶的产量过低、活性较低、成本较高的问题。

摘要： 本发明公开了一株产漆酶的粗毛革孔菌NCULAC F1，于2021年6月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC No.M2021731，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。本发明的粗毛革孔菌NCULAC F1具有如下特征：产漆酶活力高，所产漆酶具有良好的热稳定性，并且对金属离子和有机溶剂等具有较高的耐受性。本发明利用粗毛革孔菌NCULAC F1作为产酶菌株，在PDA液体培养基中适量添加硫酸铜大大提高粗毛革孔菌表达高活力的胞外漆酶产量。本发明提供的通过添加硫酸铜提高粗毛革孔菌NCULAC F1制备高活力漆酶粗酶液的方法，具有操作简便、工艺简单、重复性好等特点，所制备的漆酶液活力较高，在工业领域具有良好的应用潜力和开发利用前景。