CD30-结合部分、嵌合抗原受体及其用途

摘要

提供了CD30‑结合部分、具有这些CD30‑结合部分的嵌合抗原受体(CAR)及其用途。本文还提供了编码这些CD30‑结合部分和CAR的多核苷酸、包含CD30‑结合部分和CAR的组合物、具有嵌合抗原受体的遗传修饰的免疫细胞，用于在有需要的受试者中在治疗表达CD30的癌症或肿瘤的过继细胞疗法中使用。

说明书

本申请要求于2018年12月26日提交的国际专利申请号PCT/CN2018/123977的优先权，其内容通过引用以其整体并入本文。

技术领域

本披露涉及分子生物学、细胞生物学和癌症生物学领域。特别地，本文提供了CD30-结合部分、包含此类CD30-结合部分的嵌合抗原受体(CAR)(“CD30 CAR”)、表达此类CD30 CAR的基因工程化免疫细胞、和其在治疗表达CD30的肿瘤或癌症中的用途。

背景技术

CD30(通常也称为Ki-1或TNFRSF8)是肿瘤坏死因子受体超家族的成员。人CD30在淋巴组织中的滤泡内和滤泡周围的T细胞和B细胞胚细胞中以低水平瞬时表达，并且在某些造血系统恶性肿瘤(包括间变性大细胞淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤等)中特异性上调。

CD30是例如霍奇金病(HD)和非霍奇金(NHL)淋巴瘤的子集(如间变性大细胞淋巴瘤(ALCL))中的恶性细胞的标记。然而，目前靶向CD30的抗体疗法仅取得了有限的成功。因此，另外的靶向CD30的治疗选择代表了未满足的需求。本文提供的组合物和方法满足了这些需求并且提供了其他的相关优势。

发明内容

本文提供了特异性结合CD30的结合部分，该结合部分包含含有以下的单域抗体：(i)包含选自由SEQ ID NO:87-95组成的组的氨基酸序列的CDR1；(ii)包含选自由SEQ IDNO:100-106组成的组的氨基酸序列的CDR2；和(iii)包含选自由SEQ ID NO:111-120组成的组的氨基酸序列的CDR3；或在CDR1、CDR2和CDR3中的每一个中均包含多达3个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含单域抗体，该单域抗体含有包含SEQ ID NO:87的CDR1；包含SEQ ID NO:100的CDR2；和包含SEQ ID NO:111的CDR3。在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含单域抗体，该单域抗体含有包含SEQ ID NO:87的CDR1；包含SEQ ID NO:100的CDR2；和包含SEQ ID NO:112的CDR3。在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含单域抗体，该单域抗体含有包含SEQ ID NO:88的CDR1；包含SEQ IDNO:101的CDR2；和包含SEQ ID NO:113的CDR3。在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含单域抗体，该单域抗体含有包含SEQ ID NO:89的CDR1；包含SEQ ID NO:102的CDR2；和包含SEQ ID NO:114的CDR3。在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含单域抗体，该单域抗体含有包含SEQ ID NO:90的CDR1；包含SEQ ID NO:103的CDR2；和包含SEQ ID NO:115的CDR3。在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含单域抗体，该单域抗体含有包含SEQ ID NO:91的CDR1；包含SEQ ID NO:104的CDR2；和包含SEQ ID NO:116的CDR3。在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含单域抗体，该单域抗体含有包含SEQ ID NO:92的CDR1；包含SEQ ID NO:105的CDR2；和包含SEQ ID NO:117的CDR3。在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含单域抗体，该单域抗体含有包含SEQ ID NO:93的CDR1；包含SEQ IDNO:106的CDR2；和包含SEQ ID NO:118的CDR3。在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含单域抗体，该单域抗体含有包含SEQ ID NO:94的CDR1；包含SEQ ID NO:103的CDR2；和包含SEQ ID NO:119的CDR3。在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含单域抗体，该单域抗体含有包含SEQ ID NO:95的CDR1；包含SEQ ID NO:103的CDR2；和包含SEQ ID NO:120的CDR3。在一些实施例中，本文提供了这些CD30-结合部分的变体，这些变体在CDR中包含多达约5个氨基酸取代(例如，一、二、三、四或五个氨基酸取代)。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含具有氨基酸序列的单域抗体，该氨基酸序列与选自下组的氨基酸序列具有至少90％、95％或99％同一性，该组由SEQ IDNO:9-54和199组成。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含具有氨基酸序列的单域抗体，该氨基酸序列选自由SEQ ID NO:9-54和199组成的组。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含来自含有具有氨基酸序列的单结构域的结合部分的，含有CDR1、CDR2和CDR3的单域抗体，该氨基酸序列选自由SEQ ID NO:9-54和199组成的组。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分特异性结合人CD30、恒河猴CD30或两者。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分特异性结合CD30的富半胱氨酸结构域6(CRD6)(SEQ ID NO:8)，或CD30的富半胱氨酸结构域1(CRD1)(SEQ ID NO:3)。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含抗体或其抗原结合片段，或受体的细胞外结构域。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含选自下组的抗体或其抗原结合片段，该组由以下组成：单域抗体(sdAb)、重链抗体(HCAb)、Fab、Fab’、F(ab’)

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含骆驼抗体或其抗原结合片段、嵌合抗体或其抗原结合片段、人源化抗体或其抗原结合片段、或人抗体或其抗原结合片段。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含sdAb。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含HCAb，该HCAb包含与人IgG1铰链和Fc区融合的sdAb。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含单价sdAb。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含第一sdAb、接头和第二sdAb(从N-末端到C-末端)。在一些实施例中，该第一和第二sdAb识别CD30上的不同表位。在一些实施例中，该第一和第二sdAb识别CD30上的相同表位。在一些实施例中，该第二sdAb是第一sdAb的串联重复。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中每个第一和第二sdAb均具有选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ IDNO:9-54和199组成。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb，其中该接头具有包含以下或由以下组成的氨基酸序列：SEQ ID NO:55、56、57、202、203或204。

在一些实施例中，本文提供了包含含有以下的抗体或其抗原结合片段的CD30-结合部分：(a)包含以下的重链可变区(VH)：(i)包含SEQ ID NO:96、97或98的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO:107、108或109的VH CDR2；和(iii)包含SEQ ID NO:121、122或123的VH CDR3；和(b)包含以下的轻链可变区(VL)：(i)包含SEQ ID NO:99的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO:110的VL CDR2；和(iii)包含SEQ ID NO:124、125或126的VL CDR3；或在VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3中的每一个中均包含多达3个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含含有以下的抗体或其抗原结合片段：(a)含有包含SEQ ID NO:96的VH CDR1、包含SEQ ID NO:107的VH CDR2、和包含SEQ IDNO:121的VH CDR3的VH；和/或(b)含有包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:124的VL CDR3的VL；或在VH CDR中包含多达5个氨基酸取代和在VL CDR中包含多达5个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含含有以下的抗体或其抗原结合片段：(a)含有包含SEQ ID NO:97的VH CDR1、包含SEQ ID NO:108的VH CDR2、和包含SEQ IDNO:122的VH CDR3的VH；和/或(b)含有包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:125的VL CDR3的VL；或在VH CDR中包含多达5个氨基酸取代和在VL CDR中包含多达5个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含含有以下的抗体或其抗原结合片段：(a)含有包含SEQ ID NO:98的VH CDR1、包含SEQ ID NO:109的VH CDR2、和包含SEQ IDNO:123的VH CDR3的VH；和/或(b)含有包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:126的VL CDR3的VL；或在VH CDR中包含多达5个氨基酸取代和在VL CDR中包含多达5个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含含有以下的抗体或其抗原结合片段：(1)包含与SEQ ID NO:218具有90％、95％、99％或100％同一性的氨基酸序列的VH和/或包含与SEQ ID NO:219具有90％、95％、99％或100％同一性的氨基酸序列的VL；(2)包含与SEQ ID NO:220具有90％、95％、99％或100％同一性的氨基酸序列的VH和/或包含与SEQID NO:221具有90％、95％、99％或100％同一性的氨基酸序列的VL；或(3)包含与SEQ IDNO:222具有90％、95％、99％或100％同一性的氨基酸序列的VH和/或包含与SEQ ID NO:223具有90％、95％、99％或100％同一性的氨基酸序列的VL。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分的VH和VL通过接头连接。在一些实施例中，该接头具有包含以下或由以下组成的氨基酸序列：SEQ ID NO:55、56、57、202、203或204。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含含有氨基酸序列的单链可变片段(scFv)，该氨基酸序列与SEQ ID NO:58、59或60具有至少90％、95％、99％同一性。在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含含有氨基酸序列的单链可变片段(scFv)，该氨基酸序列包含SEQ ID NO:58、59或60。

在一些实施例中，本文提供了来自包含具有氨基酸序列的单链可变片段(scFv)的结合部分的，包含VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的CD30-结合部分，该氨基酸序列包含SEQ ID:58、59或60。在一些实施例中，本文提供了来自包含具有氨基酸序列的单链可变片段(scFv)的结合部分的，包含VH和VL的CD30-结合部分，该氨基酸序列包含SEQ ID:58、59或60。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分特异性结合人CD30、恒河猴CD30或两者。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含抗体或其抗原结合片段，或受体的细胞外结构域。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含选自下组的抗体或其抗原结合片段，该组由以下组成：单域抗体(sdAb)、重链抗体(HCAb)、Fab、Fab’、F(ab’)

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含骆驼抗体或其抗原结合片段、嵌合抗体或其抗原结合片段、人源化抗体或其抗原结合片段、或人抗体或其抗原结合片段。

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分包含sdAb、HCAb、Fab、Fab’、F(ab’)

在一些实施例中，本文提供的CD30-结合部分对CD30具有在10.0pM与500.0nM之间、100.0pM与200.0nM之间、或1.0nM与200.0nM之间的结合亲和力(K

本文还提供了编码本文披露的CD30-结合部分的多核苷酸。本文还提供了包含本文披露的多核苷酸的载体。在一些实施例中，该载体是病毒载体。

本文还提供了包含以下的CD30 CAR(从N-末端到C-末端)：(a)本文披露的CD30-结合部分；(b)跨膜结构域；和(c)胞内结构域。在一些实施例中，该CD30-结合部分是本文所述的结合CD30的scFv或结合CD30的sdAb。

本文还提供了包含以下的特异性结合CD30的CAR(“CD30 CAR”)(从N-末端到C-末端)：(a)含有第一抗CD30 sdAb和第二抗CD30 sdAb的二价CD30-结合部分；(b)跨膜结构域；和(c)胞内结构域。第一抗CD30 sdAb和第二抗CD30 sdAb可以相同或不同，可以通过接头连接。如果两个sdAb不同，则其可以结合相同或不同的表位。

在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR的跨膜结构域包含CD8α跨膜区(具有例如，SEQ ID NO:63的氨基酸序列)或CD28跨膜区。

在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR的胞内结构域包含选自下组的至少一个信号传导结构域，该组由以下组成：CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、和CD66d。

在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR的胞内结构域包含选自下组的至少一个共刺激结构域，该组由以下组成：CD28、4-1BB(CD137)、CD27、OX40、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、TNFRSF9、TNFRSF4、TNFRSF8、CD40LG、ITGB2、KLRC2、TNFRSF18、TNFRSF14、HAVCR1、LGALS9、CD83、和特异性地与CD83结合的配体。

