异源表达

摘要： 芳基硫酸酯酶具有断裂硫酸酯键的功能,并可应用于酶法脱除琼胶上的硫酸基,提高凝胶强度,改善琼胶性能.为了发掘能用于琼胶脱硫的新型芳基硫酸酯酶,本研究根据嗜琼胶华美菌(Formosa agariphila)KMM 3901的基因组注释信息,筛选出了一段芳基硫酸酯酶编码序列OUC-FARS6,并在大肠杆菌中对其进行异源表达,研究该酶的酶学性质,初步探究其在琼胶脱硫中的作用.研究表明,该酶的分子量大小为63 kDa,以对硝基苯硫酸酯(pNPS)为底物反应90 min时的最适温度为45°C,最适pH为9.0.Na+和K+对酶活有促进作用,大部分金属离子、SDS和Na2 EDTA都可抑制该酶酶活.动力学结果显示,该酶的Km值为32.63μmol/L,Vmax值为9.25μmol/(L·min).将琼胶与该芳基硫酸酯酶共同孵育后,琼胶内部空隙变小,呈现出较好的空间网状结构.本研究成功发掘了一个新型芳基硫酸酯酶,该酶具有应用于琼胶脱硫的潜力,同时建立了利用该酶进行琼胶脱硫的催化体系.

摘要： 为获得安全高效的β-葡萄糖苷酶用于生物催化淫羊藿苷水解制备宝藿苷Ⅰ,通过大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pMA5在食品安全菌株枯草芽孢杆菌WB600中异源表达Thermotoga petrophila来源的耐热β-葡萄糖苷酶TpBgl3,研究了所表达重组酶的酶学性质及其水解宝藿苷制备宝藿苷Ⅰ的工艺条件。结果表明,菌株在30°C、SR培养基中发酵培养48 h后,上清液中的β-葡萄糖苷酶酶活力达到69.68 U/mL。重组表达的TpBgl3最适温度为85°C,最适pH为4.0,在65°C、pH4.0下放置3 h仍能保持85%以上的相对酶活。在65°C、pH4.0、酶用量0.16 U/mg、反应时间20 min的优化条件下,其能将10 g/L的淫羊藿苷水解转化为7.50 g/L的宝藿苷Ⅰ,摩尔转化率为98.67%。β-葡萄糖苷酶的枯草芽孢杆菌分泌表达为宝藿苷Ⅰ及其他高附加值苷元类化合物的工业化安全高效生物制备提供了新途径。

摘要： 细菌胶原蛋白制备工艺简单、成本低,在食品、医药材料等领域有着广泛的应用前景,但细菌胶原蛋白的热稳定性低,限制了其应用。该文以截短的酿脓链球菌胶原蛋白Scl2序列为研究对象,通过嵌合富脯氨酸序列,构建了表达高热稳定性重组胶原蛋白的大肠杆菌基因工程菌,并对重组菌株的发酵条件进行优化。结果表明,在诱导菌体浓度为OD_(600)值为2.5,发酵时间为24 h、诱导剂终浓度为1.0 mmol/L、诱导温度为35°C时,富脯氨酸胶原蛋白产量最高。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)和质谱鉴定,亲和纯化后获得高纯度胶原蛋白,圆二色谱实验证明所制备的胶原蛋白能正确折叠形成三股螺旋结构。在N端和C端同时嵌合富脯氨酸序列(Pro-Pro-Gly);的胶原蛋白的热稳定性提高最大,T;值与原始胶原蛋白Sp2B相比提高了23°C,为设计高热稳定性的重组胶原蛋白材料提供了基础。

摘要： 在不同物种中,密码子偏好性存在一定程度的差异。为了研究纤维素酶主要工业生产菌株——里氏木霉(Trichoderma reesei)基因组密码子的偏好性,对里氏木霉9352个基因的编码区进行密码子分析。结果显示,里氏木霉97%的基因GC含量为50%~68%,GC3的平均含量为70.4%。中性分析与ENC-plot分析表明,里氏木霉密码子的使用主要受选择压力的影响。相关性分析结果显示,基因组GC含量与GC1、GC2和GC3显著相关(P<0.05),有效密码子数与GC3显著相关(P<0.05)。此外,在里氏木霉使用频率较高的24个密码子中,有22个均是以GC结尾的。进一步确定了21个高表达优越密码子和4个高表达最优密码子(CUC、GCC、CGC和GGC)。里氏木霉与长梗木霉、粗糙脉孢霉在密码子使用频率上差异较小,与酿酒酵母的差异相对较大。本研究为里氏木霉中的密码子优化提供了理论依据,对开发高效的里氏木霉基因表达宿主以及开发里氏木霉作为合成生物学基盘细胞具有重要的意义。

