一种荧光成像方法、实时差分超分辨显微成像方法及装置

摘要

本发明公开了一种荧光成像方法，将两种荧光材料结合制备成一复合荧光材料，复合荧光材料在双波长激光激发下产生两道主要部分不重合的荧光信号；成像时，分别采用对应波长的激光激发复合荧光材料，发出相应波段的荧光。根据上述荧光成像方法可进行实时荧光差分超分辨显微成像。本发明通过调制两束波长激光分别形成高斯光和空心光，通过激光扫描显微装置，分别激发同一复合荧光材料两部分不同荧光信号，进一步使用两个探测通道同时记录两种模式图像，进而将两个通道荧光信号直接相减得到超分辨图像。本发明无需控制切换光束，仅单次扫描即可实现超分辨显微成像，可以解决现有STED技术中大功率损耗光和FED技术中两次扫描的缺陷。