Apo-AI检测试剂在变应性鼻炎免疫治疗疗效评估中的应用

摘要

本发明公开了Apo‑AI检测试剂在变应性鼻炎免疫治疗疗效评估中的应用。本发明发现Apo‑AI可以作为变应性鼻炎免疫治疗预后诊断的有效标志物，其不仅可以判断变应性鼻炎的严重程度，还能预测并监测变应性鼻炎免疫治疗后预后，而且具有高灵敏度和高特异度；通过定量检测Apo‑AI的试剂可以制备判断变应性鼻炎严重程度、预后评估的产品；不仅可以用于变应性鼻炎严重程度的区分，还有助于预后评估，进而实行个体化治疗，最终给患者带来生存获益。

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及Apo-AI检测试剂在变应性鼻炎免疫治疗疗效评估中的应用。

背景技术

变应性鼻炎(Allergic rhinitis,AR)是一种由免疫球蛋白E介导的对过敏原过度反应继而诱发的II型免疫性疾病，其发病率高达10-30％，尤其多见于儿童患者。AR的主要症状包括鼻塞、流涕、鼻痒和喷嚏，严重影响患者的生活质量并造成巨大的经济成本。按照最新版的变应性鼻炎及其对哮喘的影响指南(ARIA指南)，AR的主要治疗策略包括：避免接触变应原，鼻用糖皮质激素和/或抗组胺药物等药物的治疗，变应原的特异性免疫治疗(AIT)。

与避免对变应原接触和药物治疗等短期控制症状的治疗方案不同，AIT中的灭活的变应原提取物通过与患者反复接触，并逐渐增加剂量，可使机体产生免疫耐受，从而产生长期疗效。然而，有相当一部分变应性鼻炎患者存在依从性差，并对AIT治疗效果存疑的情况，从而自行中断治疗造成了大量的社会医疗资源浪费和个人经济损失。因此，寻找可监测AIT疗效诊断的生物标记物，是变应性鼻炎和AIT研究的重点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种变应性鼻炎严重程度判断、免疫治疗疗效评估标志物及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一方面，提供定量检测载脂蛋白AI(Apo-AI)的试剂在制备变应性鼻炎严重程度判断、免疫治疗预后评估产品中的应用。

在本发明的一些实施方式中，所述试剂包括采用酶联免疫法检测载脂蛋白AI的试剂；但并不局限于此，其他可检测载脂蛋白AI表达水平的方法可以达到同样的效果。

在本发明的一些实施方式中，所述试剂包括抗体；但并不局限于此，其他可检测载脂蛋白AI表达水平的试剂可以达到同样的效果。

在本发明的一些实施方式中，所述产品包含试剂、试剂盒、试纸或芯片。

在本发明的一些实施方式中，所述检测的样本选自组织、细胞和流体。

在本发明的一些实施方式中，所述流体包括血液、淋巴、妇科流体、囊液、尿液、眼泪和通过支气管灌洗和/或腹膜冲洗收集的流体中的至少一种。

在本发明的一些实施方式中，所述受试者的Apo-AI表达水平与免疫治疗预后正相关，免疫治疗之后Apo-AI表达水平越高，其预后越好；可用于变应性鼻炎免疫治疗预后评估。

在本发明的一些实施方式中，所述受试者的Apo-AI表达水平与变应性鼻炎严重程度负相关，Apo-AI表达水平越低，其变应性鼻炎越严重，可用于变应性鼻炎严重程度的判断。

本发明的第二方面，提供一种判断变应性鼻炎严重程度或评估免疫治疗预后的方法，包括以下步骤：

(1)获得受试者样本中载脂蛋白AI表达水平；

(2)根据所述载脂蛋白AI表达水平判断所述变应性鼻炎严重程度或评估免疫治疗预后；

所述方法不适用于疾病的诊断或治疗。

本发明的第三方面，提供一种计算机可读存储介质，存储有计算机可执行指令，所述计算机可执行指令用于执行本发明第二方面所述的方法。

本发明的第四方面，提供一种判断变应性鼻炎严重程度或评估免疫治疗预后风险的系统，包括：

检测装置，用于确定受试者样本中载脂蛋白AI表达水平；

输出装置，用于根据所述载脂蛋白AI表达水平判断所述变应性鼻炎严重程度或评估免疫治疗预后。

在本发明的一些实施方式中，所述载脂蛋白AI表达水平相对于正常人越低，其变应性鼻炎越严重。

在本发明的一些实施方式中，免疫治疗后载脂蛋白AI表达水平相对于免疫治疗前越低，其预后越差；反之，则预后越好。

本发明的有益效果是：

本发明公开了Apo-AI可以作为变应性鼻炎免疫治疗预后诊断的有效标志物，其不仅可以判断变应性鼻炎的严重程度，还能预测并监测变应性鼻炎免疫治疗后预后，而且具有高灵敏度和高特异度；通过定量检测Apo-AI的试剂可以制备判断变应性鼻炎严重程度、预后评估的产品；不仅可以用于变应性鼻炎严重程度的区分，还有助于预后评估，进而实行个体化治疗，最终给患者带来生存获益。

附图说明

图1为Apo-AI在变应性鼻炎和正常人外周血蛋白表达对比示意图；

图2为Apo-AI与变应性鼻炎鼻部总症状(TNSS)相关性研究示意图；

图3为Apo-AI对变应性鼻炎严重程度预测的ROC曲线图；

图4为变应性鼻炎患者在接受免疫治疗前后TNSS评分的变化情况；

图5为变应性鼻炎患者在接受免疫治疗前后Apo-AI浓度的变化情况；

图6为Apo-AI对变应性鼻炎免疫治疗预后评估的ROC曲线图。

具体实施方式

以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。

术语“标志物”或“生物标志物”是与另一种表型状态(例如未患有疾病)相比，在取自一种表型状态(例如患有疾病)的受试者的样本中差别存在的有机生物分子。如果在不同组中生物标志物的平均或中位水平、例如表达水平经计算为统计学显著。