摘要： 氨基甲酸乙酯是存在于发酵食品中的一种潜在致癌物。生物酶法可有效降解氨基甲酸乙酯。该研究从假丝酵母CCTCC AY 2017001基因组中克隆了氨基甲酸乙酯水解酶基因cpUH,并实现了其在Escherichia coli中的高效表达。实验结果表明,cpUH基因大小为1656 bp,编码552个氨基酸;重组蛋白大小约为60 kDa,纯化后比酶活力为3.10 U/mg;cpUH的最适反应温度和pH分别为40°C和7.5,其在25~30°C和pH 6.0~9.0均有较好的稳定性;金属离子Cu^(2+)、Zn^(2+)明显抑制酶活力,其余Fe^(3+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)、Co^(2+)、Mg^(2+)都对酶活力有抑制作用,而EDTA对酶活力无影响;此外,以氨基甲酸乙酯为底物时,其K_(m)和V_(max)值分别为6.01 mmol/L和3.34μmol/min,且cpUH对乙醇具有一定的耐受性,有望应用到酒饮料生产中。

摘要： 谷氨酰胺转氨酶(TGase或TG)是一种可催化蛋白质间形成异肽键,使蛋白质改性的天然酶制剂。本文以蛹虫草基因组为模板,通过PCR扩增得到TGase相似蛋白的基因片段tgM,将其与大肠杆菌-毕赤酵母穿梭表达载体pPIC9K连接,构建重组表达载体pPIC9K-TG,在毕赤酵母中进行表达,实现目的蛋白的胞外分泌表达,结果发酵液中重组TGase的酶活力为100 U/L。本研究为TGase的异源表达及潜在的工业应用提供参考。

摘要： 为实现漆酶基因稳定高效的异源表达,利用基因工程技术构建同源整合表达载体pGQLR,删除其来自原核的DNA序列后电转化至产朊假丝酵母菌(Candida utilis,C.utilis),构建一株表达漆酶的产朊假丝酵母工程菌ZHQX1,并对其遗传稳定性和酶活进行评价。ZHQX1在连续传代100代时外源基因仍稳定存在,保持了良好的遗传稳定性,培养96 h时其漆酶酶活是同时期原始菌—云芝栓孔菌酶活的4.8倍,达到1078.9 U/L。

摘要： 为探究基因组上不同整合位点对外源碱性蛋白酶表达的影响,基于解淀粉芽胞杆菌TCCC 111018基因组信息,通过预测基因组上复制起始位点OriC确定了yaah基因整合位点;与此同时,通过分析6个胞外蛋白酶基因(epr、vpr、mpr、apr、bpr和nprE)单独缺失后对外源碱性蛋白酶酶活力的影响,并对发酵上清液中主要分泌蛋白的分析和质谱鉴定,确定了nprE和amyE基因位置为另外两个整合位点。在确定的3个整合位点处分别整合克劳氏芽胞杆菌来源的碱性蛋白酶基因aprE,并对整合菌株的碱性蛋白酶酶活力进行对比分析,结果表明整合菌株解淀粉芽胞杆菌18-ΔY∷aprE和18-ΔN∷aprE碱性蛋白酶酶活力分别达到784.36 U/mL和1289.09 U/mL,分别比原始菌株提高了15%和88.9%,实时荧光定量PCR和SDS-PAGE凝胶电泳表明18-ΔN∷aprE的碱性蛋白酶的转录水平和表达量均最高,这表明在nprE基因位点整合碱性蛋白酶基因可以有效提高碱性蛋白酶表达量,为进一步构建工业酶生产菌株奠定了基础。

摘要： 为将生长快、发酵时间短、遗传操作便捷的稀有放线菌拟无枝酸菌TNS106开发成异源表达宿主,通过同源重组将内源的瑞斯托霉素生物合成关键基因rpsA替换为ΦC31和ΦBT1噬菌体细菌附着位点attB,清除代谢背景并引入整合位点,得到菌株HXR1;将含有来自天蓝色链霉菌的放线紫红素基因簇或来自刺糖多孢菌的多杀菌素基因簇的质粒转到HXR1进行异源表达,检测发酵产物。结果显示,HXR1成功表达放线紫红素和多杀菌素;与红色糖多孢菌宿主LJ161相比,放线紫红素的产生提前1 d,产量提高1.3倍。拟无枝酸菌异源表达宿主HXR1可为从链霉菌和稀有放线菌中发现新的次级代谢产物提供有用的平台。

