无定形唾液酸化寡糖

摘要

提供i)具有改善的化学稳定性和/或物理特性的无定形碳水化合物，ii)一种用于生产具有改善的化学稳定性和/或物理特性的无定形碳水化合物的方法，和iii)一种用于改善无定形碳水化合物的化学稳定性和/或物理特性的方法。

说明书

技术领域

本发明涉及无定形，优选地喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化寡糖，有利地人乳寡糖，以及提高无定形唾液酸化寡糖的稳定性的方法。

背景技术

近年来，由于包括天然分泌的寡糖的复合碳水化合物在活的生物体中发生的许多生物过程中发挥作用，其制造和商业化已显著增加。分泌的寡糖，诸如人乳寡糖(HMO)是近年来引起广泛关注的碳水化合物，并且正在成为营养和治疗行业的重要商业目标。特别地，由于HMO在人体内发生的许多生物过程中的作用，这些HMO的合成显著增加。HMO的重要性与其独特的生物活性直接相关，诸如抗细菌、抗病毒、免疫系统和认知发育增强活性。人乳寡糖被发现在人肠道系统中充当益生元，有助于发展和维持肠道菌群。此外，它们还被证明是抗炎的，并且因此这些化合物是营养行业中有吸引力的组分，用于生产例如婴儿配方食品、婴儿谷类食品、临床婴儿营养产品、幼儿配方食品，或作为膳食补充剂或儿童、成人、老年人或哺乳期妇女的健康功能食品，均为合成组成和天然存在的化合物及其盐。同样，由于这些化合物作为免疫调节剂的预后用途，这些化合物在医药行业用于治疗剂的生产也受关注。迄今为止，已经确定140多种HMO的结构(参见Urashima等人：乳寡糖(Milkoligosaccharides),Nova Biomedical Books,New York,2011；ChenAdv.Carbohydr.Chem.Biochem.72,113(2015))，并且相当多的可能存在于人乳中。由于唾液酸化HMO在支持对病原体的抵抗力、肠道成熟、免疫功能和认知发育方面发挥作用，它们被认为对新生儿具有显著的健康益处(ten Bruggencate等人,Nutr.Rev.72,377(2014))。

唾液酸化人乳寡糖主要以分离形式的无定形固体形式存在，参见例如Fierfort等人,J.Biotechnol.134,261(2008)、Drouillard等人,Carbohydr.Res.345,1394(2010)、WO2017/152918或US 2018/0002363。仅6'-唾液酸乳糖(6'-SL)的一些盐和3'-唾液酸乳糖(3'-SL)的钠盐已被描述为结晶材料(参见WO 2010/116317、EP-A-3378868、WO 2017/195743)。

结晶和无定形物质的性质不同。虽然物质的无定形形式通常预期显示出更好的溶解度和生物利用率，但其结晶对应物在化学和物理上更稳定且吸湿性更小(Bauer,J.Valid.Technol.63(2009年夏))。

WO 2013/185780公开一种用于提高6'-SL的稳定性的方法，使得将6'-SL的水性溶液喷雾干燥，以提供玻璃化转变温度(T

然而，需要改善无定形唾液酸化寡糖，优选地唾液酸化HMO的化学稳定性和/或物理特性，同时维持其有益特性。

发明内容

本发明的目的是提供i)具有改善的化学稳定性和/或物理特性的无定形唾液酸化寡糖，ii)一种用于生产具有改善的化学稳定性和/或物理特性的唾液酸化寡糖的方法，和iii)一种用于改善唾液酸化寡糖的化学稳定性和/或物理特性的方法。

因此，本发明的一个方面涉及无定形唾液酸化寡糖或其盐，其中当在其5w/w％水性溶液中测量时，所述唾液酸化寡糖的pH为约3.9-6.0，优选为3.9-5.3。还优选地，无定形唾液酸化寡糖为喷雾干燥或冷冻干燥的物质。

本发明的另一个方面涉及一种用于制备无定形唾液酸化寡糖或其盐的方法，所述方法包括以下步骤：

a)制备所述唾液酸化寡糖的水性溶液，

b)如果需要，向步骤a)得到的水性溶液中添加酸性或碱性非碳水化合物组分，使得pH不高于5.6，优选地低于5.0，然后

c)将步骤a)中得到的水性溶液或步骤b)中得到的pH调节溶液固化，优选地喷雾干燥或冷冻干燥，从而得到无定形唾液酸化寡糖，其中当在其5w/w％水性溶液中测量时，所述唾液酸化寡糖的pH不高于约6.0，优选不高于约5.3。

本发明的另一个方面涉及一种用于改善无定形唾液酸化寡糖的化学稳定性和/或物理特性的方法，所述方法包括将唾液酸化寡糖或其盐的水性溶液固化，优选地喷雾干燥或冷冻干燥，水性溶液的pH不低于3.6且不高于5.6，优选地低于5.0。上述方法提供一种无定形唾液酸化寡糖或其盐，当在其5w/w％水性溶液中测量时，其pH为约3.9-6.0，优选地约3.9-5.3，并且示出改善的化学稳定性和/或物理特性。

本发明的另一个方面为一种用于防止或减少无定形唾液酸化寡糖或其盐从醛糖异构化成酮糖的方法，所述方法包括将唾液酸化寡糖的水性溶液喷雾干燥或冷冻干燥，水性溶液的pH不高于5.6，优选地低于5.0。上述方法提供一种无定形唾液酸化寡糖或其盐，当在其5w/w％水性溶液中测量时，其pH不高于约6.0，优选地不高于约5.3，其示出减少的醛糖-酮糖异构化。