在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR的胞内结构域包含CD3ζ信号传导结构域(具有例如，SEQ ID NO:65的氨基酸序列)和4-1BB共刺激结构域(具有例如，SEQ ID NO:64的氨基酸序列)。在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR的胞内结构域包含CD3ζ信号传导结构域和CD28共刺激结构域(具有例如，SEQ ID NO:129的氨基酸序列)。

在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR进一步包含在CD30-结合部分与CD8α跨膜结构域(具有例如，SEQ ID NO:63的氨基酸序列)之间的CD8α铰链(具有例如，SEQ ID NO:62的氨基酸序列)。

在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR进一步包含在CD30-结合部分与CD28跨膜结构域(具有例如，SEQ ID NO:128的氨基酸序列)之间的CD28铰链(具有例如，SEQ ID NO:127的氨基酸序列)。

在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR进一步包含在N-末端的前导序列(具有例如，SEQ ID NO:61的氨基酸序列)。

在一些实施例中，本文提供了CD30 CAR，其具有选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：SEQ ID NO:70-86、182-194、201和208-211。

在一些实施例中，将本文提供的CD30 CAR缀合至选自下组的因子，该组由以下组成：(i)C-C趋化因子受体4型(CCR4)、(ii)显性负性转化生长因子β受体II(dominantnegative transforming growth factor beta receptor II，dnTGFβRII)、和(iii)开关型嵌合程序性死亡1受体(chimeric switch programmed death 1receptor，PD1CD28)。在一些实施例中，CCR4包含SEQ ID NO:67。在一些实施例中，dnTGFβRII包含SEQ ID NO:68。在一些实施例中，PD1CD28包含SEQ ID NO:69。

在一些实施例中，将本文提供的CD30 CAR缀合至因子的C-末端。

在一些实施例中，将本文提供的CD30 CAR缀合至因子的N-末端。

在一些实施例中，将本文提供的CD30 CAR经由选自下组的2A接头来缀合至该因子，该组由以下组成：P2A、T2A、E2A和F2A。

在一些实施例中，将本文提供的CD30 CAR缀合至各自选自下组的第一因子和第二因子，该组由以下组成：CCR4、PD1CD28和dnTGFβRII。在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：SEQ ID NO:195-198、205-207和212-215。

在一些实施例中，将本文提供的CD30 CAR缀合至dnTGFβRII。在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：SEQ ID NO:195、196、205-207和212-215。

在一些实施例中，将本文提供的CD30 CAR缀合至该第一因子的C-末端和该第二因子的N-末端。

本文还提供了编码本文提供的CD30 CAR的多核苷酸。本文还提供了包含本文提供的多核苷酸的载体。在一些实施例中，该载体是病毒载体。本文还提供了包含本文披露的多核苷酸或本文披露的载体的宿主细胞。

本文还提供了重组表达本文提供的CD30 CAR的细胞。在一些实施例中，该细胞是T细胞。在一些实施例中，该T细胞选自由以下组成的组：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T细胞、和γδT细胞。

在一些实施例中，本文提供了包含本文披露的细胞中的至少两种的细胞的群。

在一些实施例中，本文提供了包含治疗有效量的本文披露的细胞群和药学上可接受的载剂的药物组合物。

本文提供了在有需要的受试者中治疗表达CD30的肿瘤或癌症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的本文披露的药物组合物。在一些实施例中，该表达CD30的肿瘤是淋巴瘤、胚胎癌(EC)或睾丸生殖细胞瘤(TGCT)。

在一些实施例中，本文提供了在有需要的受试者中治疗淋巴瘤的方法，这些方法包括向受试者施用治疗有效量的本文披露的药物组合物。在一些实施例中，该淋巴瘤是B细胞淋巴瘤。在一些实施例中，该B细胞淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤、纵隔灰区淋巴瘤(mediastinalgray zone lymphoma)或结节硬化型HL。在一些实施例中，该淋巴瘤是T细胞淋巴瘤。在一些实施例中，该T细胞淋巴瘤是间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、外周T细胞淋巴瘤非特指型(peripheral T cell lymphoma not otherwise specified)(PTCL-NOS)或血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)。

在一些实施例中，该宿主细胞群对该受试者来说是自体的。

在一些实施例中，本文提供的方法进一步包括从受试者获得T细胞。

在一些实施例中，本文提供的方法进一步包括向受试者施用另外的疗法。

在一些实施例中，该受试者是人。

附图说明

图1.经免疫的骆驼对重组人CD30(图1A)和重组恒河猴CD30蛋白(图1B)的免疫应答。

图2.通过ELISA测定选择的sdAb与CD30片段的结合。

图3.通过LDH方法测定选择的CAR构建体的体外细胞毒性。将5F11用作阳性对照。

图4.AS48542bbz、AS48542-28z和阳性对照5F11bbz的体内功效。图4A描绘了CAR T细胞对HH肿瘤的肿瘤生长抑制。图4B描绘了通过阴性对照和CAR T细胞治疗后的小鼠体重。

图5.通过LDH方法测定双互补位和串联重复CAR构建体对CD30高表达MJ细胞系(A)和CD30低表达H9细胞系(B)的体外细胞毒性。

图6.通过LDH方法测定人源化CAR构建体对CD30高表达MJ细胞系(E:T＝1:1)和CD30低表达H9细胞系(E:T＝2:1)的体外细胞毒性。将5F11bbz用作阳性对照。

图7.通过LDH方法的人源化串联重复和双互补位CAR T细胞对CD30高表达MJ细胞系(E:T＝1:1)和CD30低表达H9细胞系(E:T＝2:1)的体外细胞毒性。将5F11bbz用作阳性对照。

图8.通过FACS方法的人源化串联重复和双互补位CAR T细胞对CD30高表达MJ细胞系(E:T＝0.2:1)和CD30低表达H9细胞系(E:T＝0.2:1)的体外细胞毒性。将5F11bbz用作阳性对照。

图9.AS48542VH5bbz、AS48542VH5dil-bbz、AS47863VH4dil-bbz、AS53574VH7-AS47863VH4bbz和阳性对照5F11bbz CAR T细胞的体内功效。图9A描绘了CAR T细胞对HH肿瘤的肿瘤生长抑制。图9B描绘了通过阴性对照和CAR T细胞治疗后的小鼠体重。

图10.通过FACS方法的装甲的CAR T细胞对CD30高表达MJ细胞系(E:T＝0.1:1)的体外细胞毒性。

图11.细胞膜中嵌合抗原受体的图示。裸CD30 CAR包括CD30结合部分(或CD30-结合结构域或靶标结合结构域)、跨膜结构域和胞内结构域(包括CD28或4-1BB的信号传导结构域和CD3ζ的信号传导结构域(左上))。CD30 CAR可以与C-C趋化因子受体4型(CCR4)(右上)、显性负性转化生长因子β受体II(dnTGFβRII)(右下)和开关型嵌合程序性死亡1受体(PD1CD28)(左下)共表达。

图12.细胞膜中嵌合抗原受体蛋白的图示。CD30 CAR可以与CCR4和dnTGFβRII共表达。

图13.与装甲和非装甲，单结合物和串联重复的，-bbz和-28z CAR T细胞共孵育6轮后L540细胞裂解。将5F11bbz CAR T用作阳性对照。

图14.在E:T比为1:3时共孵育L540细胞6轮后T细胞增殖。将5F11bbz CAR T用作阳性对照。

图15.装甲和非装甲的AS48542VH5bbz和AS47863VH4dil-bbz CAR T细胞的体内功效。图15A描绘了CAR T细胞对HH肿瘤的肿瘤生长抑制。图15B描绘了通过阴性对照和CAR T细胞治疗后的小鼠体重。

具体实施方式

本披露提供了特异性结合CD30的新的结合部分(包括抗体)。此外，本披露还提供了包含特异性结合CD30的此类结合部分的嵌合抗原受体(CAR)，以及重组表达特异性结合CD30的CAR的工程化T细胞和T细胞群(CAR T细胞)。本文还披露了包含治疗有效量的此类CAR T细胞的药物组合物，以及通过施用治疗有效量的此类药物组合物来治疗表达CD30的肿瘤或癌症的方法。

1.定义

除非本文另外定义，否则，本发明中使用的技术和科学术语具有本领域普通技术人员所通常理解的含义。

如本文所用的冠词“一个/种(a/an)”是指一个或多于一个(即，至少一个)的该冠词的语法宾语。通过举例，“抗体”意指一种抗体或多于一种的抗体。

如本文所用的，术语“结合部分”是指结合靶分子(例如，CD30)的分子或分子的一部分。结合部分可以包含蛋白质、肽、核酸、碳水化合物、脂质或小分子量化合物。在一些实施例中，该结合部分包含抗体。在一些实施例中，结合部分包含抗体的抗原结合片段。在一些实施例中，结合部分包含小分子量组分。结合部分也可以是抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，结合部分包含受体的配体结合结构域。在一些实施例中，结合部分包含跨膜受体的细胞外结构域。结合部分也可以是受体的配体结合结构域或跨膜受体的细胞外结构域。结合部分可以是单价的，这意味着其包含与靶分子特异性相互作用的一个结合位点。结合部分也可以是二价的，这意味着其包含与靶分子特异性相互作用的两个结合位点。结合部分也可以是多价的，这意味着其包含与靶分子特异性相互作用的多个结合位点。二价结合部分或多价结合部分可以与单个靶分子上的一个或多个表位相互作用，在这种情况下，其也被称为“双互补位抗体(biparatopic antibody)”或“多互补位抗体(multiparatopicantibody)”。二价结合部分或多价结合部分也可以与两个或更多个靶分子相互作用，在这种情况下，其也被称为“双特异性抗体”或“多特异性抗体”。

如本文所用的，术语“结合亲和力”通常是指结合部分与靶分子之间的非共价相互作用的强度。结合部分和靶分子之间的相互作用是可逆的过程，并且结合亲和力是解离速率(k

如本文所用的，术语“特异性结合”意指与可替代的物质(包括相关和不相关的蛋白质)相比，多肽或分子与表位、蛋白质或靶分子的相互作用更频繁、更迅速、持续时间更长、亲和力更高、或具有以上特点的组合。可以例如通过免疫测定、ELISA、SPR(例如Biacore)或本领域技术人员已知的其他技术来鉴定特异性结合靶分子(例如抗原)的结合部分(例如抗体)。典型地，特异性反应将至少为背景信号或噪音的两倍并且可以是背景的10倍以上。关于抗体特异性的讨论参见，例如，Paul,ed.,1989,

如本文所用的，术语“抗体”是指通过至少一个抗原识别位点识别并特异性地结合靶标如蛋白质、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质、或前述中任何的组合的免疫球蛋白分子，其中抗原结合位点通常位于免疫球蛋白分子的可变区内。如本文所用的，该术语涵盖完整多克隆抗体、完整单克隆抗体、单域抗体(sdAb；例如，骆驼科抗体，羊驼抗体)、单链Fv(scFv)抗体、重链抗体(HCAb)、轻链抗体(LCAb)、多特异性抗体、双特异性抗体、单特异性抗体、单价抗体、包含抗体的抗原结合位点的融合蛋白、以及包含抗原结合位点的任何其他经修饰的免疫球蛋白分子(例如，双可变结构域免疫球蛋白分子)(只要抗体表现出需要的生物学活性)。抗体还包括但不限于小鼠抗体、骆驼抗体、嵌合抗体、人源化抗体和人抗体。抗体可以是免疫球蛋白的五种主要类别中的任何一种：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，或其亚类(同种型)(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)，基于其重链恒定结构域的同一性分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白具有不同并且熟知的亚基结构和三维构型。抗体可以是裸的或与其他分子(包括但不限于毒素和放射性同位素)缀合。除非另外明确指出，否则如本文所用的，术语“抗体”包括完整抗体的“抗原结合片段”。

