用于口服和胃肠外给药的稳定的氯吡格雷游离碱药物组合物

摘要

本发明提供了一种平均油滴粒径(平均强度,nm)在100‑500nm之间的可即时使用的油/水乳液组合物，其中油相包含分散于药学上可接受的油中的氯吡格雷游离碱。本乳液使用氯吡格雷游离碱或氯吡格雷游离碱在油中的预混物作为原料药，并且还可包含一种或更多的赋形剂，例如：表面活性剂和/或助表面活性剂，渗透剂，pH调节剂，抗氧化剂，防腐剂，甜味剂，和/或助悬剂，等。相比于其他水性基质处方(例如：使用氯吡格雷盐型作为原料药的环糊精基质处方与乳液)，本乳液的处方与制备方法显著提高了氯吡格雷的在手性转化、水解、热降解方面的稳定性。即时使用的乳液组合物通过胃肠外或口服给药，单次剂量可高达300mg氯吡格雷；其可在制备后贮存于室温条件下至少19周，或者在冷藏温度下贮存至少1年。本组合物对于需要紧急治疗、重症监护或者无法吞服片剂的患者，可作为抗血小板剂起到快速治疗作用。

说明书

本申请为2014年2月6日提交的，发明名称为“用于口服和胃肠外给药的稳定的氯吡格雷游离碱药物组合物”的中国专利申请201480007796.1的分案申请。

优先权

本申请要求优先权为申请日2013年2月6日，专利号61/761,234的美国临时专利申请，该临时专利申请的内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明是关于氯吡格雷油/水乳液组合物，该制剂通过将氯吡格雷游离碱分散于油相中，显著提高了氯吡格雷针对手性转化、水解、热降解的稳定性；本发明介绍了当哺乳动物，尤其是人类受试者需要使用氯吡格雷进行治疗时，氯吡格雷组合物的制备与使用方法。

背景技术

氯吡格雷，其化学名为：甲基(+)-(S)-α-(0-氯苯基)-6,7-二氢噻吩[3，2-C])吡啶-5(4H)-醋酸盐，氯吡格雷是一种抗凝药，其通过选择性地抑制二磷酸腺苷(ADP)与ADP的血小板受体的结合抑制血小板聚集。它被广泛用于预防动脉粥样硬化事件，如心肌梗死，中风，外周动脉疾病，急性冠脉综合征，心血管死亡。氯吡格雷的S-型对映体结构如下：

氯吡格雷(例如：

因此，迫切需求一种可用于胃肠外或口服以达到快速起效且可逐步控制服用剂量的氯吡格雷液体制剂。使用氯吡格雷制备一种静脉胃肠外或口服液体制剂的关键在于具有将氯吡格雷置于一种低副作用、具有合适的药效学曲线的生物相容性溶媒，并将其制备成处方的能力；因氯吡格雷的脂溶性，在生理pH条件下具有pH依赖性且溶解度极低，及在碱性pH环境下极端化学不稳定，这对于氯吡格雷制剂来说，是一种严峻的挑战。

氯吡格雷是一种pKa为4.5的弱碱，其在中性pH水中几乎不溶，但在pH1溶液中易溶，其易溶于甲醇中，部分溶解于在二氯甲烷中，几乎不溶于乙醚。其比旋度大约为+56°。氯吡格雷游离碱是一种半固体高粘度泛油状物，这会引发其在贮存或处理过程的各种问题。此外，据报道氯吡格雷游离碱不适于在制备成药物制剂，这是因为氯吡格雷游离碱在湿度与温度增加的环境下不稳定。由于氯吡格雷游离碱在手性中心和甲酯基团的质子不稳定，氯吡格雷游离碱易受外消旋化，氧化，和甲基酯基团的水解。据报道抗氧剂并不能抑制其降解，更高的pH值则会加剧其不稳定性。到目前为止文献报道表明氯吡格雷在制备成制剂之前只有与酸结合成盐才能确保其稳定性。

硫酸氢氯吡格雷，目前被应用于已上市的口服片剂产品

氯吡格雷在中性pH的水溶液中溶解度较低，导致其难以被开发成一种生物可利用和物理化学稳定的制剂产品，特别是当患者需要静脉给药或口服溶液时。而氯吡格雷的溶解度具有高度pH依赖性对其开发成一款适宜的，与体液接触时不会产生沉淀且不会引起胃肠外部位疼痛、静脉炎、血管栓塞的水性胃肠外制剂形成巨大挑战。此外，氯吡格雷的化学不稳定性，表现在氯吡格雷在湿、热、碱性pH环境下的不稳定，排除了在处方中使用水性溶剂，使其产品处方局限于使用有机溶剂为基质的液体制剂或者冷冻干燥固体制剂，并且需严格限制其贮存条件于较低的贮存温度，例如冷藏或冷冻。