本公开的另一个方面为通过包括以下步骤的方法得到或可得到的无定形唾液酸化寡糖或其盐：

a)制备所述唾液酸化寡糖的水性溶液，

b)如果需要，向步骤a)得到的水性溶液中添加酸性或碱性非碳水化合物组分，使得pH不高于5.6，优选地低于5.0，然后

c)将步骤a)中得到的水性溶液或步骤b)中得到的pH调节溶液固化，优选地喷雾干燥或冷冻干燥，从而得到无定形唾液酸化寡糖，其中当在其5w/w％水性溶液中测量时，所述唾液酸化寡糖的pH不高于约6.0，优选不高于约5.3。

优选地，在步骤b)中调节pH，使得其不低于3.6且不高于5.6，优选地不低于3.6且低于5.0。

附图说明

下文将参考附图1进一步详细描述本发明，其示出在加速热稳定性测试期间在具有各种pH的冷冻干燥的6'-SL样品中形成的6'-唾液酸乳果糖的量。

具体实施方式

术语“唾液酸化寡糖”意指由至少两个，优选地三至八个，更优选地三至六个的单糖单元组成的糖聚合物，单糖单元中至少一个为唾液酸(N-乙酰基神经氨酸，Neu5Ac)。唾液酸化中除唾液酸外的单糖单元为具有5-9个碳原子的糖，其为醛糖(例如D-葡萄糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-核糖、D-阿拉伯糖、L-阿拉伯糖、D-木糖等)、酮糖(例如D-果糖、D-山梨糖、D-塔格糖等)、脱氧糖(例如L-鼠李糖、L-岩藻糖等)、脱氧氨基糖(例如N-乙酰基葡糖胺、N-乙酰基甘露糖胺、N-乙酰基半乳糖胺等)、糖醛酸、酮糖酸(例如唾液酸)或具有游离氨基的脱氧氨基糖(例如葡糖胺)，前提是唾液酸化寡糖还原端的单糖单元是醛糖。三或更高级寡糖可具有含有通过糖苷间键(interglycosidic linkages)相互连接的单糖单元的直链或支链结构。

术语“唾液酸化人乳寡糖”、“唾液酸化HMO”或“酸性HMO”意指在人母乳中发现的包含唾液酸的复合碳水化合物(Urashima等人：乳寡糖(Milk Oligosaccharides),NovaMedical Books,NY,2011；Chen,Adv.Carbohydr.Chem.Biochem.72,113(2015))。HMO的核心结构为还原端的乳糖单元，该还原端被一个或多个β-N-乙酰基-乳糖氨基和/或一个或多个β-乳-N-二糖基单元拉长，并且所述核心结构被α-唾液酸部分取代并且任选地被α-L-吡喃岩藻糖基取代。在唾液酸化HMO中，唾液酸基团通过α2,3-或α2,6-键连接到末端半乳糖，或通过α2,6-键连接到N-乙酰基葡糖胺基：

酸性HMO的实例包括3'-唾液酸乳糖(3'-SL)、6'-唾液酸乳糖(6'-SL)、3-岩藻糖基-3'-唾液酸乳糖(FSL)、LST a(NeuAcα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc)、岩藻糖基-LST a(FLST a，NeuAcα2-3Galβ1-3[Fucα1-4]GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc)、LST b(Galβ1-3[NeuAcα2-6]GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc)、岩藻糖基-LST b(FLST b，Fucα1-2Galβ1-3[NeuAcα2-6]GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc)、LST c(NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc)、岩藻糖基-LST c(FLST c，NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4[Fucα1-3]Glc)、唾液酸-乳-N-六糖(SLNH，Galβ1-3GlcNAcβ1-3[NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-6]Galβ1-4Glc)、唾液酸-乳-N-新六糖I(SLNnH-I，Galβ1-4GlcNAcβ1-3[NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-6]Galβ1-4Glc)、唾液酸-乳-N-新六糖II(SLNnH-II，NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3[Galβ1-4GlcNAcβ1-6]Galβ1-4Glc)和二唾液酸-乳-N-四糖(DS-LNT，NeuAcα2-3Galβ1-3[NeuAcα2-6]GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc)。

术语“唾液酸化寡糖的酸加成盐”、“唾液酸化HMO的酸加成盐”、“唾液酸化寡糖的盐”或“唾液酸化HMO的盐”意指由唾液酸化寡糖或HMO的带负电的酸残基和任何化学计量比例的阳离子组成的缔合离子对。阳离子通常为无机(金属)阳离子。在唾液酸化寡糖，优选地唾液酸化HMO，更优选地3'-SL或6'-SL的酸加成盐中，在一个实施方式中，成盐阳离子为碱金属离子(M

在一个实施方式中，术语“约”意指与指示值的±10％偏差，或在另一个实施方式中，意指与指示值的±5％偏差。

当提到pH值时，通常通过pH计测量。

尽管无定形化合物，尤其是亲水性化合物，通常示出更好的水溶性、更高的溶解速率和更好的生物利用率，这是制药和食品行业产品开发的关键特性，但预期其保质期比相应结晶形式的化合物短。无定形化合物往往比其结晶形式更趋于发生化学降解/转化，并且它们的物理外观可例如由于凝集发生不利变化。本发明人注意到，在某些具有醛糖还原末端的无定形(喷雾干燥或冷冻干燥)唾液酸化寡糖的样品中，在长期储存后，出现一种新的碳水化合物类型的副产物，其在样品中的量作为时间的函数增加。作为仔细分析的结果，这种污染证明是还原醛糖寡糖的重排酮糖衍生物，所述重排可如下对己醛糖说明：