如与抗体结合使用的术语“抗原结合片段”是指完整抗体的一部分并且是指完整抗体的抗原决定可变区。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab’)

如本文所用的，术语抗体的“可变区”是指抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区，单独或进行组合。在仅天然存在的重链抗体中，术语“可变区”是指重链可变区，也称为V

如本文所用的，术语“单域抗体”或“sdAb”是指由具有三个CDR的单个可变区组成的抗体，其可以单独地与不与相应的含有CDR的多肽配对的抗原结合。单域抗体包括仅来自或源自骆驼科重链抗体的V

如本文所用的，术语“骆驼科抗体”旨在包括具有可变区的抗体，其中框架区及CDR区均源自骆驼科种系重链抗体序列。此外，如果抗体含有恒定区，则该恒定区也源自骆驼科种系重链抗体序列。本发明的骆驼科抗体可以包括不由骆驼科种系重链抗体序列所编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机诱变或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用的，术语“骆驼科抗体”不旨在包括这样的抗体，其中，源自另一种哺乳动物物种的种系的CDR序列已移植到骆驼科框架序列上。

术语“单链可变片段”或“scFv”是指免疫球蛋白的重链可变区和轻链可变区(其与十至二十五个氨基酸的短接头肽连接)的融合蛋白。接头通常富含甘氨酸以提高柔韧性，以及富含丝氨酸或苏氨酸以提高溶解度。scFv保持原始免疫球蛋白的特异性。scFv可以通过不同长度的接头来连接，以形成双-scFv、双抗体、三-scFv、三抗体或四抗体，其可以显示对一种或多种抗原的特异性。

术语“嵌合抗体”是指通过将来自非人来源的遗传物质与来自人类的遗传物质组合来制备的抗体。或者更一般地，嵌合抗体是具有来自某种物种的遗传物质与来自另一种物种的遗传物质的抗体。

如本文所用的，术语“人源化抗体”是指来自非人物种的抗体，其中该非人物种的蛋白质序列已被修饰以增加其与人天然产生的抗体变体的相似性。

如本文所用的，术语“人抗体”是指通过人产生的抗体或具有与通过使用本领域已知的任何技术的人工产生的抗体相对应的氨基酸序列的抗体。

术语“表位”和“抗原决定簇”在本文中可互换使用，是指与结合部分结合的靶分子表面上的位点，如抗原表面的局部区域。靶分子可以包含蛋白质、肽、核酸、碳水化合物或脂质。具有免疫原性活性的表位是引发动物中免疫应答的靶分子的一部分。如通过本领域众所周知的任何方法(包括例如通过免疫测定法)所确定的，具有抗原活性的靶分子的表位是与抗体结合的靶分子的一部分。抗原表位不必一定是免疫原性的。表位通常由分子的化学活性表面基团(如氨基酸或糖侧链)组成，并且具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。术语“表位”包括线性表位和构象表位。构成表位的靶分子(例如多肽)的区域可以是多肽的连续氨基酸，或者表位可以一起来自靶分子的两个或更多个非连续区域。表位可以是或可以不是靶分子的三维表面特征。由连续氨基酸形成的表位(也称为线性表位)典型地在蛋白质变性时保留，而由三级折叠形成的表位(也称为构象表位)典型地在蛋白质变性时丢失。表位典型地包括至少3个，以及更通常地至少5、6、7或8-10个呈独特的空间构象的氨基酸。

如本文所用的，术语“接头”或“接头区”是指连接两个分子或同一分子上的两个序列的分子序列。在一些实施例中，接头是肽接头。优选地，接头不会不利地影响多肽的表达、分泌或生物活性。此外，接头优选地不是抗原性的并且不引发免疫应答。在一些实施例中，接头可以是内源氨基酸序列、外源氨基酸序列(例如，富含GS的序列)或非肽化学接头。

如在本文中可互换使用的，术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”是指任何长度的氨基酸聚合物，其可以是线性的或分支的。它可以包括非天然的或经修饰的氨基酸，或者被非氨基酸中断。多肽、肽或蛋白质还可以用例如二硫键的形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰来修饰。

如在本文中可互换使用的，术语“多核苷酸”和“核酸”是指任何长度的核苷酸的聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基和/或其类似物、或可以通过DNA或RNA聚合酶掺入聚合物的任何底物。

“分离”的多肽、肽、蛋白质、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是呈在自然界中不存在的形式的多肽、肽、蛋白质、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物。分离的多肽、肽、蛋白质、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物包括已经纯化至其不再呈在自然界中存在的形式的程度的那些。在一些实施例中，分离的多肽、肽、蛋白质、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是基本上纯的。

如本文在两个或更多个核酸或多肽的上下文中所使用的，术语“相同”或百分比“同一性”是指当为了获得最大对应性而进行比较和比对时(如果需要，则引入缺口)，两个或更多个相同的或具有指定百分比的相同核苷酸或氨基酸残基的序列或亚序列(不将任何保守的氨基酸取代视为序列同一性的一部分)。百分比同一性可以使用序列比较软件或算法或通过目测检查来测量。可以用于获得氨基酸或核苷酸序列的比对的各种算法和软件在本领域中是熟知的。这些包括但不限于BLAST、ALIGN、Megalign、BestFit、GCG威斯康辛数据包(GCG Wisconsin Package)和其变形。在一些实施例中，本发明的两个核酸或多肽是基本上相同的，意指当为了获得最大对应性而进行比较和比对时，如使用序列比较算法或通过目视检查测量的，它们具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％，并且在一些实施例中，至少95％、96％、97％、98％、99％的核苷酸或氨基酸残基同一性。在一些实施例中，同一性存在于氨基酸序列的区域上，这些氨基酸序列的长度是至少约10个残基、至少约20个残基、至少约40-60个残基、至少约60-80个残基或两者之间的任何整数值。在一些实施例中，同一性存在于比60-80个残基，如至少约80-100个残基更长的区域上，并且在一些实施例中，这些序列在比较序列(如靶蛋白或抗体的编码区)的全长上基本相同。在一些实施例中，同一性存在于核苷酸序列的区域上，这些氨基酸序列的长度是至少约10个碱基、至少约20个碱基、至少约40-60个碱基、至少约60-80个碱基或两者之间的任何整数值。在一些实施例中，同一性存在于比60-80个碱基，如至少约80-1000个或更多个碱基更长的区域上，并且在一些实施例中，这些序列在比较序列(如编码目的蛋白的核苷酸序列)的全长上基本相同。

如本文所用的，术语“氨基酸取代”是指多肽序列中一个氨基酸残基被另一个氨基酸残基替代。“保守氨基酸取代”是其中一个氨基酸残基被具有相似化学特性的侧链的另一个氨基酸残基取代。具有相似侧链的氨基酸残基的家族通常已在本领域中定义，包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。例如，用酪氨酸取代苯丙氨酸是保守取代。通常，本披露的多肽、可溶性蛋白质和/或抗体的序列中的保守取代不会消除含有氨基酸序列的多肽、可溶性蛋白质或抗体与靶结合位点的结合。鉴定不消除结合的氨基酸保守取代的方法是本领域熟知的。

如本文所用的，关于具有拥有特定序列特征的多肽的结合部分(例如抗体)(“参考结合部分”)的术语“变体”是指与参考结合部分相比，具有包含一个或多个(如，例如，约1至约25、约1至约20、约1至约15、约1至约10或约1至约5个)氨基酸序列取代、缺失和/或添加的多肽的不同结合部分。抗CD30-结合部分变体或抗CD30抗体变体至少保留与CD30的特异性结合。在一些实施例中，结合部分变体可以产生自对参考结合部分的氨基酸序列进行的一个或多个(例如，约1至约25、约1至约20、约1至约15、约1至约10或约1至约5个)改变。也通过示例的方式，抗CD30抗体的变体可以产生自对参考抗CD30抗体的氨基酸序列进行的一个或多个(例如，约1至约25、约1至约20、约1至约15、约1至约10或约1至约5个)改变。对氨基酸序列的改变可以是氨基酸取代。在一些实施例中，对氨基酸序列的改变可以是保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30-结合部分变体或抗CD30抗体变体可以由在VH或VL区或子区(如一个或多个CDR)中进行的一个或多个(例如，像约1至约25、约1至约20、约1至约15、约1至约10个或约1至约5个)氨基酸取代产生。在一些实施例中，抗CD30-结合部分变体或抗CD30抗体变体可以由在每个VH或VL区中进行的一个、多达两个、多达三个、多达四个或多达五个氨基酸取代产生。在一些实施例中，抗CD30-结合部分变体或抗CD30抗体变体可以由在每个CDR区中进行的一个、多达两个、多达三个、多达四个或多达五个氨基酸取代产生。

术语“载体”是指用于携带或包括核酸序列的物质，包括例如为了将核酸序列引入宿主细胞中的物质。适用的载体包括，例如表达载体、质粒、噬菌体载体、病毒载体、附加体和人工染色体，其可以包括选择序列或可稳定整合入宿主细胞染色体的标记。此外，载体可以包括一种或多种可选择的标记基因和适当的表达控制序列。可以被包括的可选择的标记基因，例如，提供对抗生素或毒素的抗性，补充营养缺陷或供应培养基中没有的关键营养素。表达控制序列可以包括本领域熟知的组成型和诱导型启动子、转录增强子、转录终止子等。当两个或更多个核酸分子待共表达时(例如抗体重链和轻链或抗体VH和VL)，可以将两个核酸分子插入，例如，单个表达载体或单独的表达载体中。对于单个载体表达，可以将编码核酸可操作地连接至一个共同的表达控制序列或连接至不同的表达控制序列，如一个诱导型启动子和一个组成型启动子。可以使用本领域熟知的方法来确认将核酸分子引入宿主细胞。本领域技术人员应理解，核酸分子以足以产生所需产物(例如，如本文所述的抗CD30CAR)的量表达，并且应进一步理解，可以使用本领域熟知的方法来优化表达水平以获得充分表达。

如本文所用的，术语“嵌合抗原受体”或“CAR”是指含有结合部分的人工构建的杂合蛋白质或多肽(例如抗体)，该结合部分与免疫细胞(例如T细胞)信号传导或激活结构域连接。在一些实施例中，CAR是将T细胞重新靶向至肿瘤表面抗原的合成受体(Sadelain等人,Nat.Rev.Cancer 3(l):35-45(2003)；Sadelain等人,Cancer Discovery3(4):388-398(2013))。CAR可以向免疫细胞(如T细胞)提供抗原结合和免疫细胞激活功能。CAR具有以非MHC限制的方式将T细胞特异性和反应性重定向至选择的靶标的能力(利用单克隆抗体的抗原结合特性)。非MHC限制的抗原识别可以给予表达CAR的T细胞识别抗原的能力(不依赖于抗原加工)，因此绕过了肿瘤逃逸的机制。

术语“受试者”是指将成为特定治疗的接受者的任何动物(例如，哺乳动物)，包括但不限于人、非人灵长类、犬科动物、猫科动物、啮齿动物等。在一些实施例中，受试者是人。“受试者”可以是患有特定疾病的患者。在一些实施例中，受试者是患有表达CD-30的癌症或肿瘤的患者。

