CRISPR/Cas9基因组靶向修饰技术在大豆功能基因组学中的应用

摘要

CRISPR/Cas9基因编辑技术是近几年新发现的第三代基因组定点编辑技术,已经广泛应用在基因治疗、基因功能研究、农作物品种改良等领域的研究中.由于载体构建方法简单,突变效率高等特点,CRISPR/Cas9己逐渐替代其他基因组靶向修饰方法,成为基因改造和功能基因研究中不可或缺的技术手段.本研究中通过多靶点CRISPR/Cas9载体构建与优化、大豆快速遗传转化体系建立、高效突变检测体方法筛选，对CRISPR/Cas9系统在大豆功能基因组学中的应用进行研究。目前，利用该系统成功实现了多个基因的靶向敲除，获得稳定的目标基因大片段靶向敲除体系，并对靶点选择与突变类型之间的关系进行了分析：借助靶向敲入系统，已成功实现了外源报告基因(AsRed)在植物基因组的靶向敲入和表达。最后，对CRISPR/Cas9基因组靶向修饰技术在大豆功能基因组学中的应用进行了讨论。