本发明人惊奇地发现，如果无定形，例如喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化寡糖由其水性溶液制备，其中仔细调节pH，那么在唾液酸化寡糖的无定形状态下，不发生上述重排，或至少以显著较低或降低的程度发生。就这一点而言，喷雾干燥或冷冻干燥的材料的化学稳定性可得到显著改善。

因此，本发明的第一方面提供一种无定形唾液酸化寡糖，其中当在其5w/w％水性溶液中测量时，所述无定形唾液酸化寡糖的pH不大于6，优选地约为3.9-6.0，更优选地不大于5.3，甚至更优选地为3.9-5.3。

在一个实施方式中，无定形唾液酸化寡糖为喷雾干燥的材料，在其它实施方式中，为冷冻干燥的物质。

优选地，在一个实施方式中，唾液酸化寡糖还原端的单糖单元为葡萄糖，更优选地半乳糖单元通过β1-4糖苷间键附接到所述葡萄糖以形成乳糖部分。

在一个优选的实施方式中，唾液酸化寡糖为三或更高级寡糖，有利地在还原端具有乳糖部分。

特别地，在还原端包含乳糖部分的三或更高级唾液酸化寡糖为唾液酸化人乳寡糖(HMO)。唾液酸化HMO优选地为三糖至八糖HMO，更优选地为三糖、四糖、五糖或六糖HMO。更优选地，三糖唾液酸化HMO可选自3'-唾液酸乳糖(3'-SL)和6'-唾液酸乳糖(6'-SL)；四糖唾液酸化HMO为3-岩藻糖基-3'-唾液酸乳糖(FSL)；五糖唾液酸化HMO可选自LST a(NeuAcα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc)、LST b(Galβ1-3[NeuAcα2-6]GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc)和LST c(NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc)；六糖唾液酸化HMO可选自岩藻糖基-LSTa(FLST a，NeuAcα2-3Galβ1-3[Fucα1-4]GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc)、岩藻糖基-LST b(FLSTb，Fucα1-2Galβ1-3[NeuAcα2-6]GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc)、岩藻糖基-LST c(FLST c，NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4[Fucα1-3]Glc)和二唾液酸-乳-N-四糖(DS-LNT，NeuAcα2-3Galβ1-3[NeuAcα2-6]GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc)。

在一个实施方式中，根据本发明的无定形，优选地喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化寡糖可包含多于一种唾液酸化寡糖或HMO，诸如两种、三种、四种或五种唾液酸化寡糖或HMO。

在其它实施方式中，根据本发明的无定形，优选地喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化寡糖可包含一种或多种非唾液酸化中性寡糖；优选地，根据本发明的无定形，优选地喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化HMO可包含一种或多种非唾液酸化中性HMO，诸如2'-FL、3-FL、DFL、LNT和LNnT中的一种或多种。在优选的实施方式中，根据本发明的无定形，优选地喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化寡糖由或基本上由一种或两种唾液酸化寡糖组成；更优选地，根据本发明的喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化HMO由或基本上由一种或两种唾液酸化HMO组成。

高温下的强制稳定性比较测试示出，在例如通过喷雾干燥或冷冻干燥固化成无定形材料之前，仔细调节唾液酸化寡糖，优选地唾液酸化HMO的水性溶液的pH，显著减少固体(无定形)状态下重排的含酮基的糖的形成。要求保护的无定形，例如喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化寡糖或HMO在其5w/w％水性溶液中的pH应不高于约6.0。高于此值的pH非常接近中性区域，根据比较测试，在中性区域内更容易发生醛糖-酮糖重排。因此，当生产所述唾液酸化寡糖时，使得当在其5w/w％水性溶液中测量时，例如通过喷雾干燥或冷冻干燥来固化的唾液酸化寡糖的pH不高于6.0，诸如不高于约4.5、5.1或5.6，例如在约3.5-6、3.5-5.6、3.5-5.1、3.5-4.5、3.9-6、3.9-5.6、3.9-5.1、3.9-4.5、4.2-5.6、4.5-5.6、4.5-6.0、4.2-5.1、4.5-5.1、5.1-6.0、5.1-5.6或5.6-6.0之间，可减少、最小化或甚至防止无定形唾液酸化寡糖的醛糖-酮糖异构化。优选地，要求保护的无定形，例如喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化寡糖或HMO在其5w/w％水性溶液中的pH应不高于约5.3，诸如不高于约4.5或5.1，例如在约3.5-5.1、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-5.1、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-5.1、4.2-4.8、4.2-4.5、4.5-5.1或4.5-4.8之间。更优选地，要求保护的无定形，例如喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化寡糖或HMO在其5w/w％水性溶液中的pH应不高于约5.1，诸如不高于约4.5或4.8，例如在约3.5-5.1、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-5.1、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-5.1、4.2-4.8、4.2-4.5、4.5-5.1或4.5-4.8之间。甚至更优选地，要求保护的无定形，例如喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化寡糖或HMO在其5w/w％水性溶液中的pH应不高于约4.8，诸如不高于约4.5，例如在约3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-4.8、4.2-4.5或4.5-4.8之间。

