基于CRISPR/Cas9靶向基因组修饰技术建立KI-T2A-luciferase细胞系的方法

摘要

本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9靶向基因组定点修饰技术建立KI‑T2A‑luciferase细胞系的方法，采用CRISPR/Cas9技术在基因组上mmp12基因的3’端原位整合入T2A‑luciferase报告基因，建立了MMP12‑T2A‑luciferase的knock‑in细胞系，并验证了此细胞系中外源基因在基因组上的定点整合。同时利用已报道的对mmp12有激活作用的转录因子STAT3对MMP12‑T2A‑luciferase细胞系进行转录激活，结果表明MMP12‑T2A‑luciferase细胞系内的luciferase表达水平可以准确灵敏地反映细胞系内MMP12蛋白表达水平。该细胞系的建立将有助于mmp12基因功能研究及筛选影响mmp12表达的小分子化学药物，为癌细胞的迁移及其相关研究提供一种新的实验思路及解决方案。