一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物及其应用

摘要

本发明公开了一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物包括金腰乙素和小分子抑制剂SBFI‑26；所述金腰乙素的浓度为0.25×10‑4‑1×10‑4mol/L，所述为小分子抑制剂SBFI‑26的浓度为1×10‑4mol/L；所述金腰乙素和小分子抑制剂SBFI‑26应用于制备抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物；所述药物组合物用于三阴性乳腺癌，可有效促进三阴性乳腺癌MDA‑MB‑231细胞死亡，以及抑制三阴性乳腺癌MDA‑MB‑231细胞的迁移，且所述药物组合物对正常细胞毒性低。

说明书

技术领域

本发明涉及医学生物技术领域，具体是一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物的应用。

背景技术

乳腺癌是全世界女性最常见的恶性肿瘤，约占女性恶性肿瘤的25％,在女性各种肿瘤中居首位,近年来发病率呈迅速上升趋势。三阴性乳腺癌(Triple Negative BreastCancer，TNBC)，即免疫组化显示雌激素受体(Estrogen Receptor，ER)、孕激素受体(Progesterone Receptor，PR)和HER-2均为阴性。作为乳腺癌的一种亚型，TNBC占所有乳腺癌的15％～20％。TNBC临床表现为较具侵袭性的病理特征，包括较高的复发率、对化疗药物的耐药性、确诊时较频繁的远端转移(指肿瘤细胞从原始发生的部位经由侵入循环系统，转移到身体其他部位继续生长的过程，也称恶性转移)和较差的预后等特点。而临床上治疗TNBC的方法包括手术、化疗和放疗，其中化疗是内科主要疗法。虽然化疗方案多样，但仍有35％的TNBC患者出现复发转移，且其生存期较短。

由于TNBC的细胞表面不存在特殊的细胞表面受体，因此，三阴乳腺癌具有侵袭力强，复发时间提前，恶性转移发生率高，疾病进展迅速，治疗手段有限，疗效欠佳，无病生存率、总生存率较低，总的生存时间缩短等特点。现有针对三阴性乳腺癌的药物具有毒性高、治疗缓解率较低的缺陷。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物的应用，以达到降低三阴性乳腺癌细胞的存活率及抑制细胞迁移的目的。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物，所述药物组合物包括金腰乙素和小分子抑制剂SBFI-26；所述金腰乙素的浓度为0.25-1×10

更进一步的，所述金腰乙素的浓度为0.25×10

一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物的应用，所述金腰乙素和小分子抑制剂SBFI-26应用于制备抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物。

所述金腰乙素的分子式为C

用于抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移；

所述小分子抑制剂SBFI-26的分子式为C

用于抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移；两者在一定的剂量下协同作用，促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞死亡，以及抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移。

本发明的有益效果是：本发明涉及的药物组合物应用于三阴性乳腺癌，可有效促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞死亡，以及抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移，且所述药物组合物对正常细胞毒性低。

附图说明

图1金腰乙素对于三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制图；

图2金腰乙素作用于三阴性乳腺癌细胞24h细胞生存情况图；

图3金腰乙素联合SBFI-26作用于三阴性乳腺癌细胞24h细胞存活率图；

图4金腰乙素联合SBFI-26对三阴性乳腺癌细胞迁移的抑制图；

图5金腰乙素联合SBFI-26对三阴性乳腺癌细胞迁移抑制作用图。

具体实施方式

下面结合附图进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。

实施例1

一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物，所述药物组合物包括金腰乙素和小分子抑制剂SBFI-26；所述金腰乙素的浓度为0.25×10

实施例2

一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物，所述药物组合物包括金腰乙素和小分子抑制剂SBFI-26；所述金腰乙素的浓度为0.5×10

实施例3

一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物，所述药物组合物包括金腰乙素和小分子抑制剂SBFI-26；所述金腰乙素的浓度为0.75×10

实施例4

一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物，所述药物组合物包括金腰乙素和小分子抑制剂SBFI-26；所述金腰乙素的浓度为1×10

实施例5

一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物，所述药物组合物包括金腰乙素；所述金腰乙素的浓度为0.25×10

实施例6

一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物，所述药物组合物包括金腰乙素；所述金腰乙素的浓度为0.5×10

实施例7

一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物，所述药物组合物包括金腰乙素；所述金腰乙素的浓度为0.75×10

实施例8

一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物，所述药物组合物包括金腰乙素；所述金腰乙素的浓度为1×10

实施例9

一种抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的药物组合物，所述药物组合物包括小分子抑制剂SBFI-26；所述SBFI-26的浓度为1×10