摘要： 将合成的来源于长孢洛德酵母菌(Lodderomyces elongisporus)属的氨基甲酸乙酯水解酶基因在大肠杆菌中实现异源表达,并进行纯化及其酶学性质研究。摇床培养后酶的比活力为4.52 U/mg,经过镍离子亲和层析柱纯化至显示单一条带后酶的比活力为9.86 U/mg。酶学性质研究表明,氨基甲酸乙酯水解酶的最适反应温度为30°C;最适pH值为7.0;金属离子Mg^(2+)对该水解酶的酶活有微弱的促进作用,而Cu^(2+)以及Fe^(3+)对酶的活性有强烈的抑制作用;对低含量的乙醇溶液与NaCl溶液有一定的耐受性;并且该水解酶可以对不同底物的酰胺类化合物进行有效降解,以氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)为底物进行反应时测得水解酶的动力学参数K_(m)值为6.64 mmol/L,最大反应速率V_(max)值为8.24μmol/min。

摘要： 本文通过合成加纳链霉菌(Streptomyces ghanaenis ATCC14672)来源的L-谷氨酸氧化酶基因在毕赤酵母中进行异源表达，通过生物转的方法构建串联多拷贝的策略，获得高拷贝的GOLD表达质粒，进一步提高GLOD的表达量，L-谷氨酸氧化酶的比酶活为150.1U/ml。异源表达纯化蛋白最适反应温度40°C，在低于30°C的低温环境里300h后仍具有80%以上的酶活，最适反应PH为6.7，在ph5.5-7.5范围内具有高活性和稳定性。高密度分批补料的策略，使得GOLD异源表达菌种在84小时的诱导发酵之后，细胞密度和最高比酶活达到420g/L和248.7U/ml，金属离子Mg2+可以一定程度上提高该酶的比活性120%。异源高活性的表达对于国内高纯度GOLD的规模化生产奠定了基础。

摘要： 从本实验室保存的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis TCCC11286)中筛选克隆到一种β-甘露聚糖酶编码基因man286,该基因所编码的β-甘露聚糖酶不仅具有较强的酸稳定性,而且对胰蛋白酶具有较好的抗性;采用分子生物学技术对该酶编码基因进行了克隆,并在Pichia pastoris GS115中实现了高效异源表达,并对其分离纯化后的酶学性质进行了深入研究.

摘要： 桑树富含黄酮苷类化合物,利用糖苷酶生物转化可有效提高其生物利用度,对挖掘桑树资源的药食用价值具有重要意义.天然来源的糖苷酶催化选择性高,但分离纯化成本高且含量较低.为此,本文以定向水解芦丁合成异槲皮苷为研究对象,分别探讨了来源于黑曲霉(Aspergillus niger)和拟杆菌属(Bacteroides nordii)这两种基因型(rhaA,rhaB)的α-L-鼠李糖苷酶的异源表达.本文拟改善密码子偏爱性和适应性，将来源于黑曲霉A.niger的rhaA型基因进行密码子优化，获得corhaA基因并展示到酿酒酵母细胞表面。其次，利用大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)作为宿主菌株，实现来源于拟杆菌属B.nordii的rhaB型基因的异源表达。通过酶活力比较，筛选出水解能力相对较高的RhaB型α-L-鼠李糖苷酶在微通道反应器中进行微流控生物催化芦丁水解生成异槲皮苷。将重组RhaB1直接用于微通道反应器内定向水解芦丁进行生物转化，并在微反应器中加入表面活性剂建立共溶剂体系，具有常规反应器所无法比拟的过程强化优势，可大大提高时空合成效率，对珍稀且具有高附加值的黄酮普类天然药物的高效生物制造具有良好的应用前景。

摘要： 为研究解淀粉芽孢杆菌(Bacillus.amyloliquefaciens TCCC11319)发酵液中不同酶组分在降解含铬废弃物中的作用,本文利用PCR法扩增了来源于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus.amyloliquefaciens TCCC11319)的胶原蛋白酶基因col,成功实现了酶在枯草芽孢杆菌(Bacillus.subtillis WB600)中进行表达;同时对重组酶的的酶学性质进行分析,结果表明酶的最适反应温度为40°C,最适反应pH为8.0,金属离子Ca2+、Mg2+对酶有明显的激活作用,而Cr3+、Mn2+、Cu2+、Fe2+对酶有明显的抑制作用,研究结果为胶原蛋白酶在水解制革固体废弃物中的应用奠定了基础.