许多方法可用于制备微溶性或难溶性药物的静脉胃肠外与口服液体组合物。这些技术主要包括：胶束增溶或通过表面活性剂形成药物的纳米颗粒悬浮液；与环糊精及其衍生物形成组合物(羟丙基β-环糊精(HPBCD)和磺丁基醚-β-环糊精(SBECD))；多种共溶剂系统的使用；在低pH溶液中与强酸成盐。然而，对于胶束体系，其使用的表面活性剂与不良影响具有密切关联，例如：如溶血和组胺反应和严重过敏反应；对于纳米混悬剂的系统，由于药物颗粒的纳米粒径稳定性需要一定量的聚合物和表面活性剂，因药物与水性介质和周边环绕的表面活性剂更大的接触面积而引起药物催化降解已被报道过；由于游离的药物在水性介质具有更高的浓度使掩味和胃肠外疼痛成为胶束/纳米混悬剂系统所面临的又一大问题。众所周知，共溶剂系统会引起沉淀，胃肠外疼痛和静脉炎。环糊精及其衍生物会引起潜在的肾毒性和心动过缓和血压降低；环糊精与共同给药的亲脂性药物结合所存在的隐忧已见诸报端。在低pH溶液中与强酸形成弱碱性盐例如硫酸氢氯吡格雷将会引起药物-赋形剂和药物产品的稳定性问题，且将导致口感问题(氯吡格雷具有苦味)，药物作为游离碱形式存在时与中性pH值血液接触会产生沉淀，导致胃肠外部位的刺激和疼痛。综上所述，上述方法具有其局限性，均难以将氯吡格雷制备成一种具有适宜的生物相容性溶媒、最小的副作用、恰当的药效学曲线的静脉胃肠外剂或口服溶液剂。

WO2008/060934公开了一种乳液组合物，该组合物通过微粉化和加入表面活性剂使制备的纯四氢吡啶抗血小板药物的油滴达到稳定。该剂型不使用植物油只使用纯抗血小板药物及表面活性剂。虽然该专利中有提到该基质可应用于氯吡格雷，但该专利仅公开了使用硫酸氢氯吡格雷作为原料药的乳液组合物，使用氯吡格雷游离碱作为原料药制备乳液组合物并未刊载于该专利中；该剂型对于氯吡格雷游离碱或氯吡格雷各种盐型的产品稳定性的影响，特别是该组合物对于氯吡格雷的有关杂质分布的影响并未刊载于该专利中。

CN102697724公开了一种使用硫酸氢氯吡格雷及其氨基酸盐作为原料药制备水包油乳剂的方法。然而，该专利并未收录使用氯吡格雷游离碱作为原料药制备乳液组合物的方法，并且氯吡格雷在最终形成乳液组合物的制剂中浓度过低(≤0.15％w/v)，这可能需要大量的乳液以达到300mg的剂量需求；且该剂型对于氯吡格雷各种盐型对产品稳定性的影响，特别是该组合对于氯吡格雷的有关杂质分布的影响并未刊载于该专利中。

发明概述

为解决现有技术上的缺陷和问题，有必要在本领域中开发氯吡格雷液体剂型，特别是质量稳定、可即时使用、可提供单次静脉胃肠外300mg氯吡格雷剂量、迅速起效，并且可以在室温或者冷藏温度下配制与贮存的胃肠外制剂。本专利提供如下组合物，该组合物可以为患者在紧急情况与重症监护，或者患者无法口服给药的情况下提供抗血小板药物。本产品的稳定性与纯度均符合美国食品与药品监督管理局(FDA)与GMP对于药物制剂的制备要求。

考虑到上述问题，本发明提供了一种包含氯吡格雷游离碱，平均粒径为100-500nm,即时使用，以水为基质，油/水的胃肠外或口服乳液组合物。其中所述油相包括氯吡格雷游离碱分散在含有可接受浓度限度的表面活性剂和/或助表面活性剂的油中，当将油相置于pH约9-10，或水或蒸汽的高压灭菌环境中，意外获得了一种稳定性良好、杂质分布图优异的产品；经过长时间的贮存，该产品依然具有优越的质量。

本发明描述了以氯吡格雷作为有效活性物质置于药物组合物时，将氯吡格雷杂质含量控制在符合美国药典(USP)32版中所制定的氯吡格雷片杂质含量规定范围内的方法。相比于其他水性基质处方(例如环糊精基质处方)、使用氯吡格雷盐型处方(例如硫酸氢氯吡格雷)，该乳剂处方显著的提高了氯吡格雷的在手性转化、水解、热降解方面的稳定性。

1、本发明一个方面是制备的水性基质乳液显著减少了甲酯基团(杂质A)的水解；虽然氯吡格雷自身在碱性pH环境中非常不稳定，但本发明的乳液处方在pH9-10环境中制备却使氯吡格雷在其贮存期限的水解达到最小化，然而未被制备成制剂的氯吡格雷在使用NaOH配制的与上述条件相同的溶液中仅用5分钟即完全降解。

2、本发明的另一方面是制备的乳液有效的抑制了氯吡格雷的热降解。据文献报道，由于氯吡格雷的手性中心的质子不稳定，使其易于被氧化，即使加入抗氧剂也未能抑制其降解。与文献结论相反，本发明的乳剂处方在并未使用抗氧剂的情况下，有效抑制了氯吡格雷的热降解。