本文所用的术语“样本”是指自受试者分离的类似细胞或组织的收集物，以及在受试者内存在的组织、细胞和流体。术语“样本”包括来自受试者的任何体液(例如血液、淋巴、妇科流体、囊液、尿液、眼泪和通过支气管灌洗和/或腹膜冲洗收集的流体)或细胞。在一个实施方案中，从受试者取出所述组织或细胞。在另一实施方案中，所述或细胞存在于所述受试者内。其它受试者样本包括泪滴、血清、脑脊液、粪便、痰和细胞提取物。在一个实施方案中，生物学样本包含来自测试受试者的蛋白分子。在另一实施方案中，生物学样本可包含来自测试受试者的mRNA分子或来自测试受试者的基因组DNA分子。

术语“检测”意指包括检测样本中标志物的存在或不存在、定量检测样本中标志物的量、和/或确定生物标志物的类型的方法。

术语“试剂盒”是包含特异性检测本发明的标志物的至少一种试剂例如探针、引物或抗体的任何制品(例如包装或容器)，所述制品作为用于进行本发明的方法的一个单位来推销、分配或销售。在某些实施方案中，试剂盒可包括基质，例如包含本发明的一种或多种标志物的捕获试剂和/或与本发明的一种或多种标志物结合的捕获试剂的基质。在一些实施方案中，这样的试剂盒包含用于使用质谱测定标志物的水平的使用说明书。

受试者或患者可以包括但不限于哺乳动物，例如牛、鸟、犬、马、猫、绵羊、猪或灵长动物(包括人及非灵长动物)。

实验材料：

1、抗体：anti-Apo-AI抗体(生产商：R&D system)；

2、其它材料：

FACS buffer：3％小牛血清in PBS；锥形管(BD Labware)；缓冲液(PBS)；

3、仪器：BD酶联免疫吸附装置。

实施例1：通过检测Apo-AI表达水平判断患者的变应性鼻炎严重程度

实验对象及材料：

1、实验对象：

变应性鼻炎患者和正常对照组的外周血样本来自广州市妇女儿童医疗中心；收集晨空腹抗凝血。

2、具体实验：

(1)收集外周血，置于冰块上；

(2)将步骤(1)中血液移到10mL锥形管中，每毫升血加入15～25单位肝素，并加入等体积缓冲液；

(3)将步骤(2)中抗凝血离心处理(25℃下，离心速度为1600～2000r/min，离心20min)，弃去沉淀，保留上清液；

(4)取(3)中上清液，用酶联免疫吸附装置检测APO-AI表达水平。

3、实验结果：

其中，结合图1可知，变应性鼻炎患者Apo-AI表达水平较正常人显著降低。图2中相关系数r＝-0.64，这说明变应性鼻炎严重程度与外周血血清中Apo-AI的表达水平密切相关；通过图3可知，通过检测Apo-AI表达水平，可以判断变应性鼻炎严重程度(当Apo-AI为19.89mg/dl时，其敏感度和特异度分别为90％和94％，处于最优水平)。

实施例2：通过监测变应性鼻炎患者在接受免疫治疗前后APO-AI表达水平的变化判断变应性鼻炎免疫治疗预后

实验对象及材料：

1、实验对象：

变应性鼻炎患者的外周血样本及同一患者接受免疫治疗后的外周血样本，样本来自广州市妇女儿童医疗中心。本申请针对于变应性鼻炎患者的免疫治疗方法为皮下注射(SCIT)，注射用药为：阿罗格(螨变应原注射液)，适应症为由吸入性变应原诱发、IgE介导的变态反应性疾病，注射疗程三年。

2、实验方法：同实施例1。

3、实验结果：

结合图4和图5可知，当变应性鼻炎患者在接受特异性免疫治疗后，APO-AI显著升高，患者的临床评分显著降低，提示Apo-AI可作为疗效预测的指标。结合图6可知，通过检测Apo-AI表达水平，可以预测免疫治疗的疗效(当Apo-AI为18.64mg/dl时，其敏感度和特异度分别为80％和90％，处于最优水平)。

实施例3

本申请还公开了一种变应性鼻炎严重程度判断、预后诊断试剂，诊断试剂包含用于检测外周血APO-AI表达水平的物质，它包含用于检测外周血APO-AI的抗体，携带荧光标记的抗体。

因此，本发明设计的诊断试剂盒能有效判断变应性严重程度或监测变应性鼻炎患者免疫治疗前后外周血APO-AI表达水平，为预测AIT疗效提供重要的指导意义。

此外，本发明设计的诊断试剂盒还能与其它检测指标一起协同作用。

实施例4

一种判断变应性鼻炎严重程度或评估免疫治疗预后的方法；

包括以下步骤：

(1)获得受试者样本中载脂蛋白AI表达水平；

(2)根据载脂蛋白AI表达水平判断变应性鼻炎严重程度或评估免疫治疗预后；该方法不适用于疾病的诊断或治疗。

还提供一种计算机可读存储介质，存储有计算机可执行指令，计算机可执行指令用于执行上述的方法。

实施例5

一种判断变应性鼻炎严重程度或评估免疫治疗预后风险的系统，包括：

检测装置，用于确定受试者样本中载脂蛋白AI表达水平；

输出装置，用于根据载脂蛋白AI表达水平判断变应性鼻炎严重程度或评估免疫治疗预后。

上述具体实施方式对本发明作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。