公开/公告号CN116930505A
专利类型发明专利
公开/公告日2023-10-24
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申请/专利权人 中国人民解放军总医院第五医学中心;
申请/专利号CN202310046926.3
申请日2023-01-16
分类号G01N33/68(2006.01);G01N15/14(2006.01);G01N21/64(2006.01);
代理机构
代理人
地址 100071 北京市丰台区东大街8号
入库时间 2024-04-18 19:48:15
技术领域
本发明涉及血液系统恶性肿瘤的临床和实验室诊断领域,具体是利用VSIG4膜蛋白作为生物标志物诊断急性单核细胞白血病和急性髓单核细胞白血病。
背景技术
急性单核细胞白血病(Acute monocytic leukemia)即急性髓系白血病法-美-英协作组(FAB)分类中的M5亚型(FAB M5),是源自单核细胞的恶性肿瘤。依据骨髓穿刺涂片形态学分析,FAB M5还可以分为M5a和M5b两个亚型,M5a为未分化型,诊断标准为原始单核细胞比例≥80%;M5b为部分分化型,诊断标准为原始单核细胞比例<80%,其余为幼稚及成熟单核细胞。但是,白血病细胞具有生物学异质性、分化程度差异性和细胞形态多形性的特点,仅仅依靠形态学急性白血病亚型的诊断符合率能达到60-80%。另外,急性髓系白血病FAB M4(即急性髓单核细胞白血病)有部分患者免疫表型为表达CD4、CD11b、CD11c、CD14、CD64和HLA-DR,这部分白血病和急性单核细胞白血病二者均为起源于单核细胞的恶性肿瘤
我们在前期针对淋巴瘤相关噬血淋巴组织细胞综合征(hemophagocyticlymphohistiocytosis,HLH)的生物标志物研究中,发现并证实血清可溶性VSIG4(sVSIG4)可作为巨噬细胞活化时的一个新标志物,用于诊断淋巴瘤相关HLH
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的生物标志物来诊断急性单核细胞白血病和急性髓单核细胞白血病,旨在对急性单核细胞白血病亚型进行明确和细分,有助于急性单核细胞白血病和急性髓单核细胞白血病的精确诊断和治疗。
为达到上述目的,本发明提供如下的技术方案:抗VSIG4膜蛋白胞外段的特异性抗体结合流式细胞术检测和分析VSIG4在急性单核细胞白血病和急性髓单核细胞白血病瘤细胞上的表达情况,从而做出急性单核细胞白血病和急性髓单核细胞白血病为表达或者不表达VSIG4亚型的免疫学表型诊断。
所述急性单核细胞白血病和急性髓单核细胞白血病主要为病法-美-英协作组(FAB)分类中的M5亚型(FAB M5)和急性髓系白血病FAB M4(即急性髓单核细胞白血病)中部分为单核-巨噬细胞免疫表型的恶性肿瘤
所述VSIG4膜蛋白的检测是利用VSIG4膜蛋白胞外段作为抗原制备的特异性抗体结合流式细胞术或者免疫荧光显微镜来进行检测和分析,抗体可以是直接标记,也可以是间接标记。
本发明相较于急性单核细胞白血病和急性髓单核细胞白血病的免疫表型分型,主要的优点在于:
现有的大多数研究证实,生理情况下,VSIG4膜蛋白只在一部分单核-巨噬细胞表面表达,在其他细胞表面不表达,其表达具有非常强的细胞特异性。
针对急性髓系白血病,即使采用了MICM分型,也无法将所有类型和亚型完全精确诊断,VSIG4膜蛋白可直接将一部分起源于单核细胞的急性单核细胞白血病FAB M5以及部分FAB M4进行精确分型和诊断,为今后的精准治疗提供了免疫学表型依据。
附图说明
图1举例说明VSIG4膜蛋白在健康对照(Health control)、急性髓单核细胞白血病M4、急性单核细胞白血病M5和慢性髓系白血病各一例骨髓穿刺标本中表达的流式检测结果显示,在此例急性髓单核细胞白血病M4中,VSIG4膜蛋白表达呈阳性,在其他三例中检测为阴性。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例:人骨髓穿刺标本中VSIG4膜蛋白的流式细胞术检测
为了检测人骨髓穿刺标本单个核细胞表面VSIG4膜蛋白的表达,进行了如下的流式细胞术检测方法,所述方法的具体步骤为:
1.样品准备:将人骨髓穿刺标本从含抗凝剂(乙二胺四乙酸)的样品管中取100-400μl移至流式管中,加入红细胞裂解液2ml,混匀,室温下裂解5min后,1500转/分,离心5min,去上清。
2.样品染色:加入100μl pH值7.4的磷酸盐缓冲液至上一步制备好的样品中,加入不同免疫荧光标记的抗人VSIG4胞外段和抗人CD14的抗体,使其终浓度均为1μg/ml,4℃冰箱中避光放置30分钟。
3.洗脱:pH值7.4的磷酸盐缓冲液2ml加入至上一步的样品染色管中,1500转/分,离心5min,去上清,然后再重复洗脱一次,加入含0.1%福尔马林pH值7.4磷酸盐缓冲液400μl。
4.流式细胞术检测:将染色好的样品放于流式细胞仪中,完成上机检测并分析VSIG4膜蛋白在单个核细胞中的表达情况,做出诊断。
主要参考文献:
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机译: 三氧化二砷(和美拉莫洛)制剂在治疗实体癌症中的用途,例如急性粒细胞性白血病,急性单核细胞白血病,急性红细胞白血病,急性巨核成纤维细胞白血病,急性骨髓单核细胞白血病或急性未分化白血病
机译: 急性肾损伤特异性生物标志物,急性肾损伤诊断方法,急性肾损伤试剂盒,动物处理方法和急性肾损伤药物
机译: 急性肾功能衰竭特异性生物标志物,急性肾功能衰竭诊断方法,急性肾功能衰竭试剂盒,动物处理方法和急性肾功能衰竭药物