3、本发明的另一方面是本发明制备的乳液有效抑制了氯吡格雷从S-对映体(有生物活性)向R-对映体(不存在任何抗凝集活性且耐受性较差)的手性转化(杂质C<1.5％)。与之相反的是，使用氯吡格雷盐型(例如硫酸氢氯吡格雷)作为原料药的环糊精包合物溶液或是乳液均在制备或是贮存过程中形成了数量可观的R-对映体。

4、本发明的另一方面是使用本发明所描述的制备工艺所制备的药物组合物无论在制备过程或是贮存过程中，与药物相关的杂质含量均达到最小化或减少。

a)特别要说明的是。本发明描述的药物组合物使用氯吡格雷作为有效活性物质，杂质的含量符合美国药典(USP)32版中对于氯吡格雷片剂的杂质规定。

b)更具体的说，本发明描述的药物组合物使用氯吡格雷作为有效活性物质，药物组合物仅包含不超过1.2％的氯吡格有关物质A，不超过1.5％的氯吡格雷有关物质C，其余单一药物相关杂质均不超过0.2％(除了氯吡格雷有关物质B),总杂质不超过2.5％(除了氯吡格雷有关物质B)。

5.另外一方面，本专利发明了当受试者需要本制剂进行治疗或者减轻疾病状态的方法，包括向受试者提供一种以氯吡格雷游离碱作为有效活性物质，且含有有效剂量的药物组合物，该药物组合物杂质含量较少或者达到最小化，杂质含量不超过总体药物含量的2.5％(除了氯吡格雷有关物质B)。诸如本文上述部分的任何疾病或状态均可使用包含氯吡格雷的药物，以此预防动脉粥样硬化事件，例如心肌梗死，中风，外周动脉疾病，急性冠脉综合征，心脑血管死亡等心血管疾病。

本发明的一个目的是提供一种稳定的，含有纳米级别油滴，油/水乳剂组合物，该乳剂可用于胃肠外或者口服，该乳剂由分散于油相中的氯吡格雷游离碱，表面活性剂，可任选的助表面活性剂，基本不含有氯吡格雷的水相，pH调节剂组成。

本发明的另外一个目标是提供一种用于制备稳定的、胃肠外或者口服的、包含有纳米级别油滴的水包油乳剂组合物的方法，该方法主要有如下步骤：a)将氯吡格雷游离碱分散于油性载体制备油相；b)制备含有水与pH调节剂的水相；c)将表面活性剂或者可任选的助表面活性剂加入水相或者油相中；d)将油相分散于水相中形成粗乳状液，如有必要并将pH调整到～9；e)将步骤d的乳液通过超声处理或者高压均质处理形成最终乳液，并将pH调整至5.5-10之间；f)将最终乳液过滤；g)通过无菌工艺或者终端灭菌控制产品的生物负荷量或无菌度。

本发明的另外一个目标是为需要氯吡格雷单次高剂量给药的患者提供一种治疗方法，该方法包括：a)提供一种油/水乳液组合物的液体制剂，该液体制剂通过将氯吡格雷游离碱分散于油性载体；将水与一种pH调节剂制备成水相；将油相通过超声处理或者高压均质处理分散进入水相中形成纳米粒径的油滴，最终制备而成；b)单次口服或者胃肠外该组合物，该组合物的单次剂量包含了高达300mg的氯吡格雷游离碱。

附图说明

图1说明了在高压灭菌锅，或冻融条件，或将其置于冷藏条件(-5℃)1年后的由氯吡格雷游离碱(实施例10)或者硫酸氢氯吡格雷(实施例8)制备成的乳液平均微滴粒径(平均强度,nm)

图2说明了氯吡格雷游离碱乳液(实施例10)在置于冷藏条件(-5℃)1年后的HPLC色谱图。

图3比较了将本发明的氯吡格雷乳液(实施例10)与在pH8左右的氯吡格雷-HPBCD与SBECD组合物，三者均置于40℃条件下贮存后，氯吡格雷从S-对映体到R-对映体手性转化的百分率。

图4比较了将本发明的氯吡格雷乳液(实施例10)与在pH8左右的氯吡格雷-HPBCD与SBECD组合物，三者均置于25℃条件下贮存，氯吡格雷从S-对映体到R-对映体手性转化的百分率。

图5比较了将本发明的氯吡格雷乳液(实施例10)与氯吡格雷盐型乳液(实施例8)均置于40℃条件下贮存，氯吡格雷从S-对映体到R-对映体手性转化的百分率。

图6将新配置的乳液样品、贮存在室温下19周后的乳液样品、贮存于40℃19周后的乳液样品，三者的微滴粒径分布图进行了叠加，三者均为实施例6所描述的乳液。

本发明的详细描述

“氯吡格雷原料药”或者“氯吡格雷游离碱”定义为：甲基(+)-(S)-α-(0-氯苯基)-6,7-二氢噻吩[3，2-C])吡啶-5(4H)-醋酸盐。

“氯吡格雷有关物质A”或者“杂质A”定义为：(+)-S-(o-氯苯基)-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-醋酸。