摘要： 生物质资源在解决能源和环境问题方面有着巨大的潜力,但生物质的高效转化利用尚未取得根本性突破.低等白蚁具有高效转化木质纤维素系统,其肠道消化体系是一个非常高效的"生物反应器".本文阐述了低等白蚁的木质纤维素降解酶系统,共生微生物的多样性及功能和高效降解木质纤维素机制,以及木质纤维素酶异源表达情况。白蚁体内含丰富的木质纤维素降解酶系和高效微生物资源,在白蚁-共生微生物双重作用下,纤维素和半纤维素能够被高效降解.通过分子生物技术,对纤维素酶和半纤维素酶进行异源表达,表达产物活性高.为生物质高效转化利用提供新的方向和思路.

摘要： 脂肪酶是一类酯键水解酶.微生物脂肪酶在应用酶类有巨大的价值,广泛用于食品、医药、洗涤剂、皮革和造纸等工业领域.本研究从Serratia marcescens BOB中克隆得到两条脂肪酶基因,并对其进行异源表达分析.rn 从北极冻土样品中筛选获得高效降解橄榄油的菌株BOB,由形态学和16S rRNA方法,初步鉴定为粘质沙雷氏菌Serratia marcescens,将菌株BOB命名为Serratia marcescens BOB.野生菌发酵液通过超滤和硫酸铵沉淀方法进行浓缩，酶学性质研究表明:野生菌BOB脂肪酶在最适作用温度30°C和最适作用pH7.0时，降解对硝基苯棕搁酸酯C16的酶活力为25.93U/mL;rn Serratia marcescens BOB存在两条脂肪酶相关编码基因，通过PCR方法克隆得到其中一条酯酶/脂肪酶基因lip6，全长801bp,编码266个氨基酸和1个终止密码子。构建重组菌E.Coli BL21-pET 28a(+)-lip6并优化重组菌的诱导条件:在菌体OD600约为0.5时，添加终浓度0.5mmol/L的IPTG,30°C诱导20h后，菌体经过超声波破碎获得大量可溶性蛋白LIPA，催化底物p-NPP的酶活力为520U/L。经过亲和层析柱纯化，SDS-PAGE检测在30kD处得到单一条带，比酶活为22.29U/mg;PCR克隆得到另一条脂肪酶基因1ip18，全长1842bP，编码614个氨基酸。构建重组菌E.Coli BL21-pET-28a(+)-1ip18，重组酶LIPC的酶活力为5.29 U/mL。通过诱导条件优化，LIPC酶活提高1.7倍。经过亲和层析方法纯化后，SDS-PAGE在65 kD处检测到单一条带。酶学性质研究表明:重组酶LIPC是低温中性脂肪酶，最适作用pH和温度分别为7.0和30°C,热稳定性差，具有低温高催化活性(Km值为0.634 mmol/L,Vm值为1.131 mmol/L/min);对有机溶剂(甲醇、乙醇、丙醇、丙三醇等)有较好的耐受性，尤其对50%(v:v)丙三醇溶液的耐受性高达到130%;同时，重组酶高效水解中、长链脂肪酸((C10-C16);rn 构建pPIC9k-lip18重组表达载体，导入毕赤酵母P.pastoris GS115中，重组酶LIPE降解p-NPP的活力为19.75U/mL，经过诱导条件优化和硫酸铵沉淀，重组酶酶活提高3.89倍。酶学性质研究表明:重组酶LIPE的最适作用pH和温度分别为7.5和35°C，在pH6.0-9.0和温度低于40°C时，LIPE蛋白稳定性较好;LIPE蛋白的有机溶剂耐受性以及底物特异性和LIPC蛋白较为相似。

