一种提高2-甲氧基雌二醇载药量和口服生物利用度的纳米制剂的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及提高2‑甲氧基雌二醇载药量和口服生物利用度的纳米制剂的制备方法及其应用，可有效解决现有2‑甲氧基雌二醇纳米粒制剂载药量低，稳定性差和口服生物利用度低的问题，方法是，在乙醇中加入大豆磷脂和玉米醇溶蛋白的混合物，超声，磁力搅拌，再加入2‑ME的乙醇溶液，再磁力搅拌，得乙醇相；将乙醇相在磁力搅拌下滴加到胆酸钠超纯水溶液中，成混合液，将混合液置于水浴锅中，磁力搅拌，得到2‑ME纳米粒混悬液；在2‑ME纳米粒混悬液中加入精氨酸，冻干，即得2‑甲氧基雌二醇纳米制剂。本发明原料丰富，组分科学合理，制备方法简单，产品质量好，可有效提高2‑甲氧基雌二醇载药量和口服生物利用度，提高疗效，是抗肿瘤药物上的一大创新。

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，特别是一种提高2-甲氧基雌二醇（2-ME）载药量和口服生物利用度的纳米制剂的制备方法及其应用。

背景技术

2-ME是天然甾体化合物在体内的生理代谢产物，是一种广谱抗肿瘤药物。2-ME能明显抑制增殖较快的肿瘤细胞，但是不会对正常的细胞产生伤害，因此2-ME在抗肿瘤药物这一领域成为一种有很好应用前景的药物。但是国外临床Ⅰ期和Ⅱ期试验结果表明：其普通制剂（如片剂、胶囊）口服给药后，难以维持有效血药浓度，临床试验结果不理想。进一步的研究表明，2-ME口服给药后，存在明显的肝首过效应和肠吸收饱和现象，而且药物半衰期短，消除快。纳米制剂近年来研究较为广泛，其主要特点是增加药物溶解度，增强胃肠道稳定性，增强肠吸收，提高口服生物利用度，增加疗效，减小毒副作用。根据2-ME的特点和体内过程，尝试采用纳米粒，以提高其口服生物利用度。我们的实验结果证实，这是一个提高2-ME口服生物利用度的有效策略。

不过目前报道的2-ME的一些纳米载体不能全部采用药用辅料，而且载药量低，稳定性差，限制其临床开发和应用，因此如何采用药用辅料制备较稳定的纳米粒并提高载药量和口服生物利用度是目前国内外研究的焦点之一，也是临床开发应用的重要技术障碍，因此如何研制一种提高2-ME载药量和口服生物利用度的纳米制剂，并积极推动2-ME口服制剂的开发，目前国内外尚未见相关公开报道。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种提高2-甲氧基雌二醇载药量和口服生物利用度的纳米制剂的制备方法及其应用，可有效解决现有2-甲氧基雌二醇纳米粒制剂载药量低，稳定性差和口服生物利用度低的问题。

本发明解决的技术方案是，一种提高2-甲氧基雌二醇载药量和口服生物利用度的纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：

1）在5mL体积浓度为60%-90%乙醇中，加入重量比为1︰0.5-6的大豆磷脂（PC-80）和玉米醇溶蛋白（Zein）的混合物40-100mg，超声10-30min，磁力搅拌1h，再加入1mL 2-ME的乙醇溶液，乙醇溶液中2-ME与玉米醇溶蛋白（Zein）的重量比为1︰2-20，再磁力搅拌1h，得到乙醇相；

2）将乙醇相在磁力搅拌下以1-5mL/min的速度缓慢滴加到体积浓度0.1%-0.8%胆酸钠超纯水溶液中，成混合液，乙醇相与胆酸钠超纯水溶液的体积比为1︰1-20，将混合液置于40℃-70℃的水浴锅中，磁力搅拌2h后，得到2-ME纳米粒混悬液；

3）在2-ME纳米粒混悬液中加入2-ME纳米粒混悬液体积1%-5%的精氨酸，精氨酸作为冻干保护剂和稳定剂，再置于冻干机进行冻干，即得2-甲氧基雌二醇纳米制剂（冻干粉）。

本发明方法制备的2-甲氧基雌二醇纳米制剂（冻干粉）具有能提高载药量和口服生物利用度，实现2-甲氧基雌二醇纳米制剂（冻干粉）在制备提高2-甲氧基雌二醇载药量和生物利用度纳米制剂药物中的应用。