“氯吡格雷有关物质B”或者“杂质B”定义为：甲基(±)-(o-氯苯基)-4,5-二氢噻吩[2,3-c]吡啶-6(7H)-醋酸盐。

“氯吡格雷有关物质C”或者“杂质C”定义为：甲基(-)-(R)-(o-氯苯基)-6,7-二氢噻吩[3,2-c]吡啶-5(4H)-醋酸盐。

本发明提供了一种平均粒径为100-500nm的水性基质油/水乳剂处方组合物，包括在油中的氯吡格雷游离碱，表面活性剂和/或助表面活性剂，和水性液体载体。本发明的处方组成如下:

a)氯吡格雷游离碱；

b)油相；

c)表面活性剂和/或助表面活性剂；

d)水与pH调节剂。

乳液处方可任选的成分还包括：螯合剂、抗氧剂、渗透剂、助悬剂、防腐剂、缓冲剂。

在一些实施例中，处方中还包含了增溶剂、矫味剂、甜味剂、增粘剂、电解质，另一种治疗剂，或者是他们的组合物。

在允许的用量范围内的氯吡格雷与其他成分的不同组合，如本发明权利要求的所述，可被用于为本发明提供不同的实施例。本发明也提供了一种可即时使用氯吡格雷的给药方法，该方法将氯吡格雷游离碱溶解于油相中，油相被包和于水相中。

本发明的乳液相对于其他有机基质或者水性基质的制剂(例如：环糊精基质制剂)具有更好的稳定性与更小的副作用。油/水的乳液亦可抑制亲脂性的氯吡格雷粘附于塑料胃肠外器的管壁上。本发明提供了在室温或者冷藏条件下配制亦可保持稳定的氯吡格雷乳液，且该给药方式无需经过稀释。此外，该乳液相比于其他口服片剂具有迅速释放、迅速起效的优势。

在一些实施例中，使用制剂对患者进行给药之前无需进行稀释。在其他实施例中，液体制剂可以进行稀释，并保证不出现氯吡格雷沉淀。本发明的制剂可单剂量给药或多剂量给药。

本发明的一些实施例的液体制剂的给药方式包括胃肠外给药、口服给药、或者肠道给药。本发明提供一种治疗方法，本方法可防止或减少血小板聚集并发症的产生，或可有效治疗需要氯吡格雷进行治疗的症状，本方法包括了受试者对于本发明所需的给药方式。本发明还提供了一种使用本发明的氯吡格雷制剂，给予受试者所需的胃肠外给药、口服给药、肠道给药方式，可减少治疗起效时间或者减少达到目标疗效所需时间的方法。本发明的制剂相比于口服片剂可减少治疗起效时间或者减少达到目标疗效所需时间。本发明的制剂允许给予低剂量的氯吡格雷即可达到目标疗效，例如，针对出血时间或血小板聚集抑制目标，相比于固体口服制剂，使用本发明的制剂给予低剂量的氯吡格雷即可达到相同的目标疗效。

根据本发明的一个实施例，乳液包括

a)0.01-10％w/w的氯吡格雷游离碱；

b)1-30％w/w的油相；

c)0.5-5.4％w/w的表面活性剂；

d)0-0.5％的任意助表面活性剂；和

d)60-99％w/w的水与pH调节剂,例如使用氢氧化钠调高pH

氯吡格雷游离碱使用其S-对映体作为原料药。S-对映体具有生物活性，R对映体(杂质C)不存在任何抗凝活性且耐受性很差。

根据美国药典(USP)32版，使用于上市片剂产品的活性药物成分硫酸氢氯吡格雷主要是S-对映体，且其中含有不超过0.2％的氯吡格雷有关物质A,不超过0.3％的第一对映体氯吡格雷有关物质B,不超过1.0％的氯吡格雷有关物质C，不超过0.1％的其他任何已发现的药物相关杂质，总药物相关杂质的含量不超过1.5％。

根据美国药典(USP)32版，作为上市的片剂产品，在制备完成后与贮存过程中，氯吡格雷有关物质A的含量不超过1.2％，氯吡格雷有关物质C的含量不超过1.5％，任何单一杂质的含量不超过0.2％(除了氯吡格雷有关物质B)，药物总杂质的含量不超过2.5％(除了氯吡格雷有关物质B)。

由于氯吡咯雷游离碱在温度、湿度增加的条件下较不稳定，且其甲酯基团易于外消旋化、氧化、水解；氯吡咯雷游离碱需要在制备成药物制剂之前首先酸化成盐才可达到稳定；因此普遍认为氯吡咯雷游离碱不适于用于制备药物制剂。本发明惊奇的发现了一个新现象，不同于之前的普遍看法，用氯吡咯雷游离碱制成的乳剂后显示了比用氯吡咯雷盐制成的乳剂更好的稳定性。由于氯吡咯雷盐在可用于制剂处方的油中的溶解度较低，所以其在油相与水相中的分配比例较低。因此氯吡咯雷盐在油相中的包封率较低。除非使用非常高剂量的表面活性剂或溶剂，否则使用氯吡咯雷盐作为原料药制备成乳剂，并在给药的单次剂量所能承受的剂量范围内(例如300mg在100ml溶剂或更少体积的溶剂)达到较高的载药量(氯吡咯雷游离碱载药量>0.15％)，显然是不适合的。否则，氯吡咯雷会可能会从油相中析出，在水相中溶解或是沉淀；这将引发产品的均一性问题(存在两种分散形式，一种是氯吡咯雷溶解于油相中，另一种是游离的氯吡咯雷混悬于水性介质中)；作为氯吡咯雷直接暴露在水中，离子化催化降解反应的结果，氯吡咯雷将出现稳定性问题；胃肠外制剂的胃肠外部位刺激/疼痛，口服制剂的掩味问题，静脉胃肠外给药的物理稳定性(沉降)等问题亦将出现。在本发明的一个实施例中，采用氯吡咯雷游离碱作为原料药，将其溶解于可用于制剂处方的油制备成组合物；在另一个实施例中，采用氯吡咯雷盐转化成游离碱的技术获得氯吡咯雷游离碱，在制备处方之前从游离碱中分离出反荷离子。

