一种红曲色素产生菌株构建方法

摘要

本发明提供了一种红曲色素高产菌株构建方法。该技术方案首先将一对依次含有Hind III、Kpn I、Sac I、Pac I、Pme I、Xho I、Xba I、Bgl II酶切位点的寡核苷酸序列与植物双元质粒pCambia0380连接，构建得到双元质粒表达载体pCambia0380G；而后，将hph表达盒片段与之连接，获得双元质粒敲除载体pHph0380；在此基础上，分别扩增gltp1基因的上、下游同源臂片段，连接至双元质粒敲除载体pHph0380上，从而获得双元质粒敲除载体pHph0380‑GLTP。将该载体pHph0380‑GLTP由根癌农杆菌EHA105介导转化至亲本红色红曲霉CICC41233中，完成高产菌株的构建。实验验证表明，本发明所构建的红曲色素高产菌株不仅提高了红曲色素的整体产率，而且可定向累积醇溶性色素，同时，使发酵过程中红曲色素的积累时间显著提前。