如本文所用的，与疾病或病症或患有疾病或病症的受试者有关的术语“治疗”是指抑制、消除、减轻和/或改善症状，减轻症状的严重程度、和/或降低与所治疗的疾病或障碍相关的症状的频率的作用。当对于癌症或肿瘤使用时，术语“治疗”是指减轻癌症或肿瘤的严重程度，或延缓或减慢癌症或肿瘤的进展的作用，包括(a)抑制生长，或阻止癌症或肿瘤的发展，或(b)导致癌症或肿瘤的消退，或(c)延迟、改善或最小化与癌症或肿瘤的存在有关的一种或多种症状。

如本文所用的，术语“施用”(“administer”、“administering”、或“administration”)是指通过本文所述的或本领域中以其他方式已知的方法来将治疗剂或药物组合物递送或使其递送至受试者的身体的行为。该治疗剂可以是化合物、多肽、细胞、或细胞群。施用治疗剂或药物组合物包括规定待递送到患者体内的治疗剂或药物组合物。施用的示例性形式包括口服剂型，如片剂、胶囊、糖浆、悬浮液；可注射剂型，如静脉内(IV)、肌内(IM)或腹膜内(IP)；经皮剂型，包括乳膏、凝胶剂、粉剂或贴剂；经颊剂型(buccaldosage form)；吸入粉剂、喷雾剂、悬浮液和直肠栓剂。

如本文所用的，术语“治疗有效量”是指如本文所述的化合物、多肽、细胞、配制品、材料或组合物足以在疾病或障碍的治疗中提供治疗益处或延迟或最小化与疾病或障碍有关的一种或多种症状的量。该疾病或障碍可以是表达CD-30的癌症或肿瘤。

如本文所用的，术语“载剂”包括在所采用的剂量和浓度下对暴露于其的细胞或哺乳动物无毒的“药学上可接受的载剂”、赋形剂或稳定剂。生理学上可接受的载剂通常是pH缓冲水溶液。生理学可接受的载剂的实例包括缓冲液，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(例如，少于约10个氨基酸残基)的多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸、或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合剂，如EDTA；糖醇，如甘露醇或山梨醇；成盐平衡离子，如钠；和/或非离子表面活性剂，如TWEEN

如本文所用的，术语“自体的”是指源自同一个体的任何材料，其中该材料随后被重新引入该个体。

如本文所用的，术语“同种异体的”是指源自相同物种的不同动物的移植物。

2.CD30-结合部分

CD30(通常也称为Ki-1或TNFRSF8)是肿瘤坏死因子受体超家族的成员。人CD30在淋巴组织中的滤泡内和滤泡周围的T和B细胞胚细胞中低水平瞬时表达，但在某些造血系统恶性肿瘤(包括间变性大细胞淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤等)中特异性上调。

人CD30蛋白质具有595个氨基酸。全长人CD30的代表性氨基酸序列可在GenBank号：AAA51947.1或CAC16652.1中找到。CD30作为120kDa的膜糖蛋白链存在，其中胞外结构域(ECD)含有CD30配体的结合位点，并且胞内结构域在信号转导中起关键作用。本文提供的人CD30和恒河猴CD30的细胞外结构域(ECD)的代表性氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQID NO:2。可以将人CD30 ECD进一步分为每个约40个氨基酸的六个富半胱氨酸结构域(CRD)，这些结构域分别为：CRD1(F19-Q68，SEQ ID NO:3)、CRD2(R66-E107，SEQ ID NO:4)、CRD3(E107-S153，SEQ ID NO:5)、CRD4(E150-Q243，SEQ ID NO:6)、CRD5(R241-E282，SEQ IDNO:7)和CRD6(E282-K379，SEQ ID NO:8)。

本披露提供了特异性结合CD30的结合部分。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的片段。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的ECD。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的CRD1。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的CRD2。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的CRD3。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的CRD4。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的CRD5。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的CRD6。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的CRD1、CRD2、CRD3、CRD4、CRD5、和CRD6结构域中的至少两个。在一些实施例中，CD30-结合部分至少特异性结合CD30的CRD1和CRD6结构域。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的CRD1、CRD2、CRD3、CRD4、CRD5、和CRD6结构域中的至少三个。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的CRD1、CRD2、CRD3、CRD4、CRD5、和CRD6结构域中的至少四个。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的CRD1、CRD2、CRD3、CRD4、CRD5、和CRD6结构域中的至少五个。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30的CRD1、CRD2、CRD3、CRD4、CRD5、和CRD6结构域中的所有六个。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30上的表位。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30上的线性表位。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合CD30上的构象表位。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合人CD30。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合恒河猴CD30。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合人CD30和恒河猴CD30。

在一些实施例中，CD30-结合部分在人CD30的氨基酸19-68内特异性结合。在一些实施例中，CD30-结合部分在人CD30的氨基酸66-107内特异性结合。在一些实施例中，CD30-结合部分在人CD30的氨基酸107-153内特异性结合。在一些实施例中，CD30-结合部分在人CD30的氨基酸150-243内特异性结合。在一些实施例中，CD30-结合部分在人CD30的氨基酸241-282内特异性结合。在一些实施例中，CD30-结合部分在人CD30的氨基酸282-379内特异性结合。

在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合包含在SEQ ID NO:3内的氨基酸的表位。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合包含在SEQ ID NO:4内的氨基酸的表位。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合包含在SEQ ID NO:5内的氨基酸的表位。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合包含在SEQ ID NO:6内的氨基酸的表位。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合包含在SEQ ID NO:7内的氨基酸的表位。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合包含在SEQ ID NO:8内的氨基酸的表位。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合在SEQ ID NO:3内的至少一个氨基酸。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合在SEQ ID NO:4内的至少一个氨基酸。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合在SEQ ID NO:5内的至少一个氨基酸。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合在SEQ ID NO:6内的至少一个氨基酸。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合在SEQID NO:7内的至少一个氨基酸。在一些实施例中，CD30-结合部分特异性结合在SEQ ID NO:8内的至少一个氨基酸。

在一些实施例中，结合部分包含受体的配体结合结构域。在一些实施例中，结合部分是受体的配体结合结构域。在一些实施例中，结合部分包含跨膜受体的ECD。在一些实施例中，结合部分是跨膜受体的ECD。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体(包括其抗原结合片段)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体的抗原结合片段。在一些实施例中，CD30-结合部分是抗体。在一些实施例中，抗体是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗体。在一些实施例中，抗体是IgG1抗体。在一些实施例中，抗体是IgG2抗体。在一些实施例中，抗体是IgG3抗体。在一些实施例中，抗体是IgG4抗体。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含单域抗体(sdAb)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含重链抗体(HCAb)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含Fab。在一些实施例中，抗体是Fab’。在一些实施例中，CD30-结合部分包含F(ab’)

在一些实施例中，CD30-结合部分包含sdAb。示例性sdAb包括但不限于天然存在的sdAb、源自常规四链抗体的重组sdAb、除源自抗体的那些之外的工程化单结构域支架。sdAb可以源自任何物种，这些物种包括但不限于小鼠、人、骆驼、美洲驼、鱼、鲨鱼、山羊、兔子和牛。在一些实施例中，结合部分包含HCAb。在一些实施例中，HCAb包含与Fc区融合的sdAb。在一些实施例中，HCAb包含与人IgG1铰链和Fc区融合的sdAb。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含重组抗体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含单克隆抗体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含多克隆抗体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含骆驼科(例如骆驼、单峰骆驼和美洲驼)抗体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含骆驼抗体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含嵌合抗体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含人源化抗体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含人抗体。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含双特异性结合部分或多特异性结合部分。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含单价结合部分。在一些实施例中，CD30-结合部分(例如抗体)包含单特异性结合部分。在一些实施例中，CD30-结合部分(例如抗体)包含二价结合部分。在一些实施例中，该二价结合部分包含两个抗体。在一些实施例中，该二价结合部分包含第一抗体和第二抗体。在一些实施例中，第一抗体和第二抗体通过接头连接。在一些实施例中，CD30-结合部分(例如抗体)包含第一抗体、接头和第二抗体(从N-末端到C-末端)。在一些实施例中，该第二抗体是第一抗体的串联重复。在一些实施例中，该第一抗体和第二抗体识别CD30上的不同表位。在一些实施例中，该第一抗体和第二抗体识别CD30上的相同表位。

该抗体选自由以下组成的组：单域抗体(sdAb)、重链抗体(HCAb)、Fab、Fab’、F(ab’)

在一些实施例中，二价CD30-结合部分包含第一sdAb和第二sdAb。在一些实施例中，该第一sdAb和第二sdAb通过接头连接。在一些实施例中，二价CD30-结合部分包含第一sdAb、接头和第二sdAb(从N-末端到C-末端)。在一些实施例中，该第二sdAb是第一sdAb的串联重复。在一些实施例中，该第一sdAb和第二sdAb识别CD30上的不同表位。在一些实施例中，该第一sdAb和第二sdAb识别CD30上的相同表位。

在一些实施例中，抗体是分离的。在一些实施例中，抗体是基本上纯的。

在一些实施例中，CD30-结合部分是单克隆抗体。单克隆抗体可以通过本领域技术人员已知的任何方法来制备。一种示例性的方法是筛选蛋白质表达文库，例如，噬菌体或核糖体展示文库。噬菌体展示描述于，例如Ladner等人,美国专利号5,223,409；Smith(1985)Science 228:1315-1317；和WO 92/18619中。在一些实施例中，重组单克隆抗体是从表达所需物种的可变结构域或CDR的噬菌体展示文库中分离的。噬菌体文库的筛选可以通过本领域已知的多种技术来完成。

除正常的重链和轻链抗体外，骆驼科(例如骆驼、单峰骆驼和美洲驼)还产生包含单个单体重链的单域抗体(sdAb)。在一些实施例中，本文披露的结合部分包含源自骆驼科的sdAb。这些由独特的一组VH区段(称为VHH基因)编码。用于实现与源自骆驼科的sdAb高亲和力结合的方法是本领域已知的，并且与常规抗体的方法相似。此种方法的非限制性实例是对可变区的超突变和对表达此类高亲和力抗体(亲和力成熟)的细胞的选择。

在某些实施例中，结合部分包含一种或多种sdAb，这些sdAb是重组的、CDR移植的、人源化的、骆驼化的、去免疫的和/或体外产生的(例如，通过噬菌体展示选择的)。产生抗体和sdAb，并且重组修饰它们的技术是本领域已知的。

除了展示文库的使用外，指定的抗原(例如重组CD30或其表位)可用于免疫非人动物，例如啮齿动物或骆驼科。在某些实施例中，可使用本领域已知和/或本文披露的方法产生和分离骆驼科抗原结合片段(例如，sdAb)。在一些实施例中，可以用抗原(例如重组CD30或其表位)对骆驼进行免疫。

在一些实施例中，使用本领域技术人员已知的杂交瘤方法制备单克隆抗体。例如，如上所述，使用杂交瘤方法来对小鼠、大鼠、兔子、仓鼠或其他合适的宿主动物进行免疫。在一些实施例中，淋巴细胞是体外免疫的。在一些实施例中，免疫抗原是人蛋白质或其片段。在一些实施例中，免疫抗原是恒河猴蛋白质或其片段。