摘要： 木聚糖酶是木聚糖降解酶系中最为关键的酶,在食品、饲料和造纸等多个行业中都有着重要的应用.从特殊环境筛选产酶菌株并得到优良性质的酶,现已成为木聚糖酶研究的重要手段之一.本课题从特殊环境来源菌株中一共克隆得到13条木聚糖酶基因片段,通过TAIL-PCR方法获得其中2个基因的全长,对其中的基因xynSL4进行异源表达和重组酶的酶学特性分析.研究结果如下:rn 1、以木聚糖为初筛培养基的唯一碳源,从大布苏盐碱湖、广西红树林、云南温泉、长富牧场堆肥和南海底泥这5个特殊环境中共筛选得到20株有透明圈且形态各异的菌株;从中克隆得到8条GH10和5条GH11木聚糖酶基因片段,其中6个片段的一致性在70～90％之间,3个GH10木聚糖酶基因片段的一致性小于80％.rn 2、通过TAIL-PCR方法得到2个盐碱湖分离菌来源的GH10木聚糖酶基因全长xynSL3和xynSL4，并对两个全长基因进行分析:①xynSL3共2259bp，编码752个氨基酸，包括预测信号肽、催化结构域和CBM结构域，与已知木聚糖酶的最高一致性为55%;②xynSL4共1143bp，编码380个氨基酸，包括预测信号肽和催化结构域，与已知木聚糖酶的最高一致性为77%。选择xynSL4作为下一步表达、纯化及性质研究的目的基因，并对XynSL4蛋白进行了氨基酸序列比对、三维结构预测及系统发育分析。rn 3、新木聚糖酶基因xynSL4在大肠杆菌中成功实现异源表达。经中空纤维浓缩、硫酸铵沉淀和镍柱亲和层析对酶液进行浓缩纯化，对纯化的XynSL4进行酶学性质测定:①XynSL4最适反应pH为7.0，最适反应温度为70°C，在pH11.0下具有较好的稳定性(剩余酶活大于60% )，为嗜热耐碱木聚糖酶;②XynSL4在70°C下不稳定，木聚糖底物能够保护该酶在高温下所引起的构象改变;③XynSL4对高浓度NaCl具有很好的耐受性，在4 mol/L的NaCl溶液中稳定。β-巯基乙醇、Ca2+对酶活性有明显促进作用，而重金属离子和SDS对XynSL4具有显著抑制作用;④XynSL4对榉木木聚糖的Km、Vmax和Kcat分别为1.450.08 mg/mL,362.74±8.55μmol/(mg·min)和262.62±6.19 s-1;⑤产物分析表明:XynSL4是内切木聚糖酶，其主要水解产物是木糖和木二糖。

摘要： 漆酶是多酮氧化酶家族的成员之一,它含有四个典型铜离子,Ⅰ型铜用于将多酚类底物还原的电子传递给Ⅱ和Ⅲ型铜组成的三铜核心簇,氧气进入漆酶后在三铜核心簇与传递而来的质子和电子反应形成水,整个过程不含其他副反应,因而是环境友好型多酚氧化酶.同时,因为漆酶底物特异性较低,小分子介体可进一步拓宽漆酶作用的底物范围,使得漆酶受到工业应用领域,特别是染料脱色应用的青睐.rn 本文从实验室前期筛选菌株Cerrena sp. HYB07出发，克隆得到多条漆酶基因(包括启动子)及cDNA序列，并进行了生物信息学分析;3条漆酶基因在毕赤酵母中进行异源表达，并对高效表达策略进行初步探讨;对表达的重组漆酶进行酶学性质表征和脱色应用研究，具体研究结果如下:rn 1、通过简并PCR，TAIL-PCR和Site-Finding PCR共克隆出6条新的漆酶同工酶基因，与己知的4条漆酶基因共同构成HYB07漆酶同工酶家族，都具有担子菌漆酶的典型结构特征，上游启动子序列包含了多个顺式作用元件，根据内含子特点、氨基酸组成比例、序列比对、保守性和进化分析，预测Lac3, Lac6和Lac8将具有特殊的生理生化特性。rn 2、共构建了7个pPICZa-Lac载体，将其中的pPICZa-Lac3,Lac6和Lac8转入毕赤酵母X33中进行异源表达和筛选，并通过培养基优化、密码子优化、信号肽选择等高效表达策略的探索，使rLac6在28°C发酵16d达到最高表达量6.33U·mL-1，并将其进行分离纯化和反应动力学测定。rn 3、通过比较HYB07漆酶和重组漆酶的酶学性质可以发现，HYB07家族的漆酶最适pH为3.0-3.5，最适温度为30-55°C，当pH≧4和≦50°C时稳定，对7种常见的水互溶性有机溶剂具有较强的耐受性，Cu2+, Al3+和Mn2+对部分漆酶有促进作用，对EDTA、曲酸和Triton X-100有较强的耐受能力，纯化后的漆酶对多种有机溶剂、金属离子和抑制剂耐受能力得到提高。rn 4、HYB07漆酶发酵液对两种来源的工业废水脱色率达80.3%和58.8%，并可对偶氮类、三苯甲烷类、蕙醒类、靛类等19种染料具有良好的脱色效果，因而具有广泛的工业应用前景。

