CRISPR-Cas9特异性敲除大豆脂肪氧化酶基因的方法及其应用

摘要

本发明公开了CRISPR‑Cas9特异性敲除大豆脂肪氧化酶基因的方法及其应用，属于大豆分子育种和生物技术领域。该方法包括：在大豆脂肪氧化酶基因编码区设计同时靶向高度同源的GmLox1和GmLox2的sgRNA‑GmLox1/2，以及靶向GmLox3的sgRNA‑GmLox3；针对每个sgRNA单独构建CRISPR‑Cas9基因敲除载体，之后混合侵染大豆子叶节；经大豆稳定遗传转化，植株Gmlox‑28和Gmlox‑60同时敲除3个GmLox基因；自交两代之后，在T₂代植株中筛选到5株T‑DNA与编辑位点分离的GmLox全缺失突变体。该方法为直接且有目标的快速创制无豆腥味大豆新种质提供新策略。