此外，高温下的强制稳定性比较测试示出，无定形唾液酸化寡糖或HMO的水性溶液的pH越低，在固体(无定形)状态下唾液酸残基从其结构中离去的可能性越高。就这一点而言，在例如通过喷雾干燥或冷冻干燥将唾液酸化寡糖的水性溶液固化成无定形材料之前，仔细调节其pH可以最小化在所述唾液酸化寡糖或HMO的固体(无定形，例如喷雾干燥或冷冻干燥)状态下整体副产物形成(其为重排的含酮基的糖和水解产物)。因此，当在无定形，例如喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化寡糖或HMO的5w/w％水性溶液中测量时，其pH最好不低于约3.9。低于约3.9的pH，即使在固体状态下，似乎也通过水解糖苷间键中的至少一个，优选地唾液酸键来启动寡糖的酸催化的降解。因此，优选的是，当唾液酸化寡糖的5w/w％溶液在固化成无定形材料之后，其pH在约3.9-6.0之间，诸如3.9-5.6、3.9-5.1、4.2-5.6、4.5-5.6、4.5-6.0、4.2-5.1、4.5-5.1、5.1-6.0、5.1-5.6或5.6-6.0，更优选地在约3.9-5.3之间，诸如3.9-5.1、4.2-5.1、4.5-5.1、4.8-5.1、4.2-5.3、4.5-5.3、4.8-5.3、3.9-4.8、4.2-4.8、4.5-4.8、3.9-4.5、4.2-4.5或3.9-4.2，甚至更优选地在约3.9-5.1之间，诸如4.2-5.1、4.5-5.1、4.8-5.1、3.9-4.8、4.2-4.8、4.5-4.8、3.9-4.5、4.2-4.5或3.9-4.2，特别地在约3.9-4.8之间，诸如4.2-4.8、4.5-4.8、3.9-4.5、4.2-4.5或3.9-4.2，以例如在延长的储存下通过减少或最小化在无定形唾液酸化寡糖中降解(例如水解)和/或转化(例如重排，诸如含酮的糖重排)副产物的量改善所述无定形唾液酸化寡糖的化学稳定性和/或物理特性。

本发明的第二个方面涉及一种用于制备无定形唾液酸化寡糖或HMO，优选地根据第一方面的无定形唾液酸化寡糖或HMO的方法，所述方法包括以下步骤：

a)制备所述唾液酸化寡糖或HMO的水性溶液，

b)如果需要，向步骤a)得到的水性溶液中添加酸性或碱性非碳水化合物组分，使得pH不高于5.6，优选地低于5.0，然后

c)将步骤a)中得到的水性溶液或步骤b)中得到的pH调节的溶液固化，优选地喷雾干燥或冷冻干燥，

由此得到无定形唾液酸化寡糖或HMO，其中当在其5w/w％水性溶液中测量时，所述唾液酸化寡糖的pH不大于约6.0，优选地不大于约5.3。

步骤b)中，短语“如果需要”是指当步骤a)中得到的溶液pH高于5.6，并且pH必须通过添加酸性组分将pH降低至5.6或比5.6低的情况；优选地，如果pH不低于5.0，那么pH必须降低至比5.0低。此外，如果步骤a)中得到的溶液太酸，那么可能需要添加碱。因此，如果步骤a)中得到的溶液的pH高于5.6，那么步骤b)是强制的，并且步骤c)为在步骤b)之后将如此得到的溶液固化，否则步骤b)为任选的；优选地，如果步骤a)中得到的溶液的pH不低于5.0，那么步骤b)为强制的，并且步骤c)为在步骤b)之后将如此得到的溶液固化，否则步骤b)为任选的。如果步骤a)中得到的溶液的pH不高于5.6，优选地低于5.0，那么可跳过步骤b)，并且步骤c)为将步骤a)中得到溶液固化。

就这一点而言，根据第二方面方法包括以下步骤：

i)制备唾液酸化寡糖或HMO的水性溶液，

ii)检查步骤i)中得到的溶液的pH值，

iiia)如果所述pH高于5.6，那么添加酸性非碳水化合物组分，以将pH降低至5.6或比5.6低，优选地如果所述pH不低于5.0，那么添加酸性非碳水化合物组分以将pH降低至比5.0低，

iiib)如果所述pH不高于5.6，那么可任选地添加酸性或碱性非碳水化合物组分，以使得pH保持不高于5.6；优选地，如果所述pH低于5.0，那么可任选地添加酸性或碱性非碳水化合物组分，以使得pH保持低于5.0，和

iv)将步骤iiia)或步骤iiib)得到的水性溶液固化，优选地喷雾干燥或冷冻干燥。

在一个实施方式中，可制备根据第一方面的无定形唾液酸化寡糖，其中

-如果在步骤b)中需要，向步骤a)中得到的水性溶液中添加酸性或碱性非碳水化合物组分，使得pH不低于3.6且不高于5.6，优选地低于5.0，或

-在步骤iiia)中，添加酸性非碳水化合物组分，以将pH设定在3.6和5.6之间，优选地在3.6和低于5.0之间，或

-在步骤iiib)中，可任选地添加酸性或碱性非碳水化合物组分，使得pH保持或设定在3.6和5.6之间，优选地在3.6和低于5.0之间。

在方法的步骤a)或步骤i)中，唾液酸化寡糖的水性溶液以常规方式制备。当溶液澄清并且唾液酸化寡糖完全溶解时是优选的。在向其添加水/或将其添加到水之前，唾液酸化寡糖可呈任何固体形式(例如，结晶、无定形[沉淀、冷冻干燥、喷雾干燥]或其混合物)、呈糖浆形式或甚至在水性溶液中。在进行步骤a)或步骤i)之前，唾液酸化寡糖可含有一定量或残留量的(挥发性)有机溶剂，因为那些溶剂在或可在方法的步骤c)或步骤iv)中基本去除，并且将不包含在可得到的无定形最终物质中。在步骤a)或步骤i)中制备的唾液酸化寡糖水性溶液的浓度不是至关重要的，并且当pH为酸性时，可在宽的浓度区间内变化。唾液酸化寡糖或HMO在其水性溶液中的浓度不真正影响测量的pH，pH的浓度依赖性在大约±0.3pH单位范围内，越接近唾液酸化寡糖的pK