本发明原料丰富，组分科学合理，制备方法简单，产品质量好，可有效提高2-甲氧基雌二醇载药量和口服生物利用度，提高疗效，是抗肿瘤药物上的一大创新，有显著的经济和社会效益。

具体实施方式

以下结合具体情况和实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

本发明在具体实施中可由以下实施例给出。

实施例1

本发明一种提高2-甲氧基雌二醇载药量和口服生物利用度的纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：

1）在5mL体积浓度为70%乙醇中，加入重量比为1︰1的大豆磷脂（PC-80）和玉米醇溶蛋白（Zein）的混合物60mg，超声15min，磁力搅拌1h，再加入1mL 2-ME的乙醇溶液，乙醇溶液中2-ME与玉米醇溶蛋白（Zein）的重量比为1︰2，再磁力搅拌1h，得到乙醇相；

2）将乙醇相在磁力搅拌下以2mL/min的速度缓慢滴加到体积浓度0.1%胆酸钠超纯水溶液中，成混合液，乙醇相与胆酸钠超纯水溶液的体积比为1︰1，将混合液置于60℃的水浴锅中，磁力搅拌2h后，得到2-ME纳米粒混悬液；

3）在2-ME纳米粒混悬液中加入2-ME纳米粒混悬液体积1%的精氨酸，精氨酸作为冻干保护剂和稳定剂，再置于冻干机进行冻干，即得2-甲氧基雌二醇纳米制剂冻干粉。

实施例2

本发明一种提高2-甲氧基雌二醇载药量和口服生物利用度的纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：

1）在5mL体积浓度为65%乙醇中，加入重量比为1︰3的大豆磷脂（PC-80）和玉米醇溶蛋白（Zein）的混合物80mg，超声20min，磁力搅拌1h，再加入1mL 2-ME的乙醇溶液，乙醇溶液中2-ME与玉米醇溶蛋白（Zein）的重量比为1︰5，再磁力搅拌1h，得到乙醇相；

2）将乙醇相在磁力搅拌下以1mL/min的速度缓慢滴加到体积浓度0.3%胆酸钠超纯水溶液中，成混合液，乙醇相与胆酸钠超纯水溶液的体积比为1︰5，将混合液置于65℃的水浴锅中，磁力搅拌2h后，得到2-ME纳米粒混悬液；

3）在2-ME纳米粒混悬液中加入2-ME纳米粒混悬液体积2%的精氨酸，精氨酸作为冻干保护剂和稳定剂，再置于冻干机进行冻干，即得2-甲氧基雌二醇纳米制剂（冻干粉）。

实施例3

本发明一种提高2-甲氧基雌二醇载药量和口服生物利用度的纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：

1）在5mL体积浓度为80%乙醇中，加入重量比为1︰6的大豆磷脂（PC-80）和玉米醇溶蛋白（Zein）的混合物100mg，超声30min，磁力搅拌1h，再加入1mL 2-ME的乙醇溶液，乙醇溶液中2-ME与玉米醇溶蛋白（Zein）的重量比为1︰10，再磁力搅拌1h，得到乙醇相；

2）将乙醇相在磁力搅拌下以3mL/min的速度缓慢滴加到体积浓度0.5%胆酸钠超纯水溶液中，成混合液，乙醇相与胆酸钠超纯水溶液的体积比为1︰10，将混合液置于50℃的水浴锅中，磁力搅拌2h后，得到2-ME纳米粒混悬液；

3）在2-ME纳米粒混悬液中加入2-ME纳米粒混悬液体积3%的精氨酸，精氨酸作为冻干保护剂和稳定剂，再置于冻干机进行冻干，即得2-甲氧基雌二醇纳米制剂（冻干粉）。

实施例4

本发明一种提高2-甲氧基雌二醇载药量和口服生物利用度的纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：

1）在5mL体积浓度为90%乙醇中，加入重量比为1︰0.5的大豆磷脂（PC-80）和玉米醇溶蛋白（Zein）的混合物100mg，超声30min，磁力搅拌1h，再加入1mL 2-ME的乙醇溶液，乙醇溶液中2-ME与玉米醇溶蛋白（Zein）的重量比为1︰20，再磁力搅拌1h，得到乙醇相；

2）将乙醇相在磁力搅拌下以5mL/min的速度缓慢滴加到体积浓度0.8%胆酸钠超纯水溶液中，成混合液，乙醇相与胆酸钠超纯水溶液的体积比为1︰20，将混合液置于70℃的水浴锅中，磁力搅拌2h后，得到2-ME纳米粒混悬液；

