基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒，通过核酸互补杂交，目标miRNA特异性地打开发卡探针，发生催化发卡自组装反应，生成大量双链DNA产物，双链产物继续引发杂交链式反应，形成含有多个G‑四链体的DNA纳米线，G‑四链体与氯化血红素结合形成具有类辣根过氧化物酶催化活性的G‑四链体/氯化血红素DNAzyme。在过氧化氢的存在下，DNAzyme催化鲁米诺的氧化反应，产生多级扩增的化学发光信号。本发明试剂盒可以检测低至16 pM的miRNA；该检测方法无需荧光基团修饰、外部光源和蛋白酶介入，通过多级扩增反应即可有效提高miRNA检测的灵敏度，从而解决了现有检测方法由于自发荧光、荧光漂白、串光以及稳定性低导致的灵敏度有限的难题。