一种沙漠梭罗金小球藻培养基及自养培养方法

摘要

本发明公开了一种沙漠梭罗金小球藻培养基及自养培养方法。沙漠索罗金小球藻快速生长的培养基是在常规的沙漠索罗金小球藻藻生长的培养液中添加四种不同的植物激素(IBA、2,4‑D、NAA、6‑BA)等，然后对沙漠梭罗金小球藻进行培养。与现有技术相比，本发明的有益效果是：所培养的沙漠索罗金小球藻细胞达到稳定期时，每升培养液可获得细胞干粉1.5g～3.5g，比常规培养沙漠索罗金小球藻培养方法提高100％，有效的提高了沙漠藻的产量，降低了其培养成本，使其具有广阔的应用前景。

说明书

技术领域

本发明涉及圣武技术领域，具体为一种沙漠梭罗金小球藻培养基及自养培养方法。

背景技术

沙漠索罗金小球藻(Chlorella sorokiniana)是1965年才发表的物种，相较于1890年发表的普通小球藻(Chlorella vulgaris)，索罗金小球藻具有生长更快，耐高温和抗污染的特点，特别是在室外规模化培养中更容易占优势。该物种在国内外最近的一些能源微藻或微藻生物技术相关文献中有广泛应用。

小球藻是最早应用于商业化规模生产，同时也是目前开发较多的藻种之一，其具有易于培养，细胞内富含油脂如包含不饱和脂肪酸的油脂，及蛋白质，在生物材料、营养食品及保健品领域具有很好的应用前景

目前，沙漠索罗金小球藻的培养方式可分为自养培养和异养培养。沙漠索罗金小球藻的自养培养可利用冷光源LED照明灯，培养基主要由无机化合物组成。目前，关于沙漠索罗金小球藻的自养培养技术基本成熟，但是短期内细胞的快速分裂而提高细胞密度的培养方法限制了其生物量的进一步提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种沙漠梭罗金小球藻培养基及自养培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案，一种沙漠梭罗金小球藻培养基，其原料包括NaNO3、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O、citric acid、ferric ammoniumcitrate、EDTANa2、Na2CO3、微量元素；其浓度为其浓度为NaNO

一种沙漠梭罗金小球藻自养培养方法，其培养步骤如下：将沙漠索罗金小球藻放入权利要求1所述的培养基中温度控制在27-31℃，光照强度为2500-4500Lux的条件下培养7天。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤一种薏米可以选用薏米与小米的混合物，薏米与小米的比例不低于3:1。

作为本发明的一种优选技术方案，培养时每日光暗比为12h：12h至20h：4h。

作为本发明的一种优选技术方案，培养时培养基中初始接种量为1×10

与现有技术相比，本发明的有益效果是：所培养的沙漠索罗金小球藻细胞达到稳定期时，每升培养液可获得细胞干物质1.5g～3.5g，比未添加植物激素(IBA、2,4-D、NAA、6-BA)的沙漠索罗金小球藻常规培养液提高100％，有效的提高了沙漠索罗金小球藻的产量，降低了培养成本，使其具有更广阔的应用前景。

附图说明

图1为本发明本发明的培养沙漠索罗金小球藻进行培养后的生长曲线图；

具体实施方式

实施例1

取其浓度为NaNO

作为本发明的一种优选技术方案，向常规培养液中添加IBA、2,4-D、NAA、6-BA各5mg/L，得到快速生长培养液。

作为本发明的一种优选技术方案，无菌条件下，将活化的沙漠索罗金小球藻细胞接种至进沙漠索罗金小球藻快速生长培养液的培养基中，细胞初始浓度为1×10

作为本发明的一种优选技术方案，将培养基放置于光照培养架中打气培养，培养温度为27℃，光照强度为2500lux，光暗比为20h:4h。

作为本发明的一种优选技术方案，沙漠索罗金小球藻细胞生长情况测定：培养期间，每天从培养瓶中取2mL培养液用血球计数板对沙漠索罗金小球藻细胞计数或用分光光度计测定培养液在680nm波长的光密度值，确定沙漠索罗金小球藻细胞的生长阶段，当沙漠索罗金小球藻细胞数量或OD

作为本发明的一种优选技术方案，收集沙漠索罗金小球藻细胞：取50mL完成培养的沙漠索罗金小球藻细胞培养液，用0.22um滤膜通过真空抽滤器收集细胞进行细胞干重测定。

收集沙漠索罗金小球藻细胞干重测定：将获得的收集有沙漠索罗金小球藻细胞的滤膜，置于105℃烘箱中烘干4h，干燥冷却后称量并计算，获得单位体积培养液中细胞干物质含量为1.5g/L。

实施例2

取其浓度为NaNO

作为本发明的一种优选技术方案，向常规培养液中添加IBA、2,4-D、NAA、6-BA各9mg/L，得到快速生长培养液。

作为本发明的一种优选技术方案，无菌条件下，将活化的沙漠索罗金小球藻细胞接种至进沙漠索罗金小球藻快速生长培养液的培养基中，细胞初始浓度为1×10

作为本发明的一种优选技术方案，将培养基放置于光照培养架中打气培养，培养温度为28℃，光照强度为3000lux，光暗比为14h:10h。

作为本发明的一种优选技术方案，沙漠索罗金小球藻细胞生长情况测定：培养期间，每天从培养瓶中取2mL培养液用血球计数板对沙漠索罗金小球藻细胞计数或用分光光度计测定培养液在680nm波长的光密度值，确定沙漠索罗金小球藻细胞的生长阶段，当沙漠索罗金小球藻细胞数量或OD

