大肠杆菌磷酸果糖激酶基因在极端嗜酸性氧化硫硫杆菌中的表达

摘要

构建了含大肠杆菌磷酸果糖激酶(EC 2.7.1.11)基因pfkA的重组质粒pSDK-1,利用大肠杆菌pfk缺陷株筛选含目的基因的重组质粒,通过接合转移的方式将其导入氧化硫硫杆菌Tt-Z2中,接合转移频率达2.6×10-6.重组质粒在Tt-Z2中有较好的稳定性,在无选择压力条件下传代50次基本保持稳定(重组质粒保留68%以上).酶活性测定、SDS-PAGE及RT-PCR结果表明,pfkA基因在氧化硫硫杆菌中得到表达,但其表达水平低于大肠杆菌.葡萄糖可促进含pSDK-1的氧化硫硫杆菌Tt-Z2的生长,而对照菌株的生长则未受明显影响,说明重组菌可部分利用葡萄糖作为碳源生长.