在处方中氯吡咯雷游离碱的优选范围为0.15-10％，最优选范围为0.2-3％。

乳剂中的油相为药用级油，优选甘油三酯类，例如，但不仅限于大豆油，红花籽油，橄榄油，棉籽油，葵花子油，鱼油(包含欧米珈-3脂肪酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA))、蓖麻油、芝麻油、花生油、玉米油、中链甘油三酸酯(例如Miglyol812or810)。油相中可能包含有表面活性剂和/或助表面活性剂，例如蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、其他卵磷脂、丙二醇二酯、油酸、或是单甘脂(例如：乙酰单酸甘油酯)。油相也可能是一种混合的成分。

优选的油相是大豆油，中链甘油三酸酯(MCT),橄榄油，鱼油，可能是单独成分也可能是与其他成分相混合的混合体。

最优选的油相是大豆油。优选的油载体范围是5-30％，最优选的油载体范围是10-20％。

表面活性剂是任意的、可药用的表面活性剂，优选从蛋黄或者大豆中提取的磷脂类化合物，合成的磷酯酰胆碱，从植物中纯化的磷酯酰胆碱。也可能使用氢化的衍生物，例如：氢化磷酯酰胆碱(蛋黄)和氢化磷酯酰胆碱(大豆)。表面活性剂也可能是非离子型表面活性剂，例如：泊洛沙姆(例如：泊洛沙姆188、泊洛沙姆407)，洛沙胺，硬脂酸聚氧乙烯，聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯或者脱水山梨醇脂肪酸酯。离子型表面活性剂亦可能被使用，例如：胆酸、

优选的表面活性剂是蛋黄卵磷脂。优选的范围是0.6-2.4％，最优选的范围是1.2-1.8％。

助表面活性剂从油酸、油酸钠、胆酸、胆酸钠、去氧胆酸、去氧胆酸钠、或是上述成分的混合物中选择；其中，本发明所述的助表面活性剂在组合物中的范围是0-0.5w/v％。

优选的缓冲液的水的范围是70-90％。

乳液也可能包含共溶剂或者其他溶解度增强剂，螯合剂，防腐剂，抗氧剂，稳定剂，pH调节剂或是张力调节剂，例如：甘油，作为混悬剂的聚合物，甜味剂，等等。

理想的乳剂是平均微滴粒径在100-1000nm，呈现白色至灰白色的稳定系统。优选的平均微滴粒径在100-500nm；最优先选的平均微滴粒径在100-300nm。

优选的乳剂在制备后与贮存期间的pH范围是5.5及5.5以上。在其中一个实施例中，乳液的pH范围控制在5.5-7；在另外一个实施例中，乳液的pH范围控制在7-10。优选的乳液的pH范围是6.5-9。pH调节剂可以是一种缓冲剂或者氢氧化钠或者其他的pH调节剂，或是上述成分的混合物。

本发明的乳剂可通过如下方法制备：对于水相，应将药用级的水分散于容器中，并加热至40-80℃，并向水相中添加蛋黄卵磷脂与甘油，最后将pH调节至9-10。对于油相，应将大豆油分散于另一容器中，并加热至40-80℃；随后将氯吡咯雷与任意的助表面活性剂添加入大豆油中，并加热至40-80℃；另外，蛋黄卵磷脂也可能被加入至油相中。使用高剪切混合器将水相与油相混合，形成粗乳状液。通过超声处理、高压均质处理或是微流化技术，在压力为5000-15000psi，温度为5-60℃条件下将粗乳状液制备成具有理想的微滴粒径的乳液。通过pH调节剂(例如：1N氢氧化钠溶液)将pH调节至5.5-10。在其中一个实施例中，需将pH调节至9-10；在另一个实施例中，需将pH调节至7-10；还有一个实施例，需将pH调节至8-10。将样品过滤并分散于洁净级的瓶子中，外部环境通常施以氮气保护，塞入硅化橡胶瓶塞，最后使用铝盖密封。本产品应通过无菌操作进行制备或进行终端灭菌。优选的单元剂量是通过高压灭菌技术所获得的无菌且稳定的乳液。在其中一个实施例中，乳液应在121℃条件下高压灭菌15-20分钟。在另一个实施例中，乳液在不使用高压灭菌技术的情况下，应在无菌环境下进行制备。