免疫后，使用例如，聚乙二醇来将淋巴细胞分离并且与合适的骨髓瘤细胞系融合。使用如本领域已知的专用培养基来选择杂交瘤细胞，并且未融合的淋巴细胞和骨髓瘤细胞未在选择过程中存活下来。可以通过多种方法来鉴定产生针对所选抗原的单克隆抗体的杂交瘤，这些方法包括但不限于免疫沉淀、免疫印迹和体外结合测定(例如，流式细胞术、FACS、ELISA、SPR(例如，Biacore)和放射免疫测定法)。一旦鉴定出可产生所需特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞后，克隆可通过限制性稀释或其他技术进行亚克隆。杂交瘤可以在使用标准方法的体外培养或体内如动物腹水肿瘤中繁殖。可以根据本领域的标准方法来从培养基或腹水中纯化单克隆抗体，这些方法包括但不限于亲和色谱法、离子交换色谱法、凝胶电泳和透析。

在一些实施例中，使用本领域技术人员已知的重组DNA技术来制备单克隆抗体。例如，编码抗体的多核苷酸是从成熟B细胞或杂交瘤细胞中分离出来的(如通过使用特异性扩增编码抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸引物的RT-PCR)，并且使用标准技术确定其序列。然后将编码重链和轻链的分离的多核苷酸克隆到合适的表达载体中，这些表达载体在转染到不另外产生免疫球蛋白的宿主细胞(如大肠杆菌、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞)中时产生单克隆抗体。

在一些实施例中，通过使用重组DNA技术来修饰单克隆抗体以产生可替代的抗体。在一些实施例中，小鼠单克隆抗体的轻链和重链的恒定结构域被人抗体的恒定区替代以产生嵌合抗体。在一些实施例中，截短或去除恒定区以产生所需的单克隆抗体的抗体片段。在一些实施例中，一个或多个可变区的定点诱变或高密度诱变被用于优化单克隆抗体的特异性和/或亲和力。

在一些实施例中，CD30-结合部分是人源化抗体。产生人源化抗体的多种方法是本领域已知的。在一些实施例中，人源化抗体包含已从非人来源引入其序列的一个或多个氨基酸残基。在一些实施例中，通过用人抗体的CDR序列来取代相应的一个或多个非人CDR序列来进行人源化。在一些实施例中，通过用人抗体的CDR来取代相应的非人抗体(例如，骆驼科VHH)的所有三个CDR来构建人源化抗体。在一些实施例中，通过用人抗体的CDR来取代相应的非人抗体(例如，小鼠抗体)的所有六个CDR来构建人源化抗体。

可以基于多种因素并且通过本领域已知的多种方法来选择使用哪个人重链可变区和/或轻链可变区来产生人源化抗体。在一些实施例中，源自轻链或重链的特定亚组的所有人抗体的共有序列的特定可变区框架被选为可变区框架。在一些实施例中，可变区框架序列源自最丰富的人亚类的共有序列。在一些实施例中，人种系基因被用作可变区框架序列的来源。

在一些实施例中，CD30-结合部分是人抗体。人抗体可以使用本领域已知的不同技术制备。在一些实施例中，人抗体是从体外免疫的永生化人B淋巴细胞产生的。在一些实施例中，人抗体是从分离自免疫个体的淋巴细胞产生的。在任何情况下，都可以产生和分离产生针对靶抗原的抗体的细胞。在一些实施例中，人抗体选自噬菌体文库，其中该噬菌体文库表达人抗体。可替代地，噬菌体展示技术可以用于从来自未免疫供体的免疫球蛋白可变区基因谱系中体外产生人抗体和抗体片段。用于抗体噬菌体文库的产生和使用的技术是本领域熟知的。一旦鉴定出抗体，则可以采用本领域已知的亲和力成熟策略(包括但不限于，链改组和定点诱变)以产生更高亲和力的人抗体。在一些实施例中，人抗体在含有人免疫球蛋白基因座的转基因小鼠中产生。免疫后，这些小鼠能在不存在内源性免疫球蛋白产生的情况下产生完整的人抗体谱系。

本领域技术人员通过使用多种方法/系统来定义抗体的CDR。这些系统和/或定义已经被开发并完善了许多年，包括Kabat、Chothia、IMGT、AbM和Contact。Kabat定义是基于序列可变性并且是常用的。Chothia定义是基于结构环区域的位置。IMGT系统是基于序列可变性和可变结构域的结构内位置。AbM定义是Kabat和Chothia之间的折中方案。Contact定义是基于对可用抗体晶体结构的分析。示例性的系统是Kabat和Chothia的组合。用于抗体序列的分析和CDR的确定的软件程序(例如，abYsis)是可用的并且是本领域技术人员已知的。

本文定义的特异性CDR序列通常基于Kabat和Chothia定义的组合(示例性系统)。然而，应理解，提及特定抗体的一个或多个重链CDR和/或一个或多个轻链CDR将涵盖本领域技术人员已知的所有CDR定义。

表1总结了本披露的骆驼科和人源化sdAb(或V

表1.CDR和sdAb的氨基酸序列和/或氨基酸序列ID号

表2.CDR、VH、VL和scFv的氨基酸序列和/或序列ID号

在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含sdAb。在一些实施例中，CD30-结合部分包含具有来自本文所述的抗体的CDR1、CDR2和/或CDR3的抗体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含具有来自本文所述的抗体的CDR1、CDR2和CDR3的抗体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含本文所述的抗体的人源化形式。在一些实施例中，CD30-结合部分包含本文所述的抗CD30抗体的变体。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至三十个保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至二十五个保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至二十个保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至十五个保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至十个保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至五个保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至三个保守氨基酸取代。在一些实施例中，一个或多个保守氨基酸取代在抗体的CDR中。在一些实施例中，一个或多个保守氨基酸取代不在抗体的CDR中。在一些实施例中，一个或多个保守氨基酸取代在抗体的框架区。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：(a)包含SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88、SEQID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:94、SEQID NO:95的CDR1，或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；(b)包含SEQ ID NO:100、SEQ IDNO:101、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106的CDR2，或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；和/或(c)包含SEQ ID NO:111、SEQ IDNO:112、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:120的CDR3，或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CDR(CDR1、CDR2和/或CDR3)包含一个氨基酸取代。在一些实施例中，CDR(CDR1、CDR2和/或CDR3)包含两个氨基酸取代。在一些实施例中，CDR(CDR1、CDR2和/或CDR3)包含三个氨基酸取代。在一些实施例中，CDR(CDR1、CDR2和/或CDR3)包含四个氨基酸取代。在一些实施例中，一个或多个氨基酸取代是保守取代。在一些实施例中，作为人源化过程的一部分进行一个或多个取代。在一些实施例中，作为种系人源化过程的一部分进行一个或多个取代。在一些实施例中，作为亲和力成熟过程的一部分进行一个或多个取代。在一些实施例中，作为优化过程的一部分进行一个或多个取代。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:87的CDR1、包含SEQ IDNO:100的CDR2和/或包含SEQ ID NO:111的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:87的CDR1、包含SEQ ID NO:100的CDR2和包含SEQ ID NO:111的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:87的CDR1或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ ID NO:100的CDR2或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ IDNO:111的CDR3或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体的串联重复，该抗体具有来自具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:9具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:9具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:9具有至少约85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:9具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:9具有至少约95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:9具有至少约97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:9具有至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:19的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQID NO:21的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:22的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和/或CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS47863的人源化形式。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS47863的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS47863(SEQ ID NO:9)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS47863VH4(SEQID NO:19)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS47863VH5(SEQ ID NO:20)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS47863VH11(SEQ ID NO:21)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS47863VH12(SEQ ID NO:22)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11或AS47863VH12的串联重复。

在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体含有包含SEQ ID NO:87的CDR1、包含SEQ ID NO:100的CDR2和包含SEQ ID NO:111的CDR3。在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是AS47863。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:87的CDR1、包含SEQ IDNO:100的CDR2和/或包含SEQ ID NO:112的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:87的CDR1、包含SEQ ID NO:100的CDR2和包含SEQ ID NO:112的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:87的CDR1或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ ID NO:100的CDR2或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ IDNO:112的CDR3或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体的串联重复，该抗体具有来自具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:10具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:10具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:10具有至少约85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:10具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:10具有至少约95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:10具有至少约97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:10具有至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:23的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:25的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:26的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和/或CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48433的人源化形式。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48433的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48433(SEQ ID NO:10)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48433VH4(SEQ ID NO:23)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48433VH5(SEQ ID NO:24)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48433VH11(SEQ ID NO:25)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48433VH12(SEQ ID NO:26)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11或AS48433VH12的串联重复。

在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体含有包含SEQ ID NO:87的CDR1、包含SEQ ID NO:100的CDR2和包含SEQ ID NO:112的CDR3。在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是AS48433。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:88的CDR1、包含SEQ IDNO:101的CDR2和/或包含SEQ ID NO:113的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:88的CDR1、包含SEQ ID NO:101的CDR2和包含SEQ ID NO:113的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:88的CDR1或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ ID NO:101的CDR2或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ IDNO:113的CDR3或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体的串联重复，该抗体具有来自具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:11具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:11具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:11具有至少约85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:11具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:11具有至少约95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:11具有至少约97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:11具有至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:11的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:28的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和/或CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48463的人源化形式。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48463的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48463(SEQ ID NO:11)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48463VH4(SEQ ID NO:27)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48463VH11(SEQ ID NO:28)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48463、AS48463VH4或AS48463VH11的串联重复。

在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体含有包含SEQ ID NO:88的CDR1、包含SEQ ID NO:101的CDR2和包含SEQ ID NO:113的CDR3。在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是AS48463。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:89的CDR1、包含SEQ IDNO:102的CDR2和/或包含SEQ ID NO:114的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:89的CDR1、包含SEQ ID NO:102的CDR2和包含SEQ ID NO:114的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:89的CDR1或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ ID NO:102的CDR2或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ IDNO:114的CDR3或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体的串联重复，该抗体具有来自具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:12具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:12具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:12具有至少约85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:12具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:12具有至少约95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:12具有至少约97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:12具有至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:29的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:30的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:31的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:32的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和/或CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48481的人源化形式。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48481的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48481(SEQ ID NO:12)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48481VH5(SEQ ID NO:29)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48481VH6(SEQ ID NO:30)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48481VH13(SEQ ID NO:31)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48481VH14(SEQ ID NO:32)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13或AS48481VH14的串联重复。

在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体含有包含SEQ ID NO:89的CDR1、包含SEQ ID NO:102的CDR2和包含SEQ ID NO:114的CDR3。在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是AS48481。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:90的CDR1、包含SEQ IDNO:103的CDR2和/或包含SEQ ID NO:115的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:90的CDR1、包含SEQ ID NO:103的CDR2和包含SEQ ID NO:115的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:90的CDR1或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ ID NO:103的CDR2或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ IDNO:115的CDR3或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体的串联重复，该抗体具有来自具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:13具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:13具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:13具有至少约85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:13具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:13具有至少约95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:13具有至少约97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:13具有至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:13的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:36的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和/或CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48508的人源化形式。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48508的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48508(SEQ ID NO:13)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48508VH4(SEQ ID NO:33)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48508VH5(SEQ ID NO:34)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48508VH11(SEQ ID NO:35)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48508VH12(SEQ ID NO:36)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11或AS48508VH12的串联重复。

