通过定向进化手段获得的RSP_2728酯酶突变基因及酯酶在扁桃酸甲酯拆分反应中的应用

摘要

本发明属于基因工程与酶工程领域。公开了酯酶基因RSP-2728的突变基因及其基因工程的应用。通过定向进化手段，采用易错PCR和基因克隆方法，以及一种适用于活性以及立体选择性的高通量筛选方法，通过四轮筛选，获得了最终突变酯酶XLA，XLB，XLC和XLD。将其应用于扁桃酸甲酯的拆分反应中，证实立体选择性最高的突变酯酶XLD其立体选择性与野生型相比较，其对映体选择性(E值)从E＝3.1提高到了E＝30.8；对底物的反应活性最高的XLB与野生型相比较，活性从10U/mg，最高提高到了142U/mg。在酯酶拆分消旋底物或者合成重要的药物中间体中，具有较好的应用前景。