一种盐酸利多卡因及其制剂中的降解杂质的HPLC检测方法

摘要

本发明公开了一种盐酸利多卡因及其制剂中的降解杂质的HPLC检测方法，包括步骤使用高效液相色谱仪采用等度洗脱方法对盐酸利多卡因及其制剂中的降解杂质进行分离测定，其中检测波长为230±2nm，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，并以体积百分比50‑60％的浓度为0.01mol/L磷酸盐缓冲液和体积百分比40‑50％的有机相组成的混合溶液为流动相，该有机相用磷酸调节pH值至8.0。本发明具有分离度好、简单快速、专属性强、灵敏度高的特点，能够对盐酸利多卡因及其制剂在生产和贮存中可能引入的降解杂质进行质量控制，保证整个产品的质量和临床用药安全。

说明书

技术领域

本发明涉及医药制备检测技术领域，具体来说，涉及一种盐酸利多卡因及其制剂中的降解杂质的HPLC检测方法。

背景技术

盐酸利多卡因系酰胺类局麻药，血液吸收或静脉给药，对中枢神经系统有明显的兴奋和抑制双相作用。本品在低剂量时，可促进心肌细胞内K+外流，降低心肌的自律性，而具有抗室性心率失常作用；在治疗剂量时，对心肌细胞的电活动、房室传导和心肌的收缩无明显影响；血药浓度进一步升高，可引起心脏传导速度减慢，房室传导阻滞，抑制心肌收缩力和使心排血量下降。盐酸利多卡因化学结构如下图1所示，图2为为盐酸利多卡因的合成路线及降解杂质的产生途径。由图中可以看出，在生产中可能引入的工艺杂质包括起始物料2,6二甲基氯代苯乙酰胺，反应试剂二乙胺、盐酸和中间产物利多卡因。试剂二乙胺为液体，易溶于水和丙酮，后处理过程中极易出去，因此这里不再进行控制。2，6-二甲基苯胺及降解杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺在原料药和制剂生产、贮存中均可能产生。

现行的盐酸利多卡因和盐酸利多卡因注射液中国药典质量标准中规定了特定杂质2，6-二甲基苯胺，但2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺作为降解杂质并未进行控制。盐酸利多卡因及其制剂中杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺的含量水平的高低直接决定了产品的质量及后续临床用药的安全。

因此，根据杂质需从源头控制的理念考虑，有必要建立一种新的用于盐酸利多卡因原料药及其制剂的降解杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺的HPLC(高效液相色谱法(High Performance LiquidChromatography\HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等，高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用)分析方法，使杂质能得到有效控制，保证后续产品的质量。

该方法有利于加强盐酸利多卡因原料药及其制剂产品内控质量，为工艺条件的优化提供必要的理论和实践依据。

发明内容

针对相关技术中的问题，本发明提出一种盐酸利多卡因及其制剂中的降解杂质的HPLC检测方法，以对盐酸利多卡因及其制剂中的降解杂质进行质量控制，保证产品质量和用药安全。

为此，本发明采用的具体技术方案如下：

一种盐酸利多卡因及其制剂中的降解杂质的HPLC检测方法，包括步骤使用高效液相色谱仪采用等度洗脱方法对盐酸利多卡因及其制剂中的降解杂质进行分离测定，其中检测波长为230±2nm，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，并以体积百分比50-60％的浓度为0.01mol/L磷酸盐缓冲液和体积百分比40-50％的有机相组成的混合溶液为流动相，该有机相用磷酸调节pH值至8.0。

优选的，所述流动相的流速为0.9-1.1mL/min。

优选的，所述磷酸盐缓冲液由以下方式配制：将取lmol/L磷酸二氢钠溶液1.3ml与0.5mol/L磷酸氢二钠溶液32.5ml，用水稀释至1000ml并摇匀。

优选的，有机相为乙腈、甲醇中的一种。

优选的，所述有机相为乙腈。

优选的，流动相中缓冲盐溶液体积占比55％，乙腈体积占比45％。

优选的，所述高效液相色谱仪色谱柱的柱温为28-32℃。

优选的，色谱柱的柱温为30℃。

优选的，所述流动相的流速为1mL/min。

本发明的有益效果为：

本发明的建立的一种用于盐酸利多卡因及其制剂中降解杂质的HPLC的检测方法，具有分离度好、简单快速、专属性强、灵敏度高的特点，能够对盐酸利多卡因及其制剂在生产和贮存中可能引入的降解杂质进行质量控制，保证整个产品的质量和临床用药安全。故该法可以作为盐酸利多卡因及其制剂在生产和贮存中可能引入的降解杂质的监测手段。

其中，在洗脱步骤方面，采用等度洗脱方法，根据各物质的分子量大小进行分离。

在流动相中添加缓冲盐，通过在流动相中添加缓冲盐可使被测物增强离子化，提高溶解度，从而有助于分离。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1示出了现有技术中盐酸利多卡因的结构分子式；

