一种筛选嗜酸性氧化硫硫杆菌无标记基因敲除菌株的方法

摘要

本发明公开了一种筛选嗜酸性氧化硫硫杆菌无标记基因敲除菌株的方法，采用构建目标基因的敲除质粒和携带I-SceI基因的诱导质粒，通过接合转移导入嗜酸性氧化硫硫杆菌中，使用抗性标记筛选单交换子，使用蓝白筛选初筛双交换子。本发明首次建立了嗜酸性氧化硫硫杆菌的无标记基因敲除方法，首次将β-半乳糖苷酶蓝白筛选应用于双交换子的筛选，不仅能快速、稳定、高效地敲除目标基因，而且克服了已有无标记基因敲除流程中因缺少选择压力造成的筛选困难这一瓶颈，缩短了双交换子筛选时间、提高了筛选效率、减少了筛选成本，为嗜酸性氧化硫硫杆菌稳定的遗传改造提供了便利的新方法。