抑制甲型流感病毒复制的shRNA序列及其应用

摘要

本发明提供了一段shRNA序列：GCTGGTCTGACTCACATAATG，将该序列退火后，插入siRNA表达质粒，转化大肠杆菌。经过克隆PCR筛选阳性克隆，保留菌种。扩增基因工程菌，提取纯化质粒。将该质粒转染MDCK细胞。然后以流感病毒感染该细胞，48小时后，收集细胞培养上清，提取总RNA，以RT‑PCT方法检测培养上清中的流感病毒含量。以该质粒与PEI复合物形式给予BALB/C小鼠雾化吸入，连续3天，每天30分钟。然后以流感病毒攻击该小鼠，3天后处死小鼠。取出肺脏制成组织匀浆，从组织匀浆中提取总RNA以RT‑PCT方法检测培养上清中的流感病毒含量。根据不同组流感病毒的含量可以确定该shRNA具有抑制流感病毒复制的作用。