靶向VP1和VP2双拷贝shRNA重组表达质粒抑制传染性法氏囊病病毒复制的研究

摘要

为抑制传染性法氏囊病病毒(IBDV)的复制,构建靶向IBDV VP1和VP2基因的鸡双向U6启动子(chU6)双拷贝shRNA重组表达质粒pchU6-shRNA12,转染鸡胚成纤维细胞(CEF),接种IBDV,72h后,未出现细胞病变效应(CPE),病毒滴度小于101TCID50/0.1mL;而两个对照组均出现明显的CPE,病毒滴度均达到108.75TCID50/0.1mL.将pchU6-shRNA12与IBDV混合,接种于10日龄SPF鸡胚尿囊腔,96h后,鸡胚发育良好,病毒滴度小于101ELD50/0.1mL,荧光定量RT-PCR检测VP1和VP2基因,比单纯接种IBDV组分别降低了92％和95％;而两个对照组鸡胚均死亡,病毒滴度均达到107.00ELD50/0.1mL.本研究结果表明,chU6启动子在双拷贝shRNA重组表达质粒pchU6-shRNA12中能高效驱动双拷贝shRNA的转录,生成的siRNA在CEF(in vitro)和鸡胚体内(in vivo)均能有效抑制IBDV的复制。