3）在2-ME纳米粒混悬液中加入2-ME纳米粒混悬液体积5%的精氨酸，精氨酸作为冻干保护剂和稳定剂，再置于冻干机进行冻干，即得2-甲氧基雌二醇纳米制剂（冻干粉）。

本发明方法制备的2-ME纳米粒及其冻干粉，粒径较小，分布均匀，载药量较高，2-ME纳米粒及其冻干粉载药量可达到8%-9%，见表1：

表1 2-ME纳米粒及其冻干粉的制剂学参数（平均值±SD，n=6）

为满足临床应用时剂量要求提供了重要的保障。目前大多2-ME纳米粒制剂的载药量较低，一般在1%-3%，很难满足临床用药剂量的要求，这是限制纳米粒临床推广的主要原因之一，本发明则显著提高了2-ME纳米粒的载药量。本发明方法制备的2-ME纳米粒混悬液具有较好稳定性，在低温4℃可稳定四周。冻干可进一步提高稳定性。不加稳定剂制备的2-ME纳米粒混悬液在低温4℃只能稳定1天半。

本发明方法制备的2-ME纳米粒及其冻干粉可显著提高2-ME的载药量和口服生物利用度，有望提高其口服的效果，实现玉米醇溶蛋白在制备难溶性药物2-ME口服纳米粒制剂中的应用。

本发明所述方法经试验（以实施例1为例），相关实验资料如下：

本发明提出的2-ME纳米粒及其冻干粉提高2-ME口服生物利用度的试验数据具体如下：

1.动物：SPF级Sprague Dawley大鼠，雌性，体重200±20g，由郑州市惠济区华兴实验动物养殖场提供。合格证编号：SCXK（豫）201-0002。每组动物数为5只。

2.药动学实验 分别将大鼠分成3组，实验前禁食12h，自由饮水。不同制剂大鼠灌胃后，分别在规定时间点眼眶取血，并置于已经肝素化处理的离心管内，5000rpm离心10min后取血浆。采用高效液相色谱法（荧光检测器）测定血药浓度，各制剂对应的药动学参数见表2所示。

表2 2-ME纳米粒及其冻干粉大鼠灌胃后药动学参数（平均值±SD，n=5）

由表2可知，2-ME纳米粒混悬液及其冻干粉大鼠灌胃后，与2-ME溶液口服组相比，均显著延长了体内滞留时间（MRT），显著提高峰浓度（C

经反复多次试验，均取得了相同和相近似的结果，同时还对其他实施例进行了相同的试验，也均取得了相同和相近似的试验结果，这里不一一再累述，实验表明产品质量稳定、可靠，具有实际的应用价值和推广价值。

本发明玉米醇溶蛋白纳米粒及其冻干粉末，对于原来采用常规制剂口服无效的2-ME特别适合，将2-ME制备成玉米醇溶蛋白纳米粒及其冻干粉末，可以明显提高载药量以及口服生物利用度，载药量可达8-9%，提高2-3倍，显著提高口服生物利用度和疗效；成本低，玉米醇溶蛋白是常用的药用辅料，作为天然的植物蛋白，价廉易得，安全无毒无刺激，其余辅料也是常用的药用辅料，具有很好的推广应用前景。玉米醇溶蛋白纳米粒主要适合于水难溶性药物2-ME等，玉米醇溶蛋白纳米粒及其冻干粉末可以显著提高药物溶解度和载药量，冻干后固体化，不仅可以提高其储存稳定性，延长有效期，还可以直接口服给药，病人可以自行用药，服药方便，病人依从性大大提高，纳米粒及其冻干粉可提高药物肠吸收的效率，克服常规制剂中2-ME的肠吸收过程中存在的障碍，如肠吸收饱和和肝首过效应等，提高其口服生物利用度，改变原来用原料药制备的常规制剂口服无效的现状，是治疗癌症药物上的一大创新，有巨大的经济和社会效益。

要说明的是，本发明中给出的仅是实施例，是用于说明本发明的具体实施方式，而不是用于限制本发明的保护范围，本发明方法制备的提高2-甲氧基雌二醇载药量和生物利用度的纳米制剂，可以是药学上适于口服的任何剂型，如颗粒剂、冻干粉、胶囊、丸剂、口服液等等，因此，凡是采用等同、等效替换手段所作出的在本质上与本发明相同的技术方案均属于本发明的保护范围。