空白对照组

所有空白对照组均使用体积分数为0.1％DMSO处理。

用实施例1-实施例9涉及的药物配比以及空白对照组进行实验，检验对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增值、存活和迁移的作用。

1、金腰乙素和SBFI-26母液的配制、保存和管理

(1)称取0.0037g金腰乙素，其后将称取的金腰乙素溶于100μL的DMSO中，其后涡旋混匀得0.1mol/L的金腰乙素，其后分别向5个50μL的离心管内分别装入1×10

(2)称取10mg SBFI-26，其后溶解于1mL的DMSO中，其后涡旋混匀得10mg/mL的SBFI-26，其后向5个1.5mL的离心管内分别装入200μL的10mg/mL的SBFI-26，其后将离心管置于-80℃超低温冰箱保存。

2、金腰乙素对于三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的调控实验

(1)将处于对数生长期的三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞培养液以5000/孔接种于96孔板中，在“5％CO

(2)配置体积分数为0.1％的DMSO，浓度为0.25×10

具体操作为：

(2.1)取4支1.5mL的离心管和一支5mL的离心管，分别标记“0.1％DMSO、0.25×10

(2.2)其后取100mM的金腰乙素5μL于标记“1×10

(2.3)其后依次取(2.2)得到的1×10

(2.4)吸弃96孔板中的细胞培养液，每孔加100μL对应培养基，其后使用0.25×10

(2.5)其后分别吸弃培养基，其后每孔添加100μL新的培养基，再每孔添加10μL的CCK8试剂，其后在37℃条件下孵育2h，其后用全自动酶标仪测定A450；

(2.6)根据细胞存活率公式①计算细胞存活率；并使用GraphPad Prism软件对数据进行处理并绘图。

细胞存活率(％)＝[(As-Ab)/(Ac-Ab]×100％ ①

As：实验孔(含有细胞培养基、CCK、毒性物质)

Ac：对照孔(含有细胞培养基、CCK、没有毒性物质)

Ab：空白孔(不含细胞和毒性物质的培养基、CCK)

实验结果如图1和2所示，从图1中可以看出，0.25×10

3、金腰乙素联合SBFI-26对于三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的调控

(1)将处于对数生长期的三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞以5000/孔接种于96孔板中，每孔加100μL对应培养基，在“5％CO

(2)配置体积分数为0.1％的DMSO，浓度为0.25×10

具体操作为：

(2.1)取4支1.5mL的离心管和一支5mL的离心管，分别标记“0.1％DMSO、0.25×10

(2.2)其后取100mM金腰乙素3μL于标记“1×10

(2.3)其后依次取(2.2)得到的1×10

(2.4)吸弃96孔板中的细胞培养液，每孔加100μL对应培养基，其后使用不同浓度(0.25×10

(2.5)其后分别吸弃培养基，然后每孔添加100μL新的培养基，再添加10μL CCK8试剂，其后在37℃条件下孵育2h后使用全自动酶标仪测定A450；

(5)根据公式①计算细胞的存活率，并使用GraphPad Prism软件对数据进行分析处理。

实验结果如图3所示，可以看出，与空白对照相比，0.25×10

4、金腰乙素联合SBFI-26对于三阴性乳腺癌细胞迁移的抑制实验

(1)将在75cm

(2)去除离心后的上清液，向沉淀中加1mL的RPMI 1640 Basic(1X)，其后用移液枪吹打混匀，将细胞分散成单细胞悬液，其后进行细胞计数。

(3)其后将细胞悬液稀释成1-5×10

(4)配制体积分数为0.1％DMSO、浓度为0.25×10

具体操作如下：

(4.1)取4支15mL的离心管，分别标记“0.1％DMSO、0.25×10

(4.2)其后取0.25×10

(5)吸出6孔板培养孔内的培养基，用200μL枪头垂直于所画平行线进行细胞划痕，每孔至少有三条划痕(可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决前后观察时位置不固定的问题)；

(6)小心用DPBS冲洗划下的细胞，其后在倒置显微镜下观察，保证划痕均一；

(7)吸弃6孔板中的细胞培养液，其后向培养孔内添加提前配制的体积分数为0.1％DMSO、浓度为0.25×10

(7)在倒置显微镜下进行拍照记录培养孔板，放大倍数为200倍；

(8)采用ImageJ软件对图像进行处理，计算划痕面积；

(9)采用GraphPad Prism软件对面积数据进行分析整理。

实验结果如图4和5所示，从图4可以看出，与空白对照相比，0.25×10

综上，金腰乙素能够抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移，并且联合SBFI-26能够显著的抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞存活、增殖和迁移。

表1所用试剂和仪器表

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。