在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体含有包含SEQ ID NO:90的CDR1、包含SEQ ID NO:103的CDR2和包含SEQ ID NO:115的CDR3。在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是AS48508。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:91的CDR1、包含SEQ IDNO:104的CDR2和/或包含SEQ ID NO:116的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:91的CDR1、包含SEQ ID NO:104的CDR2和包含SEQ ID NO:116的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:91的CDR1或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ ID NO:104的CDR2或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ IDNO:116的CDR3或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体的串联重复，该抗体具有来自具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:14具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:14具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:14具有至少约85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:14具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:14具有至少约95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:14具有至少约97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:14具有至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:38的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和/或CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48542的人源化形式。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48542的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48542。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48542VH5。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48542VH12。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS48542、AS48542VH5或AS48542VH12的串联重复。

在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体含有包含SEQ ID NO:91的CDR1、包含SEQ ID NO:104的CDR2和包含SEQ ID NO:116的CDR3。在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是AS48542。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:92的CDR1、包含SEQ IDNO:105的CDR2和/或包含SEQ ID NO:117的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:92的CDR1、包含SEQ ID NO:105的CDR2和包含SEQ ID NO:117的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:92的CDR1或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ ID NO:105的CDR2或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ IDNO:117的CDR3或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体的串联重复，该抗体具有来自具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:15具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:15具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:15具有至少约85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:15具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:15具有至少约95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:15具有至少约97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:15具有至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:40的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和/或CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53445的人源化形式。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53445的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53445(SEQ ID NO:15)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53445VH4(SEQ ID NO:39)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53445VH11(SEQ ID NO:40)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53445、AS53445VH4或AS53445VH11的串联重复。

在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体含有包含SEQ ID NO:92的CDR1、包含SEQ ID NO:105的CDR2和包含SEQ ID NO:117的CDR3。在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是AS53445。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:93的CDR1、包含SEQ IDNO:106的CDR2和/或包含SEQ ID NO:118的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:93的CDR1、包含SEQ ID NO:106的CDR2和包含SEQ ID NO:118的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:93的CDR1或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ ID NO:106的CDR2或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ IDNO:118的CDR3或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体的串联重复，该抗体具有来自具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:16具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:16具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:16具有至少约85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:16具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:16具有至少约95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:16具有至少约97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:16具有至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:42的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:199的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:45的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:46的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和/或CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53574的人源化形式。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53574的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53574(SEQ ID NO:16)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53574VH4(SEQ ID NO:41)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53574VH5(SEQ ID NO:42)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53574VH6(SEQ ID NO:43)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53574VH7(SEQ ID NO:199)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53574VH11(SEQ ID NO:44)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53574VH12(SEQ ID NO:45)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53574VH13(SEQID NO:46)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12或AS53574VH13的串联重复。

在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体含有包含SEQ ID NO:93的CDR1、包含SEQ ID NO:106的CDR2和包含SEQ ID NO:118的CDR3。在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是AS53574。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:94的CDR1、包含SEQ IDNO:103的CDR2和/或包含SEQ ID NO:119的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:94的CDR1、包含SEQ ID NO:103的CDR2和包含SEQ ID NO:119的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:94的CDR1或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ ID NO:103的CDR2或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ IDNO:119的CDR3或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体的串联重复，该抗体具有来自具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:17具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:17具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:17具有至少约85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:17具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:17具有至少约95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:17具有至少约97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:17具有至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:47的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:48的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:50的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和/或CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53750的人源化形式。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53750的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53750(SEQ ID NO:17)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53750VH4(SEQ ID NO:47)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53750VH5(SEQ ID NO:48)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53750VH11(SEQ ID NO:49)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53750VH12(SEQ ID NO:50)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11或AS53750VH12的串联重复。

在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体含有包含SEQ ID NO:94的CDR1、包含SEQ ID NO:103的CDR2和包含SEQ ID NO:119的CDR3。在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是AS53750。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:95的CDR1、包含SEQ IDNO:103的CDR2和/或包含SEQ ID NO:120的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:95的CDR1、包含SEQ ID NO:103的CDR2和包含SEQ ID NO:120的CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：包含SEQ ID NO:95的CDR1或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ ID NO:103的CDR2或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体；包含SEQ IDNO:120的CDR3或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体的串联重复，该抗体具有来自具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:18具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:18具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:18具有至少约85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:18具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:18具有至少约95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:18具有至少约97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:18具有至少约99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:51的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:52的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:53的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分包含为SEQ ID NO:54的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和/或CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS54233的人源化形式。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS54233的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS54233(SEQ ID NO:18)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS54233VH4(SEQ ID NO:51)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS54233VH5(SEQ ID NO:52)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS54233VH11(SEQ ID NO:53)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS54233VH12(SEQ ID NO:54)。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS54233、AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11或AS54233VH12的串联重复。

在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体含有包含SEQ ID NO:95的CDR1、包含SEQ ID NO:103的CDR2和包含SEQ ID NO:120的CDR3。在一些实施例中，结合部分与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是AS54233。

在一些实施例中，CD30-结合部分是单价的并且包含本文所述的一个抗体。在一些实施例中，CD30-结合部分是二价的并且包含本文所述的两个抗体，每个抗体均含有(i)包含选自由SEQ ID NO:87-95组成的组的氨基酸序列的CDR1；(ii)包含选自由SEQ ID NO:100-106组成的组的氨基酸序列的CDR2；和(iii)包含选自由SEQ ID NO:111-120组成的组的氨基酸序列的CDR3；或在CDR1、CDR2和CDR3中的每一个中均包含多达3个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一抗体、接头和第二抗体(从N-末端到C-末端)。在一些实施例中，该第一抗体和第二抗体识别CD30的不同表位(例如CRD1和CRD6)。在某些实施例中，CD30-结合部分包含单价sdAb。在一些实施例中，CD30-结合部分包含本文所述的两个sdAb，每个sdAb均含有(i)包含选自由SEQ ID NO:87-95组成的组的氨基酸序列的CDR1；(ii)包含选自由SEQ ID NO:100-106组成的组的氨基酸序列的CDR2；和(iii)包含选自由SEQ ID NO:111-120组成的组的氨基酸序列的CDR3；或在CDR1、CDR2和CDR3中的每一个中均包含多达3个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头和第二sdAb(从N-末端到C-末端)。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一和第二sdAb，其中每个sdAb均包含来自抗体AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11、AS47863VH12、AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11、AS48433VH12、AS48463、AS48463VH4、AS48463VH11、AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13、AS48481VH14、AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11、AS48508VH12、AS48542、AS48542VH5、AS48542VH12、AS53445、AS53445VH4、AS53445VH11、AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12、AS53574VH13、AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11、AS53750VH12、AS54233、AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11或AS54233VH12的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一和第二sdAb，其中每个sdAb均具有选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:9-54和199组成。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb是该第一sdAb的串联重复。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb选自由以下组成的组：AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11、和AS47863VH12，并且其中该第二sdAb选自由以下组成的组：AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11、AS48433VH12、AS48463、AS48463VH4、AS48463VH11、AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13、AS48481VH14、AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11、AS48508VH12、AS48542、AS48542VH5、AS48542VH12、AS53445、AS53445VH4、AS53445VH11、AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12、AS53574VH13、AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11、AS53750VH12、AS54233、AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11、和AS54233VH12。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb是该第一sdAb的串联重复。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb选自由以下组成的组：AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11、和AS48433VH12，并且其中该第二sdAb选自由以下组成的组：AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11、AS47863VH12、AS48463、AS48463VH4、AS48463VH11、AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13、AS48481VH14、AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11、AS48508VH12、AS48542、AS48542VH5、AS48542VH12、AS53445、AS53445VH4、AS53445VH11、AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12、AS53574VH13、AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11、AS53750VH12、AS54233、AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11、和AS54233VH12。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb是该第一sdAb的串联重复。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb选自由以下组成的组：AS48463、AS48463VH4和AS48463VH11，并且其中该第二sdAb选自由以下组成的组：AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11、AS47863VH12、AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11、AS48433VH12、AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13、AS48481VH14、AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11、AS48508VH12、AS48542、AS48542VH5、AS48542VH12、AS53445、AS53445VH4、AS53445VH11、AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH11、AS53574VH12、AS53574VH13、AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11、AS53750VH12、AS54233、AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11、和AS54233VH12。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb是该第一sdAb的串联重复。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb选自由以下组成的组：AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13、和AS48481VH14，并且其中该第二sdAb选自由以下组成的组：AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11、AS47863VH12、AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11、AS48433VH12、AS48463、AS48463VH4、AS48463VH11、AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11、AS48508VH12、AS48542、AS48542VH5、AS48542VH12、AS53445、AS53445VH4、AS53445VH11、AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12、AS53574VH13、AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11、AS53750VH12、AS54233、AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11、和AS54233VH12。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb是该第一sdAb的串联重复。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb选自由以下组成的组：AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11、和AS48508VH12，并且其中该第二sdAb选自由以下组成的组：AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11、AS47863VH12、AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11、AS48433VH12、AS48463、AS48463VH4、AS48463VH11、AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13、AS48481VH14、AS48542、AS48542VH5、AS48542VH12、AS53445、AS53445VH4、AS53445VH11、AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12、AS53574VH13、AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11、AS53750VH12、AS54233、AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11、和AS54233VH12。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb是该第一sdAb的串联重复。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb选自由以下组成的组：AS48542、AS48542VH5和AS48542VH12，并且其中该第二sdAb选自由以下组成的组：AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11、AS47863VH12、AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11、AS48433VH12、AS48463、AS48463VH4、AS48463VH11、AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13、AS48481VH14、AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11、AS48508VH12、AS53445、AS53445VH4、AS53445VH11、AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12、AS53574VH13、AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11、AS53750VH12、AS54233、AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11、和AS54233VH12。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb是该第一sdAb的串联重复。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb选自由以下组成的组：AS53445、AS53445VH4和AS53445VH11，其中该第二sdAb选自由以下组成的组：AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11、AS47863VH12、AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11、AS48433VH12、AS48463、AS48463VH4、AS48463VH11、AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13、AS48481VH14、AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11、AS48508VH12、AS48542、AS48542VH5、AS48542VH12、AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12、AS53574VH13、AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11、AS53750VH12、AS54233、AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11、和AS54233VH12。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb是该第一sdAb的串联重复。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb选自由以下组成的组：AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12、和AS53574VH13，其中该第二sdAb选自由以下组成的组：AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11、AS47863VH12、AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11、AS48433VH12、AS48463、AS48463VH4、AS48463VH11、AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13、AS48481VH14、AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11、AS48508VH12、AS48542、AS48542VH5、AS48542VH12、AS53445、AS53445VH4、AS53445VH11、AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11、AS53750VH12、AS54233、AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11、和AS54233VH12。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb是该第一sdAb的串联重复。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb选自由以下组成的组：AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11、和AS53750VH12，其中该第二sdAb选自由以下组成的组：AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11、AS47863VH12、AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11、AS48433VH12、AS48463、AS48463VH4、AS48463VH11、AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13、AS48481VH14、AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11、AS48508VH12、AS48542、AS48542VH5、AS48542VH12、AS53445、AS53445VH4、AS53445VH11、AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12、AS53574VH13、AS54233、AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11、和AS54233VH12。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS47863的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48433的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48463的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48481的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48508的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS48542的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53445的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53574的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb包含来自抗体AS53750的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb包含来自抗体AS54233的CDR1、CDR2、和CDR3并且其中该第二sdAb是该第一sdAb的串联重复。在一些实施例中，CD30-结合部分包含第一sdAb、接头、和第二sdAb(从N-末端到C-末端)，其中该第一sdAb选自由以下组成的组：AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11、和AS54233VH12，其中该第二sdAb选自由以下组成的组：AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11、AS47863VH12、AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11、AS48433VH12、AS48463、AS48463VH4、AS48463VH11、AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13、AS48481VH14、AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11、AS48508VH12、AS48542、AS48542VH5、AS48542VH12、AS53445、AS53445VH4、AS53445VH11、AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12、AS53574VH13、AS54233、AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11、和AS53750VH12。