图2示出了现有技术中盐酸利多卡因的合成路线及降解杂质的产生途径示意图；

图3示出了本发明实施例一中的检测色谱图；

图4示出了本发明实施例二中的检测色谱图；

图5示出了本发明实施例三中的检测色谱图。

具体实施方式

为进一步说明各实施例，本发明提供有附图，这些附图为本发明揭露内容的一部分，其主要用以说明实施例，并可配合说明书的相关描述来解释实施例的运作原理，配合参考这些内容，本领域普通技术人员应能理解其他可能的实施方式以及本发明的优点，图中的组件并未按比例绘制，而类似的组件符号通常用来表示类似的组件。

盐酸利多卡因及其制剂制备和贮存过程中由于盐酸利多卡因降解会引入杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺和N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺，现行的盐酸利多卡因和盐酸利多卡因注射液中国药典质量标准中规定了特定杂质2，6-二甲基苯胺，但未收载降解杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺和N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺，且该分析方法也无法有效检出上述杂质。2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺在盐酸利多卡因及其制剂制备和贮存过程中产生，若不对其进行检测和控制可能导致不良反应的发生。因此，通过建立HPLC方法对其进行检测和控制，有利于保证产品质量和临床用药安全。本发明建立的一种用于盐酸利多卡因及其制剂中杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺的HPLC的分析方法，该方法具有分离度好、简单快速、专属性强、灵敏度高，能够对杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺进行质量控制，保证产品质量和用药安全。

实施例一：

本实施例中所采用的仪器以及设置条件如下：

高效液相色谱仪：Shimadzu LC-20AT；

色谱柱：Thermo Hypersil GOLD Dim.(mm)C18，250mm×4.6mm，5μm；

流动相的流速：1mL/min；

检测波长：230nm；

色谱柱柱温：30℃；

进样量：20uL；

其中流动相：将磷酸盐缓冲液与乙腈(用磷酸调节pH值至8.0)按照质量份数比55：45配置为流动相，其中浓度为0.01mol/L磷酸盐缓冲液由以下方式配制：取lmol/L磷酸二氢钠溶液1.3ml与0.5mol/L磷酸氢二钠溶液32.5ml，用水稀释至1000ml并摇匀。

实验步骤：

步骤一：溶液配制

系统适应性溶液：取本品和杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺各适量，加溶剂溶解并定量稀释成每lml中分别约含杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺及盐酸利多卡因5μg的溶液。

供试品溶液：取样品适量，加溶剂溶解制成约含盐酸利多卡因5mg/ml的溶液。

对照溶液：精密量取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀即得。

步骤二：测定

精密量取系统适应性溶液、供试品溶液和对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，按上述测定色谱条件测试。典型系统适用性图谱见下图3。

实施例2

本实施例中所采用的仪器以及设置条件如下

高效液相色谱仪：Shimadzu LC-20AT；

色谱柱：Thermo Hypersil GOLD Dim.(mm)C18，250mm×4.6mm，5μm；

流动相的流速：1mL/min；

检测波长：230nm；

色谱柱柱温：30℃；

进样量：20uL；

其中流动相：将磷酸盐缓冲液与乙腈(用磷酸调节pH值至8.0)按照质量份数比57：43配置为流动相，其中浓度为0.01mol/L磷酸盐缓冲液由以下方式配制：取lmol/L磷酸二氢钠溶液1.3ml与0.5mol/L磷酸氢二钠溶液32.5ml，用水稀释至1000ml并摇匀。

实验步骤：

步骤一：溶液配制

系统适应性溶液：取本品和杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺各适量，加溶剂溶解并定量稀释成每lml中分别约含杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺及盐酸利多卡因5μg的溶液。

供试品溶液：取样品适量，加溶剂溶解制成约含盐酸利多卡因5mg/ml的溶液。

对照溶液：精密量取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀即得。

步骤二：测定

精密量取系统适应性溶液、供试品溶液和对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，按上述测定色谱条件测试，典型系统适用性图谱见下图4。

实施例3

本实施例中所采用的的仪器以及设置条件：

高效液相色谱仪：Shimadzu LC-20AT

色谱柱：Thermo Hypersil GOLD Dim.(mm)C18，250mm×4.6mm，5μm；

流动相的流速：1mL/min；

检测波长：230nm；

色谱柱柱温：30℃；

进样量：20uL；

其中流动相：将磷酸盐缓冲液与乙腈(用磷酸调节pH值至8.0)按照质量份数比59：41配置为流动相，其中浓度为0.01mol/L磷酸盐缓冲液由以下方式配制：取lmol/L磷酸二氢钠溶液1.3ml与0.5mol/L磷酸氢二钠溶液32.5ml，用水稀释至1000ml并摇匀。

实验步骤：

步骤一：溶液配制

系统适应性溶液：取本品和杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺各适量，加溶剂溶解并定量稀释成每lml中分别约含杂质2-(二乙基苄基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、N-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基氨基)乙酰胺及盐酸利多卡因5μg的溶液。

供试品溶液：取样品适量，加溶剂溶解制成约含盐酸利多卡因5mg/ml的溶液。

对照溶液：精密量取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀即得。

步骤二：测定

精密量取系统适应性溶液、供试品溶液和对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，按上述测定色谱条件测试，典型系统适用性图谱见下图5。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。