一种mRNA捕获序列、捕获载体的合成方法、高通量单细胞测序文库制备方法

摘要

本发明提供了一种mRNA捕获序列，包括通用引物、稀有酶切位点、细胞标签、随机分子标签和PolyT序列，通过引入稀有酶切位点序列，为后续测序接头连接提供了粘性末端，使cDNA双链两端接上两个不同的测序接头。本发明还提供了一种用于mRNA捕获的捕获载体的合成方法及一种高通量单细胞测序文库制备方法。本发明提供的捕获载体通过在基底材料上原位合成引入稀有酶切位点序列的mRNA捕获序列，采用本发明提供的捕获载体来进行单细胞测序文库的制备，提高单细胞捕获效率以及寡核苷酸标签的标记效率，简化构建文库的流程，并且制得的cDNA双链两端接上两个不同的测序接头，保证一个哑铃型测序文库只组装一条引物及DNA聚合酶，三者的一一对应是保证单分子实时测序的前提。