二价结合部分中连接第一和第二抗体的接头可以是本领域已知的任何接头。例如，接头可以是1至100个原子长度的生物相容性聚合物。在一些实施例中，接头可以是具有约1个与约50个之间的氨基酸的肽。在一些实施例中，接头可以是具有约1个与约5个、约5个与约10个、约10个与约15个、约15个与约20个、约20个与约30个、约40个或约40个与约50个之间的氨基酸的肽。可以使用的示例性接头包括Gly-Ser重复，例如，一、二、三、四、五、六、七或更多个重复的(Gly)

在一些实施例中，CD30-结合部分包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。CD30-结合部分可以是包含表2中所述的VH CDR和VL CDR的抗体。

在一些实施例中，CD30-结合部分的VH和VL通过接头连接。连接CD30-结合部分的VH和VL的接头可以是本领域已知的任何接头。例如，接头可以是1至100个原子长度的生物相容性聚合物。在一些实施例中，接头可以是具有约1个与约50个之间的氨基酸的肽。在一些实施例中，接头可以是具有约1个与约5个、约5个与约10个、约10个与约15个、约15个与约20个、约20个与约30个、约40个或约40个与约50个之间的氨基酸的肽。可以使用的示例性接头包括Gly-Ser重复，例如，一、二、三、四、五、六、七或更多个重复的(Gly)

在一些实施例中，具有VH和VL的CD30-结合部分包含sdAb、HCAb、Fab、Fab’、F(ab’)

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自本文所述的抗体的VH CDR1、CDR2和CDR3和/或VL CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含本文所述的抗体的人源化形式。在一些实施例中，CD30-结合部分包含本文所述的抗体的变体。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS57659的VH CDR1、CDR2和CDR3和/或VL CDR1、CDR2和CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS57659的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在其他实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS57659的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在某些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS57659的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS57659的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS57659。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS57765的VH CDR1、CDR2和CDR3和/或VL CDR1、CDR2和CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS57765的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在其他实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS57765的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在某些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS57765的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS57765的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS57765。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS57911的VH CDR1、CDR2和CDR3和/或VL CDR1、CDR2和CDR3，该抗体的人源化形式或变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS57911的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在其他实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS57911的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在某些实施例中，CD30-结合部分包含来自抗体AS57911的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS57911的变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体AS57911。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含scFv。在一些实施例中，本文所述的抗CD30抗体的变体包含一个至三十个保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至二十五个保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至二十个保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至十五个保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至十个保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至五个保守氨基酸取代。在一些实施例中，抗CD30抗体的变体包含一个至三个保守氨基酸取代。在一些实施例中，一个或多个保守氨基酸取代在抗体的CDR中。在一些实施例中，一个或多个保守氨基酸取代不在抗体的CDR中。在一些实施例中，一个或多个保守氨基酸取代在抗体的框架区。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：(a)包含SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98的VH CDR1；包含SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108或SEQ ID NO:109的VHCDR2；和包含SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122或SEQ ID NO:123的VH CDR3；和/或(b)包含SEQ ID NO:99的VL CDR1；包含SEQ ID NO:110的VL CDR2；和包含SEQ ID NO:124、SEQ IDNO:125或SEQ ID NO:126的VL CDR3；或在VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分含有包含SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98的VH CDR1；包含SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108或SEQ ID NO:109的VH CDR2；和/或包含SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122或SEQ ID NO:123的VH CDR3；或在VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分含有包含SEQ ID NO:99的VLCDR1；包含SEQ ID NO:110的VL CDR2；和/或包含SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:125或SEQ IDNO:126的VL CDR3；或在VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：(a)包含SEQ ID NO:96、SEQ IDNO:97或SEQ ID NO:98的VH CDR1；包含SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108或SEQ ID NO:109的VH CDR2；和包含SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122或SEQ ID NO:123的VH CDR3；和(b)包含SEQ ID NO:99的VL CDR1；包含SEQ ID NO:110的VL CDR2；和包含SEQ ID NO:124、SEQ IDNO:125或SEQ ID NO:126的VL CDR3；或在VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659、AS57765或AS57911的重链可变区具有至少约80％序列同一性的重链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659、AS57765或AS57911的重链可变区具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的重链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659、AS57765或AS57911的重链可变区相同的重链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659、AS57765或AS57911的轻链可变区具有至少约80％序列同一性的轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659、AS57765或AS57911的轻链可变区具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659、AS57765或AS57911的轻链可变区相同的轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659、AS57765或AS57911的重链可变区和轻链可变区具有至少约80％序列同一性的重链可变区和轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659、AS57765或AS57911的重链可变区和轻链可变区具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的重链可变区和轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659、AS57765或AS57911的重链可变区和轻链可变区相同的重链可变区和轻链可变区。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59或SEQ IDNO:60具有至少约80％序列同一性的scFv。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ IDNO:58、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:60具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的scFv。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：(a)包含SEQ ID NO:96的VH CDR1、包含SEQID NO:107的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:121的VH CDR3；或在这些VH CDR中包含1、2、3、4或5个氨基酸取代的其变体；和/或(b)包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VLCDR2、和包含SEQ ID NO:124的VL CDR3；或在这些VL CDR中包含1、2、3、4或5个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含一个氨基酸取代。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含多达两个氨基酸取代。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含多达三个氨基酸取代。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含多达四个氨基酸取代。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含多达五个氨基酸取代。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有包含SEQ ID NO:96的VH CDR1、包含SEQ IDNO:107的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:121的VH CDR3，或在VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：(a)包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:124的VL CDR3；或在VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：(a)包含SEQ ID NO:96的VH CDR1、包含SEQID NO:107的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:121的VH CDR3；和(b)包含SEQ ID NO:99的VLCDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:124的VL CDR3；或在VH CDR1、VHCDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的scFv的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ IDNO:59的氨基酸序列的scFv的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的scFv的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659的重链可变区具有至少约80％序列同一性的重链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFvAS57659的重链可变区具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的重链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659的重链可变区相同的重链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFvAS57659的轻链可变区具有至少约80％序列同一性的轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659的轻链可变区具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659的轻链可变区相同的轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659的重链可变区和轻链可变区具有至少约80％序列同一性的重链可变区和轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659的重链可变区和轻链可变区具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的重链可变区和轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57659的重链可变区和轻链可变区相同的重链可变区和轻链可变区。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:59具有至少约80％序列同一性的scFv。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:59具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的scFv。在一些实施例中，CD30-结合部分包含具有与SEQ ID NO:59相同的氨基酸序列的scFv。

在一些实施例中，抗体与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体包含(a)包含SEQ ID NO:96的VH CDR1、包含SEQ ID NO:107的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:121的VHCDR3；和(b)包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ IDNO:124的VL CDR3。在一些实施例中，抗体与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是scFv AS57659。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：(a)包含SEQ ID NO:97的VH CDR1、包含SEQID NO:108的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:122的VH CDR3；或在这些VH CDR中包含1、2、3、4或5个氨基酸取代的其变体；和/或(b)包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VLCDR2、和包含SEQ ID NO:125的VL CDR3；或在这些VL CDR中包含1、2、3、4或5个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含一个氨基酸取代。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含多达两个氨基酸取代。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含多达三个氨基酸取代。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含多达四个氨基酸取代。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含多达五个氨基酸取代。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有包含SEQ ID NO:97的VH CDR1、包含SEQ IDNO:108的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:122的VH CDR3，或在VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：(a)包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:125的VL CDR3；或在VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：(a)包含SEQ ID NO:97的VH CDR1、包含SEQID NO:108的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:122的VH CDR3；和(b)包含SEQ ID NO:99的VLCDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:125的VL CDR3；或在VH CDR1、VHCDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的scFv的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ IDNO:60的氨基酸序列的scFv的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的scFv的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57765的重链可变区具有至少约80％序列同一性的重链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFvAS57765的重链可变区具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的重链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57765的重链可变区相同的重链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFvAS57765的轻链可变区具有至少约80％序列同一性的轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57765的轻链可变区具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57765的轻链可变区相同的轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57765的重链可变区和轻链可变区具有至少约80％序列同一性的重链可变区和轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57765的重链可变区和轻链可变区具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的重链可变区和轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57765的重链可变区和轻链可变区相同的重链可变区和轻链可变区。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:60具有至少约80％序列同一性的scFv。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:60具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的scFv。在一些实施例中，CD30-结合部分包含具有与SEQ ID NO:60相同的氨基酸序列的scFv。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有：(a)包含SEQ ID NO:98的VH CDR1、包含SEQID NO:109的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:123的VH CDR3；或在这些VH CDR中包含1、2、3、4或5个氨基酸取代的其变体；和/或(b)包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VLCDR2、和包含SEQ ID NO:126的VL CDR3；或在这些VL CDR中包含1、2、3、4或5个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含一个氨基酸取代。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含多达两个氨基酸取代。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含多达三个氨基酸取代。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含多达四个氨基酸取代。在一些实施例中，该变体在VH CDR、VL CDR或每个中包含多达五个氨基酸取代。

在一些实施例中，CD30-结合部分含有包含SEQ ID NO:98的VH CDR1、包含SEQ IDNO:109的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:123的VH CDR3，或在VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：(a)包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:126的VL CDR3；或在VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分含有：(a)包含SEQ ID NO:98的VH CDR1、包含SEQID NO:109的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:123的VH CDR3；和(b)包含SEQ ID NO:99的VLCDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:126的VL CDR3；或在VH CDR1、VHCDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3中的每一个中均包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的scFv的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ IDNO:58的氨基酸序列的scFv的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在一些实施例中，CD30-结合部分包含来自具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的scFv的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3。

在一些实施例中，抗体与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体包含(a)包含SEQ ID NO:97的VH CDR1、包含SEQ ID NO:108的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:122的VHCDR3；和(b)包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ IDNO:125的VL CDR3。在一些实施例中，抗体与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是scFv AS57765。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57911的重链可变区具有至少约80％序列同一性的重链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFvAS57911的重链可变区具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的重链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57911的重链可变区相同的重链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFvAS57911的轻链可变区具有至少约80％序列同一性的轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57911的轻链可变区具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57911的轻链可变区相同的轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57911的重链可变区和轻链可变区具有至少约80％序列同一性的重链可变区和轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57911的重链可变区和轻链可变区具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的重链可变区和轻链可变区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与来自scFv AS57911的重链可变区和轻链可变区相同的重链可变区和轻链可变区。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:58具有至少约80％序列同一性的scFv。在一些实施例中，CD30-结合部分包含与SEQ ID NO:58具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％序列同一性的scFv。在一些实施例中，CD30-结合部分包含具有与SEQ ID NO:58相同的氨基酸序列的scFv。

在一些实施例中，抗体与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体包含(a)包含SEQ ID NO:98的VH CDR1、包含SEQ ID NO:109的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:123的VHCDR3；和(b)包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ IDNO:126的VL CDR3。在一些实施例中，抗体与参考抗体竞争与CD30的结合，其中该参考抗体是scFv AS57911。

