一种基于切刻酶的双链核酸等温扩增检测新方法

摘要

本发明涉及对双链核酸进行等温扩增及检测的方法，属于核酸检测领域。更具体的，涉及在切刻内切酶和聚合酶的联合作用下从双链核酸靶标扩增出单链靶标，并应用两条扩增引物和一条置换引物在等温条件下高效特异性扩增目标核酸的方法。本发明中通过对一条扩增引物与扩增模板退火区域的选择，实现了仅用三条引物就可完成对靶标核酸的高效特异扩增。并且模板的3’端与该引物完全互补，在提高了特异性的同时避免了传统技术中存在置换引物占据扩增引物互补位置而引起的阻滞扩增的问题。扩增引物还可以设计为分子信标的形式，只有被正确扩增的靶标序列才会与该种形式的引物退火并产生后续荧光信号，具有更好的特异性。