基于运动发酵单胞菌內源CRISPR-Cas系统的基因组大片段高效删除方法及其应用

摘要

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及基于运动发酵单胞菌內源CRISPR‑Cas系统的基因组大片段高效删除方法及其应用。其技术要点包括：构建含人工CRISPR表达单元的质粒；确定大片段编辑靶位点，针对编辑靶位点选取guideRNA序列，并设计引物；将guideRNA引物序列构建至含人工CRISPR表达单元的质粒上，构建载体；将供体DNA序列构建至载体上，获得编辑质粒；将编辑质粒转化至感受态细胞中进行编辑。本发明利用基于运动发酵单胞菌內源CRISPR‑Cas系统的高通量基因编辑平台，实现对该菌株基因组大片段删除的编辑目的，促进代谢工程、系统生物学及合成生物学的发展。