本发明现在以非限制性实施例的方式进行描述。本发明由实施例的实施方案与发明的各方面详细描述组成。相应的，本发明包括实施例的实施方案的单一因素以及如本文中所描述的本发明的各方面的不同组合。另外，本发明包括通过如下章节的技术阐述与相关例子使得本领域技术人员推导出的其他特点，优点与实施例。本文的公开文本包括所有可能的因素与方法的改变与修饰。此外，实施例的定义与演示是为了示范作用，并不意味着本发明独有或仅限于所描述的内容。该发明包括本领域技术人员会认识到，在不脱离本发明的精神提前下进行的各种变化和修饰。

实施例1.硫酸氢氯吡格雷和氯吡咯雷游离碱在油相和水相之间的药物分配比例的比较

为了测定氯吡咯雷在油相与水相中的分配比例，本发明分别测定硫酸氢氯吡咯雷与氯吡咯雷游离碱在油相与水相中的分配比例，称量600mg的药物加入一个包含有大豆油与去离子水(各20g)的烧杯中。在室温下搅拌混合24小时。之后，将样品从两相中分别分离出来，并使用实施例14所描述的HPLC色谱条件进行测试。并测定水相的pH。

表1表明使用硫酸氢氯吡咯雷进行实验时，约50％的氯吡咯雷将会进入水相中。与之相反，使用氯吡咯雷游离碱进行实验时，只有极微量的氯吡咯雷进入水相中。这表明，如果我们期望使氯吡咯雷进入水相中数量最小化，那么氯吡咯雷游离碱比硫酸氢氯吡咯雷更适于作为乳剂的原料药。否则，制剂处方将会出现均一化与稳定性的问题。

表1.油相和水相之间的药物分配

实施例2使用从供应商处获得的氯吡咯雷游离碱制备乳液

所有制备过程均在氮气保护下进行。

胃肠外给药的无菌水性水包油乳剂的制备过程如下：

1.使用甘油与胃肠外用水制备水相。使用1N的氢氧化钠溶液调节水相pH至9-10。持续搅拌混合，并加热至60℃。

2.水相使用0.22微米的过滤器过滤，并装入混合容器。

3.同时，将经过0.22微米的过滤器过滤的大豆油，氯吡咯雷游离碱，蛋黄卵磷脂置于混合容器中，制备油相。持续搅拌混合，并加热至60℃，直至所有成分均已溶解。

4.将混合后的油相加入水相中。

5.使用高剪切混合器(Polytron PT3100)，以10,000rpm的转速搅拌混合物5分钟，得到粗乳液。将乳液pH调整至9-10。

6.使用超声波破碎仪(Fisher Scientific Sonic Dismembrator,Model500)将粗乳液超声30分钟。并将产品温度控制在45℃。