摘要： 果胶裂解酶是切割多聚半乳糖醛酸α-1,4-糖苷键的一种酶类,能有效水解果胶,在纺织、造纸、食品、饲料等方面都有重大的应用价值.Massilia eurypsychrophila是分离自南极阿斯曼丘陵的一个低温菌,对其进行全基因组测序分析以后发现一个新的果胶裂解酶基因,其编码产物注释为PELI.

摘要： 果胶裂解酶是切割多聚半乳糖醛酸α-1,4-糖苷键的一种酶类,能有效水解果胶,在纺织、造纸、食品、饲料等方面都有重大的应用价值.Massilia eurypsychrophila是分离自南极阿斯曼丘陵的一个低温菌,对其进行全基因组测序分析以后发现一个新的果胶裂解酶基因,其编码产物注释为PELI.

摘要： 本发明公开了一套植物乳杆菌食品级表达系统及其在异源蛋白表达中的应用。所述植物乳杆菌食品级表达系统包含食品级宿主植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）NZ5333、食品级表达载体pSIP497、培养基MRS‑Y和培养基MRS+N；所述食品级宿主植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）NZ5333是采用Cre‑loxP技术敲除植物乳杆菌WCFS1基因组上的glmS基因而获得，丧失合成葡萄糖胺‑6‑磷酸合成酶的能力。所述表达系统在异源蛋白表达中应用，表达效果好。所述表达系统为食品级表达系统，其DNA元件来自于公认安全的微生物，不含抗生素抗性筛选标记。

摘要： 本发明涉及在微生物中异源产生表面活性剂蛋白Lv‑ranaspumin‑1(Lv‑Rsn‑1)预测同种型的经修饰形式，所述表面活性剂蛋白Lv‑Rsn‑1预测同种型的序列是从对来自东北胡椒蛙(Leptodactylus vastus)巢的泡沫蛋白质提取物进行的分析中推理而来。更具体地，本发明涉及以下：两种表面活性剂蛋白，其由Lv‑Rsn‑1预测同种型的经修饰形式组成；两种合成基因，其各自编码Lv‑Rsn‑1预测同种型的所述经修饰形式之一；两种表达盒，其各自包含编码Lv‑Rsn‑1预测同种型的经修饰形式之一的合成基因之一；两种表达载体，其各自包含编码Lv‑Rsn‑1预测同种型的经修饰形式的合成基因之一；以及两种转基因微生物(细菌和酵母)，其各自被所述合成基因之一转化并异源产生Lv‑Rsn‑1预测同种型的经修饰形式之一。Lv‑Rsn‑1尤其具有表面活性剂特性、乳化和分散特性，并且其异源产生使得其能够用于多种应用和工业产品，而无需从来自蛙巢的泡沫中提取。

摘要： 本发明公开了一套植物乳杆菌食品级表达系统及其在异源蛋白表达中的应用。所述植物乳杆菌食品级表达系统包含食品级宿主植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）NZ5333、食品级表达载体pSIP497、培养基MRS‑Y和培养基MRS+N；所述食品级宿主植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）NZ5333是采用Cre‑loxP技术敲除植物乳杆菌WCFS1基因组上的glmS基因而获得，丧失合成葡萄糖胺‑6‑磷酸合成酶的能力。所述表达系统在异源蛋白表达中应用，表达效果好。所述表达系统为食品级表达系统，其DNA元件来自于公认安全的微生物，不含抗生素抗性筛选标记。

