一种黄色黏球菌大片段敲除质粒及其敲除方法

摘要

本发明公开了一种黄色黏球菌大片段敲除质粒及其敲除方法。将pilA基因的启动子片段PpilA和sacB基因的ORF片段融合获得PpilA‑SacB的模块，扩增出四环素抗性基因，获得Ptet‑TCR模块，将PpilA‑SacB模块和Ptet‑TCR模块构建到pBJ113载体的BamHI和XbaI位点，获得质粒pBJ116。本发明的质粒pBJ116，其含有卡那霉素正向筛选标记、半乳糖负向筛选标记、四环素正向筛选和蔗糖负向筛选模块，通过两次正负筛选系统，实现黄色黏球菌基因组上大片段的敲除。经试验发现，本发明的方法获得的Myxochelin A编码基因ΔMXAN_3618突变体产生铁载体的水平显著降低，并且捕食铜绿假单胞菌的能力显著降低。并且该方法所需的时间较短。