在方法的步骤b)或步骤iiib)中，分别在步骤a)或步骤i)中得到的溶液的pH调节可能是需要的。唾液酸化寡糖本身是酸性化合物，因此其水性溶液的pH实际上小于7，更准确地说，它取决于溶液中其酸性和互补碱性(盐)形式的比例。因此，如果人们希望偏离化合物的原始pH，那么可添加酸性物质，优选地酸性非碳水化合物组分，或碱性物质，优选地碱性非碳水化合物组分，以建立期望的pH。

在步骤b)、iiia)或iiib)中的任何一种情况下，优选地在搅拌下，将酸性或碱性物质缓慢添加到唾液酸化寡糖的水性溶液，并且例如通过pH计连续检查pH。如果达到期望的pH，那么终止添加酸或碱。出于实际原因，当pH调节完成时，唾液酸化寡糖在其水性溶液中的浓度优选地在1-60w/w％之间。

在步骤iiia)中添加或任选地在步骤b)或iiib)中添加的酸性非碳水化合物组分通常为无机酸或与碳水化合物不同并且具有酸性性质的有机化合物。优选地，合适的无机和有机酸为已知用于制药和食品工业时没有安全问题的那些，例如通常用于制备具有碱性性质的活性药物成分的药学上可接受的酸加成盐的那些。无机酸可选自例如硫酸及其单盐(如硫酸氢钠)、HCl、HBr、硝酸、磷酸及其单盐和二盐(如磷酸二氢钠或磷酸氢二钠)或高氯酸。还优选地，合适的有机酸为链烷酸如甲酸、乙酸或丙酸，链烷二酸如草酸、丙二酸或琥珀酸，羟基酸如酒石酸、乳酸或苹果酸，三羧酸如柠檬酸。

任选地在步骤b)或iiib)中添加的碱性非碳水化合物组分通常为无机碱，诸如金属(例如碱金属或碱土金属)、氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，有利地氢氧化物，例如NaOH、KOH或Ca(OH)

在步骤a)或i)中得到或在步骤b)、iiia)或iiib)中设定的水性溶液的pH不一定与随后可在根据上述步骤c)或iv)固化之后的无定形唾液酸化寡糖的5w/w％水性溶液中测量的pH值相同，并且其可以有大约最大+0.2-0.5pH单位的不同，即高大约0.2-0.5pH单位。可能的原因除了pH电极的误差阶外，样品的组成在固化条件下稍微变化，(例如挥发性酸性组分的蒸发，轻微分解稍后影响pH等)和/或缓冲能力稍微变化。根据经验，当在步骤a)或i)中得到或在步骤b)、iiia或iiib)中设定的水性溶液的pH测量在3.1-5.6之间时，当在作为在步骤c)或iv)中固化的结果得到的无定形唾液酸化寡糖的5w/w％水性溶液中测量时，其pH为约3.4-6.0。

在步骤c)中，无论情况如何，以常规方式：例如喷雾干燥、冷冻干燥或沉淀，将步骤a)或b)中得到的水性溶液固化成无定形物质。类似地，在步骤iv)中，无论情况如何，以常规方式：例如喷雾干燥、冷冻干燥或沉淀，将步骤iiia)或iiib)中得到的水性溶液固化成无定形物质。

本发明的第三方面涉及通过根据第二方面的方法得到或可得到的无定形唾液酸化寡糖。

本发明的第四方面为一种用于防止或减少无定形唾液酸化寡糖或HMO从醛糖异构化成酮糖的方法，所述方法包括将唾液酸化寡糖的水性溶液喷雾干燥或冷冻干燥，其pH不高于5.6，优选地低于5.0。上述方法提供一种无定形唾液酸化寡糖，当在其5w/w％水性溶液中测量时，其pH不高于约6.0，优选地不高于5.3，其示出减少的醛糖-酮糖异构化。

本发明人惊奇地发现，如果无定形，例如喷雾干燥或冷冻干燥的唾液酸化寡糖或HMO由其水性溶液制备，其中仔细调节pH，那么在无定形状态下，不发生上述重排，或至少以显著较低或降低的程度发生。就这一点而言，喷雾干燥或冷冻干燥的材料的化学稳定性可得到显著改善。当无定形唾液酸化寡糖或HMO由所述唾液酸化寡糖或HMO的水性溶液制备时实现，水性溶液的pH不高于5.6，诸如不高于4.1、5.1或5.6，例如在3.1-5.6、3.1-5.1、3.1-4.6、3.1-4.1、3.6-5.6、3.6-5.1、3.6-4.6、3.6-4.1、3.9-5.1、4.1-5.1、4.1-5.6、3.9-4.6、4.1-4.6、4.6-5.6、4.6-5.1或5.1-5.6之间。当在无定形唾液酸化寡糖的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不大于约6.0，诸如不大于约4.5、5.1或5.6，例如在约3.5-6、3.5-5.6、3.5-5.1、3.5-4.5、3.9-6、3.9-5.6、3.9-5.1、3.9-4.5、4.2-5.6、4.5-5.6、4.5-6.0、4.2-5.1、4.5-5.1、5.1-6.0、5.1-5.6或5.6-6.0之间。

优选地，无定形唾液酸化寡糖或HMO由所述唾液酸化寡糖或HMO制备，水性溶液的pH低于5.0，诸如不高于4.1或4.8，例如在3.1-4.8、3.1-4.5、3.1-4.1、3.1-3.9、3.1-3.6、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-5.0、4.2-4.8或4.2-4.5之间。当在无定形唾液酸化寡糖的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不高于约5.3，诸如不高于约4.5、5.1，例如在约3.5-5.3、3.5-5.1、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-5.3、3.9-5.1、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-5.3、4.2-5.1、4.2-4.8、4.2-4.5、4.5-5.3、4.5-5.1或4.5-4.8之间。