7.将得到的水包油乳状液冷却；如若需要，调整pH至9-10；最后将乳液转移至灌装容器中。

8.在氮气保护下使用0.45微米过滤器过滤乳液，并将乳液灌装如容器中。最后在121℃的温度下高压灭菌20分钟。

9.最终产物的pH为8。

实施例3使用从供应商处获得的氯吡咯雷游离碱制备乳液

所有制备过程均在氮气保护下进行。

胃肠外给药的无菌水性水包油乳剂的制备过程如下：

1.使用蛋黄卵磷脂、甘油与胃肠外用水制备水相。使用1N的氢氧化钠溶液调节水相pH至9-10。持续搅拌混合，并加热至60℃。

2.水相使用0.22微米的过滤器过滤，并装入混合容器。

3.同时，将经过0.22微米的过滤器过滤的大豆油，氯吡咯雷游离碱，置于混合容器中，制备油相。持续搅拌混合，并加热至60℃，直至所有成分均已溶解。

4.将混合后的油相加入水相中。

5.使用高剪切混合器(PolytronPT3100)，以10,000rpm的转速搅拌混合物5分钟，得到粗乳液。将乳液pH调整至9-10。

6.使用高压均质仪(APV2000)将粗乳液在压力为10,000psi的条件下均质10个周期。并将产品温度控制在45℃。

7.将得到的水包油乳状液冷却；如若需要，调整pH至9-10；最后将乳液转移至灌装容器中。

8.在氮气保护下使用0.45微米过滤器过滤乳液，并将乳液灌装如容器中。最后在121℃的温度下高压灭菌20分钟。

9.最终产物的pH为8。

实施例4使用从供应商处获得的氯吡咯雷游离碱制备乳液

所有制备过程均在氮气保护下进行。

胃肠外给药的无菌水性水包油乳剂的制备过程如下：

1.使用甘油与胃肠外用水制备水相。使用1N的氢氧化钠溶液调节水相pH至9-10。持续搅拌混合，并加热至60℃。

2.水相使用0.22微米的过滤器过滤，并装入混合容器。

3.同时，将经过0.22微米的过滤器过滤的大豆油，卵磷脂，氯吡咯雷游离碱，置于混合容器中，制备油相。持续搅拌混合，并加热至60℃，直至所有成分均已溶解。

4.将混合后的油相加入持续高速搅拌的水相中。

5.使用高剪切混合器(PolytronPT3100)，以10,000rpm的转速搅拌混合物5分钟，得到粗乳液。将乳液pH调整至9-10。

6.使用高压均质仪(APV2000)将粗乳液在压力为10,000psi的条件下均质10个周期。并将产品温度控制在45℃。

7.将得到的水包油乳状液冷却；如若需要，调整pH至9-10；最后将乳液转移至灌装容器中。

8.在氮气保护下使用0.45微米过滤器过滤乳液，并将乳液灌装如容器中。最后在121℃的温度下高压灭菌20分钟。

9.最终产物的pH为8。

实施例5通过无菌工艺，使用从供应商处获得的氯吡咯雷游离碱制备乳液

使用从供应商处获得的氯吡咯雷游离碱作为原料药制备乳液

所有制备过程均在氮气保护下进行。

胃肠外给药的无菌水性水包油乳剂的制备过程如下：

1.使用甘油与胃肠外用水制备水相。使用1N的氢氧化钠溶液调节水相pH至9-10。持续搅拌混合，并加热至60℃。

2.水相使用0.22微米的过滤器过滤，并装入混合容器。

3.同时，将经过0.22微米的过滤器过滤的大豆油，卵磷脂，氯吡咯雷游离碱，置于混合容器中，制备油相。持续搅拌混合，并加热至60℃，直至所有成分均已溶解。

4.将混合后的油相加入水相中。

5.使用高剪切混合器(PolytronPT3100)，以10,000rpm的转速搅拌混合物5分钟，得到粗乳液。将乳液pH调整至9-10。

6.使用高压均质仪(APV2000)将粗乳液在压力为10,000psi的条件下均质10个周期。并将产品温度控制在45℃。

7.将得到的水包油乳状液冷却；如若需要，调整pH至8-10；最后将乳液转移至灌装容器中。

8.在氮气保护下使用0.45微米过滤器过滤乳液，并将乳液灌装如容器中。

9.最终产物的pH为8。

实施例6通过无菌工艺，使用从供应商处获得氯吡咯雷游离碱制备乳液

所有制备过程均在氮气保护下进行。

胃肠外给药的无菌水性水包油乳剂的制备过程如下：

1.使用甘油与胃肠外用水制备水相。使用1N的氢氧化钠溶液调节水相pH至9-10。持续搅拌混合，并加热至60℃。

2.水相使用0.22微米的过滤器过滤，并装入混合容器。

3.同时，将经过0.22微米的过滤器过滤的大豆油，卵磷脂，氯吡咯雷游离碱，置于混合容器中，制备油相。持续搅拌混合，并加热至60℃，直至所有成分均已溶解。

4.将混合后的油相加入持续高速搅拌的水相中。

5.使用高剪切混合器(PolytronPT3100)，以6,000rpm的转速搅拌混合物5分钟，得到粗乳液。将乳液pH调整至9-10。

6.使用高压均质仪(APV2000)将粗乳液在压力为10,000psi的条件下均质10个周期。并将产品温度控制在45℃。

7.将得到的水包油乳状液冷却；如若需要，调整pH至8-10；最后将乳液转移至灌装容器中。

8.在氮气保护下使用0.45微米过滤器过滤乳液，并将乳液灌装如容器中。

9.最终产物的pH约为8。

实施例7使用从供应商处获得氯吡咯雷游离碱制备乳液

使用氯吡咯雷游离碱作为原料药，卵磷脂作为表面活性剂，油酸作为助表面活性剂制备乳液

所有制备过程均在氮气保护下进行。

胃肠外给药的无菌水性水包油乳剂的制备过程如下：

1.使用甘油、蛋黄卵磷脂与胃肠外用水制备水相。使用1N的氢氧化钠溶液调节水相pH至9-10。持续搅拌混合，并加热至60℃。

2.水相使用0.22微米的过滤器过滤，并装入混合容器。

3.同时，将经过0.22微米的过滤器过滤的大豆油，油酸，氯吡咯雷游离碱，置于混合容器中，制备油相。持续搅拌混合，并加热至60℃，直至所有成分均已溶解。

4.将混合后的油相加入持续高速搅拌的水相中。

5.使用高剪切混合器(PolytronPT3100)，以10,000rpm的转速搅拌混合物5分钟，得到粗乳液。将乳液pH调整至9-10。

6.使用超声波破碎仪(FisherScientificSonicDismembrator,Model500)将粗乳液超声30分钟。并将产品温度控制在45℃。

7.将得到的水包油乳状液冷却；调整pH至9-10；最后将乳液转移至灌装容器中。

8.在氮气保护下使用0.45微米过滤器过滤乳液，并将乳液灌装如容器中。最后在121℃的温度下高压灭菌20分钟。

9.最终产物的pH约为8。

实施例8使用硫酸氢氯吡咯雷制备乳液(参比制剂)

本实施例制备过程描述与实施例2相同但无需进行高压灭菌。最终产物pH为7.4。

实施例9使用氯吡咯雷游离碱制备乳液

本实施例制备过程描述与实施例2相同。最终产物pH为8。

实施例10使用在大豆油中预混的的氯吡咯雷游离碱制备乳液；

在乳液制备前将硫酸氢氯吡咯雷转化成氯吡咯雷游离碱，并将硫酸根离子从氯吡咯雷游离碱中分离出来。

所有制备过程均在氮气保护下进行。

将氯吡咯雷游离碱预混于大豆油中的制备方法。

将硫酸氢氯吡格雷溶解于足量的水中。在持续搅拌状态下，将所需的大豆油分散于水相中，将1N的氢氧化钠溶液逐步滴入如水相混合物中，直至水相pH达到6.5或6.5以上。从包含硫酸根离子和钠离子的水相中分离出包含氯吡格雷游离碱的油相；如若需要，需对油相进行水洗。