作为本发明的一种优选技术方案，收集沙漠索罗金小球藻细胞：取50mL完成培养的沙漠索罗金小球藻细胞培养液，用0.22um滤膜通过真空抽滤器收集细胞进行细胞干重测定。

收集沙漠索罗金小球藻细胞干重测定：将获得的收集有沙漠索罗金小球藻细胞的滤膜，置于105℃烘箱中烘干4h，干燥冷却后称量并计算，获得单位体积培养液中细胞干物质含量为1.9g/L。

实施例3

取其浓度为NaNO

作为本发明的一种优选技术方案，向常规培养液中添加IBA、2,4-D、NAA、6-BA各13mg/L，得到快速生长培养液。

作为本发明的一种优选技术方案，无菌条件下，将活化的沙漠索罗金小球藻细胞接种至进沙漠索罗金小球藻快速生长培养液的培养基中，细胞初始浓度为1×10

作为本发明的一种优选技术方案，将培养基放置于光照培养架中打气培养，培养温度为29℃，光照强度为3500lux，光暗比为16h:8h。

作为本发明的一种优选技术方案，沙漠索罗金小球藻细胞生长情况测定：培养期间，每天从培养瓶中取2mL培养液用血球计数板对沙漠索罗金小球藻细胞计数或用分光光度计测定培养液在680nm波长的光密度值，确定沙漠索罗金小球藻细胞的生长阶段，当沙漠索罗金小球藻细胞数量或OD

作为本发明的一种优选技术方案，收集沙漠索罗金小球藻细胞：取50mL完成培养的沙漠索罗金小球藻细胞培养液，用0.22um滤膜通过真空抽滤器收集细胞进行细胞干重测定。

收集沙漠索罗金小球藻细胞干重测定：将获得的收集有沙漠索罗金小球藻细胞的滤膜，置于105℃烘箱中烘干4h，干燥冷却后称量并计算，获得单位体积培养液中细胞干物质含量为2.5g/L。

实施例4

取其浓度为NaNO

作为本发明的一种优选技术方案，向常规培养液中添加IBA、2,4-D、NAA、6-BA各17mg/L，得到快速生长培养液。

作为本发明的一种优选技术方案，无菌条件下，将活化的沙漠索罗金小球藻细胞接种至进沙漠索罗金小球藻快速生长培养液的培养基中，细胞初始浓度为1×10

作为本发明的一种优选技术方案，将培养基放置于光照培养架中打气培养，培养温度为29℃，光照强度为4000lux，光暗比为18h:6h。

作为本发明的一种优选技术方案，沙漠索罗金小球藻细胞生长情况测定：培养期间，每天从培养瓶中取2mL培养液用血球计数板对沙漠索罗金小球藻细胞计数或用分光光度计测定培养液在680nm波长的光密度值，确定沙漠索罗金小球藻细胞的生长阶段，当沙漠索罗金小球藻细胞数量或OD

作为本发明的一种优选技术方案，收集沙漠索罗金小球藻细胞：取50mL完成培养的沙漠索罗金小球藻细胞培养液，用0.22um滤膜通过真空抽滤器收集细胞进行细胞干重测定。

收集沙漠索罗金小球藻细胞干重测定：将获得的收集有沙漠索罗金小球藻细胞的滤膜，置于105℃烘箱中烘干4h，干燥冷却后称量并计算，获得单位体积培养液中细胞干物质含量为3g/L。

实施例5

取其浓度为NaNO

作为本发明的一种优选技术方案，向常规培养液中添加IBA、2,4-D、NAA、6-BA各20mg/L，得到快速生长培养液。

作为本发明的一种优选技术方案，无菌条件下，将活化的沙漠索罗金小球藻细胞接种至进沙漠索罗金小球藻快速生长培养液的培养基中，细胞初始浓度为1×10

作为本发明的一种优选技术方案，将培养基放置于光照培养架中打气培养，培养温度为30℃，光照强度为4500lux，光暗比为20h:4h。

作为本发明的一种优选技术方案，沙漠索罗金小球藻细胞生长情况测定：培养期间，每天从培养瓶中取2mL培养液用血球计数板对沙漠索罗金小球藻细胞计数或用分光光度计测定培养液在680nm波长的光密度值，确定沙漠索罗金小球藻细胞的生长阶段，当沙漠索罗金小球藻细胞数量或OD

作为本发明的一种优选技术方案，收集沙漠索罗金小球藻细胞：取50mL完成培养的沙漠索罗金小球藻细胞培养液，用0.22um滤膜通过真空抽滤器收集细胞进行细胞干重测定。

收集沙漠索罗金小球藻细胞干重测定：将获得的收集有沙漠索罗金小球藻细胞的滤膜，置于105℃烘箱中烘干4h，干燥冷却后称量并计算，获得单位体积培养液中细胞干物质含量为3.5g/L。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤四中压制成型可以为方形

在本发明的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制，此外，术语“第一”、“第二”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量，由此，限定有“第一”、“第二”等的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。

在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通，对于本领域的普通技术人员而言，可以通过具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义

上述虽然对本发明的具体实施例作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施例，在本领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出各种变化，而不具备创造性劳动的修改或变形仍在本发明的保护范围以内。