一种基于let-7的RCA辅助CRISPR/Cas9检测方法及其应用

摘要

本发明公开了一种基于let‑7的RCA辅助CRISPR/Cas9检测方法，包括以下步骤：1)RCA反应：根据绦虫蚴let‑7的序列，设计与其序列互补的锁式探针，建立了基于let‑7的RCA扩增方法；2)扩增产物的剪切反应：根据let‑7的序列，设计并合成CRISPR/Cas9向导RNA(sg‑RNA)序列和TaqMan探针，利用Cas9蛋白将RCA产物进行剪切反应；3)反应产物的荧光检测：用荧光光谱仪检测家兔的血清RCA‑CRISPR/Cas9反应产物的荧光值。上述RCA辅助的CRISPR/Cas9检测方法可应用于制作检测绦虫蚴感染的试剂盒。本发明通过RCA使血清中的let‑7得以扩增；利用CRISPR/Cas9的特异性酶切虫体来源的let‑7的RCA扩增产物；根据RCA酶切产物的荧光值确定动物是否感染了绦虫蚴。