胃肠外给药的无菌水性水包油乳剂的制备过程如下：

1.药物-油预混物在60℃条件下搅拌，将油相通过0.22微米过滤器过滤，并装入混合容器。

2.使用甘油、蛋黄卵磷脂与胃肠外用水制备水相。使用1N的氢氧化钠溶液调节水相pH至9-10。持续搅拌混合，并加热至60℃。

3.水相使用0.22微米的过滤器过滤，并装入混合容器。

4.将混合后的油相加入持续高速搅拌的水相中。

5.使用高剪切混合器(PolytronPT3100)，以10,000rpm的转速搅拌混合物5分钟，得到粗乳液。

6.使用高压均质仪将粗乳液在压力为10,000psi的条件下均质5个周期。并将产品温度控制在45℃。

7.将得到的水包油乳状液冷却；调整pH至9-10；最后将乳液转移至灌装容器中。

8.在氮气保护下使用0.45微米过滤器过滤乳液，并将乳液灌装入容器中。最后在121℃的温度下高压灭菌20分钟。

9.最终产物的pH为8。

实施例11使用氯吡咯雷游离碱制备乳液

本实施例制备过程描述与实施例3相同。最终产物pH为8。

实施例12使用氯吡咯雷游离碱制备乳液

本实施例制备过程描述与实施例3相同。最终产物pH为8。

实施例13通过NanoZetasizer比较使用氯吡咯雷游离碱与硫酸氢氯吡咯雷所制备的乳液在微滴粒径分布特征的不同

使用实施例8与实施例10制备的乳液进行颗粒粒径分布测试。使用MalvernZetasizerNano-ZSZEN3600测试乳液的微滴粒径分布。图1显示了分别使用氯吡咯雷游离碱(实施例10)与硫酸氢氯吡咯雷(实施例8)制备的乳液平均微滴粒径(平均强度,nm)。使用氯吡咯雷游离碱制备的乳液在经过高压灭菌，冻融，冷藏条件下贮存1年后十分稳定，然而使用硫酸氢氯吡咯雷制备的乳液在经过高压灭菌，冻融后在颗粒粒径方面显示出剧烈的改变。

实施例14比较使用本发明的乳液与SB-E-CD组合物、HP-B-CD组合物在化学稳定性方面的不同

HPLC色谱条件

使用手性液相色谱法检测杂质和对映体含量。固定相使用ULTRONES-OVM柱,5um(4.6mm×150mmi.d.)。流动相的组成为：A相，在1L纯水中加入1.36g磷酸二氢钠(NaH2PO4.H2O)；B相，乙腈；以1.0mL/min的恒定流速进行等浓度洗脱，运行时间18分钟；进样体积为5-10ul；UV检测波长为220nm。

本发明所制备的氯吡咯雷乳剂的主要降解杂质是杂质C(R-对映体)；根据观察，乳液产品中水解产物杂质A(<1.2％)较少出现且没有显著变化。因此，对于本发明的乳液的化学稳定性的监测指标是杂质C(图2)。相比于环糊精基质的氯吡咯雷溶液，使用氯吡咯雷游离碱制备的乳液具有更好的稳定性数据(图3、图4)。

图3显示了将本发明制备的氯吡咯雷乳液(实施例10)与pH大约为8的氯吡咯-HPBCD、氯吡咯雷-SBECD组合物(US20100292268)在40℃条件下贮存后，氯吡咯雷手性结构从S对映体到R对映体的转化百分率。

图4显示了将本发明制备的氯吡咯雷乳液(实施例10)与pH大约为8的氯吡咯-HPBCD、氯吡咯雷-SBECD组合物(US20100292268)在25℃条件下贮存后，氯吡咯雷手性结构从S对映体到R对映体的转化百分率。

实施例15比较使用氯吡咯雷游离碱(实施例10)与硫酸氢氯吡咯雷(实施例8)所制备的乳液在化学稳定性方面的不同

HPLC色谱条件与实施例14所描述的相同。

相比于使用硫酸氢氯吡咯雷制备的乳液，使用氯吡咯雷游离碱制备的乳液具有更好的稳定性数据(图5)。

图5显示了将使用氯吡咯雷游离碱制备的乳液(实施例10)与使用硫酸氢氯吡咯雷制备的乳液(实施例8)在40℃条件下贮存后，氯吡咯雷手性结构从S对映体到R对映体的转化百分率。

实施例16实施例10的乳液稳定性数据汇总

表2显示了将实施例10的乳液贮存于冷藏条件下至少52周的稳定性数据

表2.实施例10的乳液贮存于冷藏条件下的稳定性数据

实施例17实施例6的乳液稳定性数据汇总

表3、表4显示了将实施例6的乳液贮存于冷藏条件(-5℃)与室温条件下(-25℃)至少19周的稳定性数据

表3.实施案例6稳定性(25摄氏度)

表4.实施案例6稳定性(5摄氏度)