更优选地，无定形唾液酸化寡糖或HMO由所述唾液酸化寡糖或HMO的水性溶液制备，水性溶液的pH不高于4.8，例如在3.1-4.8、3.1-4.5、3.1-4.1、3.1-3.9、3.1-3.6、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-4.8或4.2-4.5之间。当在由此生产的无定形唾液酸化寡糖的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不高于约5.1，诸如不大于约4.5或4.8，例如在约3.5-5.1、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-5.1、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-5.1、4.2-4.8、4.2-4.5、4.5-5.1或4.5-4.8之间。

甚至更优选地，无定形唾液酸化寡糖或HMO由所述唾液酸化寡糖或HMO的水性溶液制备，水性溶液的pH不高于4.5，例如在3.1-4.5、3.1-4.1、3.1-3.9、3.1-3.6、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.5、3.9-4.2或4.2-4.5之间。当在由此生产的无定形唾液酸化寡糖的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不高于约4.8，诸如不高于约4.5，例如在约3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-4.8、4.2-4.5或4.5-4.8之间。

在一个实施方式中，唾液酸化寡糖为3’-SL、其盐，优选地钠盐，或其混合物。无定形3’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH不高于5.6，诸如不高于4.1、5.1或5.6，例如在3.2-5.6、3.2-5.1、3.2-4.6、3.2-4.1、3.6-5.6、3.6-5.1、3.6-4.6、3.6-4.1、3.9-5.1、4.1-5.1、4.1-5.6、3.9-4.6、4.1-4.6、4.6-5.6、4.6-5.1或5.1-5.6之间。当在由此生产的无定形3’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不大于约6.0，诸如不大于约4.5、5.1或5.6，例如在约3.9-6、3.9-5.6、3.9-5.1、3.9-4.5、4.2-5.6、4.5-5.6、4.5-6.0、4.2-5.1、4.5-5.1、5.1-6.0、5.1-5.6或5.6-6.0之间。优选地，无定形3’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH低于5.0，诸如不高于4.1或4.8，例如在3.1-4.8、3.1-4.5、3.1-4.1、3.1-3.9、3.1-3.6、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-5.0、4.2-4.8或4.2-4.5之间。当在由此生产的无定形3’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不高于约5.3，诸如不高于约4.5或5.1，例如在约3.5-5.3、3.5-5.1、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-5.3、3.9-5.1、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-5.3、4.2-5.1、4.2-4.8、4.2-4.5、4.5-5.3、4.5-5.1或4.5-4.8。更优选地，无定形3’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH不高于4.8，例如在3.1-4.8、3.1-4.5、3.1-4.1、3.1-3.9、3.1-3.6、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-4.8或4.2-4.5之间。当在由此生产的无定形3’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不大于约5.1，诸如不大于约4.5或4.8，例如在约3.5-5.1、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-5.1、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-5.1、4.2-4.8、4.2-4.5、4.5-5.1或4.5-4.8。甚至更优选地，无定形3’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH不高于4.5，例如在3.1-4.5、3.1-4.1、3.1-3.9、3.1-3.6、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.5、3.9-4.2或4.2-4.5之间。当在由此生产的无定形3’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不高于约4.8，诸如不大于约4.5，例如在约3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-4.8、4.2-4.5或4.5-4.8之间。在其它实施方式中，唾液酸化寡糖为6’-SL、其盐，优选地钠盐，或其混合物。无定形6’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH不高于5.2，诸如不高于4.0或4.8，例如在3.1-5.2、3.1-4.8、3.1-4.0、3.6-5.2、3.6-4.8、3.6-4.0、4.0-5.2、4.0-4.8或4.8-5.2之间。当在由此生产的无定形6’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不大于约5.6，诸如不大于约4.3或5.1，例如在约3.4-4.3、3.4-5.1、3.4-5.6、3.9-5.6、3.9-5.1、3.9-4.3、4.3-5.6、4.3-5.1或5.1-5.6之间。优选地，无定形6’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH低于5.0，诸如不高于4.1或4.8，例如在3.1-4.8、3.1-4.5、3.1-4.1、3.1-3.9、3.1-3.6、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-5.0、4.2-4.8或4.2-4.5之间。当在由此生产的无定形6’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不高于约5.3，诸如不高于约4.5或5.1，例如在约3.5-5.3、3.5-5.1、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-5.3、3.9-5.1、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-5.3、4.2-5.1、4.2-4.8、4.2-4.5、4.5-5.3、4.5-5.1或4.5-4.8之间。更优选地，无定形6’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH不高于4.8，例如在3.1-4.8、3.1-4.5、3.1-4.1、3.1-3.9、3.1-3.6、3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-4.8或4.2-4.5之间。当在由此生产的无定形6’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不大于约5.1，诸如不大于约4.5或4.8，例如在约3.5-5.1,3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-5.1、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-5.1、4.2-4.8、4.2-4.5、4.5-5.1或4.5-4.8之间。甚至更优选地，无定形6’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH不高于4.5，例如在3.1-4.5、3.1-4.1、3.1-3.9、3.1-3.6、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.5、3.9-4.2或4.2-4.5之间。当在由此生产的无定形6’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不高于约4.8，诸如不大于约4.5，例如在约3.5-4.8、3.5-4.5、3.5-4.2、3.5-3.9、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-4.8、4.2-4.5或4.5-4.8之间。

本发明的第五方面涉及一种用于改善无定形唾液酸化寡糖或HMO的化学稳定性和/或物理特性的方法，所述方法包括将唾液酸化寡糖或HMO的水性溶液固化，优选地喷雾干燥或冷冻干燥，所述水性溶液的pH不低于3.6，诸如3.9，并且不高于5.6，低于5.0。上述方法提供一种无定形唾液酸化寡糖或HMO，当在其5w/w％水性溶液中测量时，其pH低于约3.9且不高于约6.0，优选地不高于5.3，并且示出改善的化学稳定性和/或物理特性。