摘要： 公开了一种异源二聚体Fc融合蛋白和包含该异源二聚体Fc融合蛋白的药物组合物。该异源二聚体Fc融合蛋白包含免疫球蛋白重链恒定区(Fc)对的第一Fc区和第二Fc区，并且其中IL‑21与该第一Fc区和/或该第二Fc区的N末端或C末端中的至少一项结合，其中该第一Fc区和该第二Fc区的CH3结构域发生突变，从而促进异源二聚体的形成。当使用根据本发明的异源二聚体Fc融合蛋白时，可显著增加包括在异源二聚体Fc融合蛋白内的IL‑21的体内半衰期。

摘要： 本发明公开了一种牙鲆SOCS3基因及其真核表达载体、表达系统和异源表达方法。所述牙鲆SOCS3基因的核酸序列如SEQIDNO.1所示。扩增所述牙鲆SOCS3基因的上游引物如SEQIDNO.2所示，下游引物如SEQIDNO.3所示。本申请在成功克隆牙鲆SOCS3基因的基础上，进一步构建了牙鲆SOCS3基因的真核表达载体pEGFP‑C1‑PoSOCS3，并将其成功转染HEK293T细胞中，荧光倒置显微镜观察牙鲆SOCS3基因在细胞中的亚细胞定位，为后续的牙鲆SOCS3功能研究提供了基础资料。

摘要： 本发明公开了一种合成大麻二酚的表达载体、异源表达方法及应用，通过体外从头设计，通过己酰‑CoA合酶、聚酮肽合酶、橄榄酸合酶、异戊烯基转移酶和大麻二酚酸合酶五种酶，构建5个基因表达盒载体，在烟草中瞬时共转化实验表明，通过上述方式可以实现CBD的高产。本发明利用合成生物学技术手段可实现高效生产CBD，其合成产物中不含THC，测定的CBD含量高；此外，烟草作为农业生产的常规经济作物，其种植技术、田间管理和收获叶片的产量等都有优势，可以大大降低种植成本。

摘要： 本发明公开了一种利用毕赤酵母表达系统异源表达活性膜蛋白的方法。本发明涉及一种重组表达双歧杆菌BB-12的肌球蛋白交叉反应（MCRA）抗原的方法及以及在所述方法中使用的表达宿主，所述表达宿主是pPinkα-HC-MCRA质粒转化的PichiaPink

摘要： 本发明公开了一种异源表达蔗糖异构酶的基因工程菌及应用，属于工业生物技术领域。本发明构建了携带Pgrac100启动子与13种不同信号肽和源自Klebsiella sp.LX3的蔗糖异构酶基因的重组枯草芽孢杆菌，通过比较确定含有WapA信号肽的重组菌的胞外酶活最高，摇瓶培养的胞外酶活达到23.03U/mL，进一步在5L发酵罐中进行发酵，将胞外酶活提高到124.97U/mL，纯化的重组蔗糖异构酶具有优良的酶学性质。本发明为针对蔗糖异构酶高效异源表达及结构功能研究的基础研究提供了一种有效策略，并且为实现蔗糖异构酶在工业上的规模化制备和应用奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种异源表达重组过氧化氢酶的毕赤酵母基因工程菌与应用，属于工业生物技术领域。一种异源表达重组过氧化氢酶的毕赤酵母基因工程菌，携带源自Bacillus subtilis 168的SEQ ID NO.1所示的耐碱过氧化氢酶基因的重组表达载体。本发明利用毕赤酵母异源分泌表达重组过氧化氢酶与从动物肝脏提取或利用原核表达系统获得过氧化氢酶相比，分离纯化流程简便，更容易获得纯酶，因此简化了该酶的生产工艺从而降低生产和使用成本，为需要重组过氧化氢酶纯酶的科学研究和生产实践提供了新方法。

摘要： 本发明公开了一种异源表达黑芥子酶的重组毕赤酵母及其在萝卜硫素制备中的应用，属于生物工程技术领域。本发明首先构建得到一种可异源表达黑芥子酶的重组菌株，并利用该重组菌株发酵生产黑芥子酶后，通过固定化酶催化萝卜硫苷生成萝卜硫素。采用本发明提供的重组毕赤酵母P.pastoris X33/pPICZα‑BMYR制备得到的含有甘蓝蚜虫来源的BMYR在3L发酵罐中制备萝卜硫素时，产量达到0.91g/L，萝卜硫苷的摩尔转化率达到90％，本发明提供的这种生物法制备萝卜硫素的方法，具有反应条件温和、工艺简单、易于控制等优点，同时有利于环境保护，易于推广应用。