一种胞外生产重组α-环糊精葡萄糖基转移酶的生产方法

摘要

本发明公开了一种利用温度两阶段控制策略和恒溶氧补料分批技术高密度培养大肠杆菌生产重组α-环糊精葡萄糖基转移酶的发酵生产工艺，属于发酵工程技术领域。本发明采用重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)作为生产菌株，以5-10％的接种量接种后进行分批发酵，溶氧上升到80-100％左右，开始流加补料液，菌体进行指数生长，菌体生长阶段控制温度33-37℃，溶氧维持在20-30％；当菌体OD600达到15-30左右，添加0.75-1.5％(质量体积分数)甘氨酸；当菌体OD₆₀₀达到45-60时，将温度降为23-27℃并连续补加0.2-0.4g·l^-1·h^-1乳糖，同时采用梯度递减的方式补加补料液；发酵培养30-35小时左右，胞外α-环糊精葡萄糖基转移酶的酶活达到200-280U/mL。采用此策略进行发酵实现了α-环糊精葡萄糖基转移酶的高效胞外表达，大大提高了生产强度。本发明原料来源广泛、工艺简单易行，适于大规模生产；有效的胞外表达，大大减少了宿主菌杂蛋白的污染，提高蛋白纯化效率。本发明为α-环糊精葡萄糖基转移酶的大规模生产奠定了基础。