术语“改善无定形唾液酸化寡糖的化学稳定性”优选地意指与由pH在上文公开的范围外的其水性溶液制备的无定形唾液酸化寡糖相比，当由其生产无定形唾液酸化寡糖的水性溶液的pH在上述范围内时，无定形唾液酸化寡糖较不易于进行化学降解或重排反应。因此，影响材料保质期的化学稳定性得到改善。化学降解的实例为通过破坏至少一个糖苷间键(通常为唾液酸键)的水解分解；化学重排的实例为醛糖重排为酮糖。

术语“改善无定形唾液酸化寡糖的物理特性”优选地意指与由pH在上文公开的范围外的其水性溶液制备的无定形唾液酸化寡糖相比，当由其生产无定形唾液酸化寡糖的其水性溶液的pH在上述范围内时，无定形唾液酸化寡糖示出较好的物理特性。改善物理特性的实例为相变倾向较低(例如玻璃化、结晶化)或凝集程度较低。

本发明人惊奇地发现，可最小化在所述唾液酸化寡糖固体(无定形，例如喷雾干燥或冷冻干燥)状态下的总副产物形成(即重排的含酮的糖和水解产物)。当无定形唾液酸化寡糖由所述唾液酸化寡糖的水性溶液制备时实现，所述水性溶液的pH不低于3.6，且不高于5.6，诸如3.6-5.1、3.6-4.6、3.9-5.1、4.1-5.1、4.1-5.6、3.9-4.6、4.1-5.6、4.6-5.6、4.6-5.1或5.1-5.6。当在由此生产的无定形唾液酸化寡糖的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不低于3.9，且不高于6.0，诸如3.9-5.6、3.9-5.1、4.2-5.6、4.5-5.6、4.5-6.0、4.2-5.1、4.5-5.1、5.1-6.0、5.1-5.6或5.6-6.0。

优选地，无定形唾液酸化寡糖或HMO由所述唾液酸化寡糖或HMO的水性溶液制备，水性溶液的pH不低于3.6，并且低于5.0，例如在3.6-4.6、3.6-4.2、3.6-3.9、3.9-4.6、3.9-4.2或4.1-4.6之间。当在由此生产的无定形唾液酸化寡糖的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不低于3.9，并且不高于5.3，例如在约3.9-5.3、3.9-5.1、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.2、4.2-5.3、4.2-5.1、4.2-4.8、4.2-4.5、4.5-5.3、4.5-5.1或4.5-4.8之间。

更优选地，无定形唾液酸化寡糖或HMO由所述唾液酸化寡糖或HMO的水性溶液制备，水性溶液的pH不低于3.9，并且低于5.0，例如在3.9-4.6、3.9-4.2或4.1-4.6之间。当在由此生产的无定形唾液酸化寡糖的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不低于4.2，并且不高于约5.3，例如在约4.2-5.1、4.2-4.8、4.2-4.5、4.5-5.3、4.5-5.1或4.5-4.8之间。

甚至更优选地，无定形唾液酸化寡糖或HMO由所述唾液酸化寡糖或HMO的水性溶液制备，水性溶液的pH不低于3.9，并且低于4.5，例如在3.9-4.2之间。当在由此生产的无定形唾液酸化寡糖的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不低于4.2，并且不高于约4.8，例如在约4.2-4.5或4.5-4.8之间。

在一个实施方式中，唾液酸化寡糖为3’-SL、其盐，优选地钠盐，或其混合物。无定形3’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH不低于3.9，并且不高于5.6，诸如3.6-5.6、3.6-5.1、3.6-4.6、3.6-4.1、3.9-5.1、4.1-5.1、4.1-5.6、3.9-4.6、4.1-4.6、4.6-5.6、4.6-5.1或5.1-5.6。当在由此生产的无定形3’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH为约4.2-6.0，诸如约4.2-5.6、4.5-5.6、4.5-6.0、4.2-5.1、4.5-5.1、5.1-6.0、5.1-5.6或5.6-6.0。优选地，无定形3’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH不低于3.9，并且低于5.0，例如在3.9-4.6、3.9-4.1或4.1-4.6之间。当在由此生产的无定形3’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不低于4.2并且不高于约5.3，例如在约4.2-4.9、4.2-4.5、4.5-5.3或4.5-4.9之间。更优选地，无定形3’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH不低于3.9，并且不高于4.6，例如在3.9-4.1或4.1-4.6之间。当在由此生产的无定形3’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH不低于4.2，并且不高于约4.9，例如在约4.2-4.5或4.5-4.9之间。

在其它实施方式中，唾液酸化寡糖为6’-SL、其盐，优选地钠盐，或其混合物。无定形6’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH不低于3.6，并且不高于5.2，诸如在3.6-5.2、3.6-4.8、3.6-4.0、4.0-5.2、4.0-4.8或4.8-5.2之间。当在由此生产的无定形6’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH为约3.9-5.6，诸如约3.9-5.1、3.9-4.3、4.3-5.6、4.3-5.1或5.1-5.6。优选地，无定形6’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH不低于3.6，并且不高于4.8，诸如不高于4.0或4.4，例如在3.6-4.4、3.6-4.0、4.0-4.8、4.0-4.4或4.4-4.8之间。当在由此生产的无定形6’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH为约3.9-5.1、3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.3、4.3-5.1、4.3-4.8或4.3-4.5。更优选地，无定形6’-SL、其盐，或其混合物由其水性溶液制备，所述水性溶液的pH不低于3.6，并且不高于4.4，诸如不高于4.0，例如在3.6-4.0或4.0-4.4之间。当在由此生产的无定形6’-SL、其盐，或其混合物的5w/w％水性溶液中测量时，其pH为约3.9-4.8、3.9-4.5、3.9-4.3、4.3-4.8或4.3-4.5。

关于以上公开的所有方面，在一个实施方式中，唾液酸化寡糖为唾液酸化HMO、其酸加成盐或其混合物。在一个优选的实施方式中，唾液酸化HMO为3’-SL、其酸加成盐或其混合物，优选地钠盐。在另一个优选的实施方式中，唾液酸化HMO为6’-SL、其酸加成盐或其混合物，优选地钠盐。

实施例

根据例如WO 2017/152918通过细菌发酵和分离制备3’-SL Na盐。制备水性储备溶液，其浓度为5.3g/100g，pH：4.8。

系列A：通过添加1M HCl溶液将一部分上述水性储备溶液调节至pH为3.6。将如此得到的溶液冷冻干燥，以得到白色无定形粉末。其5w/w％溶液的pH为3.9。

系列B：通过添加1M NaOH溶液将一部分上述水性储备溶液调节至pH为5.1。将如此得到的溶液冷冻干燥，以得到白色无定形粉末。其5w/w％溶液的pH为5.6。

系列C：通过添加1M NaOH溶液将一部分上述水性储备溶液调节至pH为6.8。将如此得到的溶液冷冻干燥，以得到白色无定形粉末。其5w/w％溶液的pH为6.7。

将每个系列7×1克分别放入4ml玻璃小瓶中，并且用含有聚特氟隆内衬的螺旋盖封闭(共21个样品)。将每个系列的三个样品放入60℃烘箱中，每个系列的另外三个样品放入80℃烘箱中。在下文指示的时间后从烘箱中取出每个系列的一个样品，并且将其保存在冰箱中直至分析。在整个测试时间期间，t＝0样品(每个系列一个样品)保存在冰箱中。

在基于目视检查的调查期间，样品没有显示出相变。

在最长的保温时间结束后，通过HPAEC-PAD在Carbopac PA-200(3×250mm)柱上使用无梯度75mM NaOH+37.5mM NaOAc洗脱液一起分析样品。

下表示出样品中3'-O-唾液酸-乳果糖(3'-SL的酮糖重排衍生物)的含量(以面积％表示，其与量成正比)。

数据示出pH越高，在强制条件下重排副产物的量越多。这表明当在无定形3'-SL的5w/w％溶液中测量时，其pH不应高于约6，以便防止或减少当在环境温度下存储时在固体样品中形成大量3'-O-唾液酸乳果糖。

此外，同一项研究显示，在强制条件下，pH越低，水解副产物(乳糖和唾液酸)的量越多(数据未示出)。就这一点而言，来自系列B的样品含有最少总量的副产物(重排酮糖+水解产物)。这表明当在无定形3'-SL的5w/w％溶液中测量时，其pH不应高于约6，并且不低于约4.2，以便最小化当在环境温度下存储时在无定形样品中形成大总量的重排和水解副产物。

根据例如US 2018/0002363通过细菌发酵和分离制备6’-SL Na盐。制备水性储备溶液，其浓度为9.1g/100g，pH：5.4。

系列A：通过添加1M HCl溶液将一部分上述水性储备溶液调节至pH为3.1。将如此得到的溶液冷冻干燥，以得到白色无定形粉末。其5w/w％溶液的pH为3.5。

系列B：通过添加1M HCl溶液将一部分上述水性储备溶液调节至pH为4.0。将如此得到的溶液冷冻干燥，以得到白色无定形粉末。其5w/w％溶液的pH为4.3。

系列C：通过添加1M HCl溶液将一部分上述水性储备溶液调节至pH为4.8。将如此得到的溶液冷冻干燥，以得到白色无定形粉末。其5w/w％溶液的pH为5.1。

系列D：通过添加1M NaOH溶液将一部分上述水性储备溶液调节至pH为6.8。将如此得到的溶液冷冻干燥，以得到白色无定形粉末。其5w/w％溶液的pH为6.2。

将每个系列的4×1克分别放入4ml玻璃小瓶中，并且用含有聚特氟隆内衬的螺旋盖封闭(共16个样品)。将每个系列的三个样品放入80℃烘箱。分别在1周、2周和4周后从烘箱取出每个系列的一个样品，并且将其保存在冰箱中直至分析。在整个稳定性测试时间期间，t＝0样品保存在冰箱中。

在基于目视检查的调查期间，样品没有显示出相变。

在最长的保温时间结束后，通过HPAEC-PAD在Carbopac PA-200(3×250mm)柱上使用无梯度75mM NaOH+37.5mM NaOAc洗脱液一起分析样品。

图1示出样品中6'-唾液酸-乳果糖(6'-SL的酮糖重排衍生物)的含量和其形成趋势(以面积％表示，其与量成正比)。

数据示出pH越高，在强制条件下重排副产物的量越多。这表明当在无定形6'-SL的5w/w％溶液中测量时，其pH不应高于约5.5，以便防止或减少当在环境温度下存储时在固体样品中形成大量6'-O-唾液酸乳果糖。

此外，同一项研究显示，在强制条件下，pH越低，水解副产物(乳糖和唾液酸)的量越多(数据未示出)。就这一点而言，来自系列B和C的样品含有最少总量的副产物(重排酮糖+水解产物)。这表明当在无定形6'-SL的5w/w％溶液中测量时，其pH不应高于约5.5，并且不低于约3.9，以便最小化当在环境温度下存储时在无定形样品中形成大总量的重排和水解副产物。