在一些实施例中，本文所述的CD30-结合部分包含一个或多个抗体恒定区。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含三个重链恒定区(CH1、CH2或CH3)和/或轻链恒定区(CL)中的一个或多个。在一些实施例中，重链恒定区包含至少一个人恒定区。在一些实施例中，重链恒定区包含超过一个人恒定区。在一些实施例中，具有至少一个恒定区的CD30-结合部分在一个或多个区中进一步包含一个或多个氨基酸的添加、缺失或取代。

本领域已知的是，抗体的一个或多个恒定区介导几种效应子功能，并且这些效应子功能可能根据抗体的同种型而变化。例如，补体的C1组分与IgG抗体(结合抗原)的Fc区的结合激活了补体系统。补体的激活在细胞病原体的调理作用和裂解中非常重要。补体的激活还刺激炎症应答并且可以参与自身免疫性超敏反应。此外，抗体的Fc区可以结合表达Fc受体(FcR)的细胞。有许多对不同类别的抗体具有特异性的Fc受体，包括IgG(γ受体)、IgE(ε受体)、IgA(α受体)和IgM(μ受体)。抗体与细胞表面的Fc受体的结合引起许多重要且不同的生物应答，包括包被抗体的颗粒的吞噬和破坏、免疫复合物的清除、杀伤细胞对包被抗体的靶细胞的裂解(称为抗体依赖性细胞毒性)或ADCC)、炎性介质的释放、胎盘转移和免疫球蛋白产生的控制。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含Fc区。人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的Fc区的氨基酸序列是本领域技术人员已知的。在一些情况下，已经在天然抗体中鉴定出具有氨基酸变异的Fc区。在一些实施例中，CD30-结合部分包含通过在特定氨基酸位置处进行取代而工程化的变体Fc区(与天然Fc区相比)。在一些实施例中，Fc区经由铰链融合。铰链可以是IgG1铰链、IgG2铰链或IgG3铰链。在一些实施例中，CD30-结合部分包含HCAb，其含有经由IgG1铰链与Fc区融合的sdAb。

本披露进一步考虑了与本文所述的重组、单克隆、嵌合、人源化和人抗体或其抗体片段是基本上同源的另外的变体和等同物。在一些实施例中，期望改善抗体的结合亲和力。在一些实施例中，期望调节抗体的生物学特性，包括但不限于特异性、热稳定性、表达水平、一种或多种效应子功能、糖基化、免疫原性和/或溶解性。本领域技术人员将理解，氨基酸变化可以改变抗体的翻译后过程，如改变糖基化位点的数目或位置或改变膜锚定特性。

变异可以是与天然抗体或多肽序列相比，对编码导致氨基酸序列变化的抗体或多肽的一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入。在一些实施例中，氨基酸取代是用具有相似结构和/或化学性质的一种氨基酸替代另一种氨基酸(如，用丝氨酸取代亮氨酸，例如保守氨基酸替代)的结果。插入或缺失可任选地在约1至5个氨基酸的范围内。在一些实施例中，取代、缺失或插入包括相对于亲本分子的少于25个氨基酸取代、少于20个氨基酸取代、少于15个氨基酸取代、少于10个氨基酸取代、少于5个氨基酸取代、少于4个氨基酸取代、少于3个氨基酸取代或少于2个氨基酸取代。在一些实施例中，可以通过系统地在序列中进行插入、缺失或取代并且测试所得变体蛋白质的活性来确定与亲本蛋白质相比的生物学上有用和/或相关的氨基酸序列的变异。

在一些实施例中，变体可以包括在抗体或多肽的氨基和/或羧基末端添加氨基酸残基。另外的氨基酸残基的长度可以在一个残基至一百个或更多个残基的范围内。在一些实施例中，变体包含N-末端甲硫氨酰基残基。在一些实施例中，变体包含另外的多肽/蛋白质(例如，Fc区)以产生融合蛋白。在一些实施例中，将变体工程化为可检测的并且可以包含可检测的标记和/或蛋白质(例如，荧光标签或酶)。

在一些实施例中，本文披露的CD30-结合部分的变体可以保持与亲本结合部分相似程度、相同程度或更高程度地识别靶标(例如，CD30)的能力。在一些实施例中，变体在氨基酸序列方面可以与亲本结合部分具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更多同一性。在一些实施例中，变体可以具有与SEQ ID NO:9-54或58-60的氨基酸具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更多同一性的氨基酸序列。

在某些实施例中，CD30-结合部分的变体包含具有一个或多个保守氨基酸取代的亲本CD30-结合部分的氨基酸序列。保守氨基酸取代是本领域已知的，并且包括氨基酸取代(其中具有某些物理和/或化学性质的一个氨基酸交换为具有相同或相似的化学或物理性质的另一个氨基酸)。

在一些实施例中，CD30-结合部分的变体包含具有一个或多个非保守氨基酸取代的亲本结合部分的氨基酸序列。在一些实施例中，CD30-结合部分的变体包含具有一个或多个非保守氨基酸取代的亲本结合部分的氨基酸序列，其中一个或多个非保守氨基酸取代不干扰或抑制变体的一种或多种生物学活性(例如，CD30结合)。在某些实施例中，一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代可以增强变体的生物学活性，使得功能变体的生物学活性与亲本结合部分相比增加。

在一些实施例中，功能变体可以在结合部分的CDR(例如，CDR1、CDR2和CDR3)中具有1、2、3、4或5个氨基酸取代。

在一些实施例中，可以将抗原结合片段天然地或通过干预修饰。作为非限制性实例，抗原结合片段可以通过二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰，如与标记组分偶联来修饰。本发明的实施例的抗原结合片段可以包含一个或多个氨基酸类似物(包括，例如非天然氨基酸)，以及本领域已知的其他修饰。应当理解，由于本发明的抗原结合片段可以基于抗体或免疫球蛋白超家族的其他成员，因此在一些实施例中，多肽可以作为单链存在。

在一些实施例中，本披露的抗体是“去免疫的”。抗体的去免疫通常由引入特定的氨基酸突变(例如，取代、缺失、添加)组成，这些突变导致预测的T细胞表位的除去而不显著降低抗体的结合亲和力或其他所需特性。

可以使用本领域已知的方法来产生本文所述的变体抗体或多肽，所述方法包括但不限于定点诱变、丙氨酸扫描诱变和PCR诱变。

CD30-结合部分与CD30的结合亲和力是可逆的过程，并且可以作为平衡解离常数(K

在一些实施例中，CD30-结合部分以约200nM至约500nM的K

在一些实施例中，CD30-结合部分以约5pM至约500nM的K

在一些实施例中，本文提供了包含编码本文所述的多肽(即，CD30-结合部分)的多核苷酸的多核苷酸。术语“编码多肽的多核苷酸”涵盖仅包括该多肽的编码序列的多核苷酸以及包括另外的编码和/或非编码序列的多核苷酸。本披露的多核苷酸可以是RNA形式或DNA形式。DNA包括cDNA、基因组DNA和合成DNA；并且可以是双链或单链，并且如果是单链，则可以是编码链或非编码(反义)链。

在一些实施例中，多核苷酸包含编码含有选自下组的氨基酸序列的多肽的多核苷酸(例如，核苷酸序列)，该组由以下组成：SEQ ID NO:9-54、58-60和199。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:32的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:33的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:34的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:35的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:36的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:37的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:38的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:39的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:40的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:41的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:42的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:43的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:199的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:44的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:45的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:46的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:47的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:48的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:49的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:50的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:51的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:52的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:53的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:54的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:58的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:59的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:60的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。

在一些实施例中，多核苷酸包含编码含有选自下组的超过一种氨基酸序列的多肽的多核苷酸(例如，核苷酸序列)，该组由以下组成：SEQ ID NO:9-54、58-60和199。在一些实施例中，该多核苷酸包含选自下组的多核苷酸，该组由以下组成：SEQ ID NO:130-175、179-181和200。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:130。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:131。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:132。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:133。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:134。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:135。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:136。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:137。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:138。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:139。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:140。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:141。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:142。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:143。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:144。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQID NO:145。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:146。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:147。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:148。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:149。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:150。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:151。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ IDNO:152。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:153。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:154。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:155。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:156。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:157。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:158。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:160。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:161。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:162。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:163。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:164。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:200。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:165。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:166。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:167。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQID NO:168。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:169。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:170。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:171。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:172。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:173。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:174。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ IDNO:179。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:180。在一些实施例中，该多核苷酸包含SEQ ID NO:181。

本披露还提供了本文所述的多核苷酸的变体，其中该变体编码例如本文所述的CD30-结合部分的片段、类似物和/或衍生物。在一些实施例中，本披露提供了包含具有核苷酸序列的多核苷酸的多核苷酸，该核苷酸序列与编码本文所述的多肽的多核苷酸序列具有至少约80％同一性、至少约85％同一性、至少约90％同一性、至少约95％同一性、至少约96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、或至少99％同一性。

如本文所用的，短语“具有与多核苷酸序列具有至少约95％同一性的核苷酸序列的多核苷酸”意指该多核苷酸的核苷酸序列与参考序列相同，只是在该参考核苷酸序列的每100个核苷酸中，该多核苷酸序列可以包括多达五个点突变。换句话说，为了获得具有与参考核苷酸序列具有至少95％同一性的核苷酸序列的多核苷酸，可以删除或用另一个核苷酸取代参考序列中多达5％的核苷酸，或者可将参考序列中多达总核苷酸的5％的多个核苷酸插入参考序列中。参考序列的这些突变可发生在参考核苷酸序列的5'或3'末端位置或那些末端位置之间的，散布在参考序列中的单个核苷酸之间或在参考序列内的一个或多个连续基团中的任何地方。

多核苷酸变体可以在编码区、非编码区或两者中含有改变。在一些实施例中，多核苷酸变体含有产生沉默取代、添加或缺失但不改变编码的多肽的性质或活性的改变。在一些实施例中，多核苷酸变体包含沉默取代，其不导致多肽的氨基酸序列的改变(由于遗传密码的简并性)。可以出于多种原因产生多核苷酸变体，例如，为了优化特定宿主的密码子表达(例如，将人mRNA中的密码子改变为细菌宿主如大肠杆菌所偏好的那些)。在一些实施例中，多核苷酸变体在序列的非编码或编码区中包含至少一个沉默突变。

在一些实施例中，产生了多核苷酸变体以调节或改变编码的多肽的表达(或表达水平)。在一些实施例中，产生了多核苷酸变体以增加编码的多肽的表达。在一些实施例中，产生了多核苷酸变体以减少编码的多肽的表达。在一些实施例中，与亲本多核苷酸序列相比，多核苷酸变体具有增加的编码的多肽的表达。在一些实施例中，与亲本多核苷酸序列相比，多核苷酸变体具有减少的编码的多肽的表达。

在一些实施例中，多核苷酸包含具有核苷酸序列的多核苷酸，该核苷酸序列与编码选自下组的氨基酸序列的多核苷酸具有至少约80％同一性、至少约85％同一性、至少约90％同一性、至少约95％同一性、至少约96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、或至少99％同一性，该组由以下组成：SEQ ID NO:9-54、58-60和199。还提供了包含与编码选自下组的氨基酸序列的多核苷酸杂交的多核苷酸的多核苷酸，该组由以下组成：SEQ IDNO:SEQ ID NO:9-54、58-60和199。在一些实施例中，多核苷酸包含与选自下组的多核苷酸具有至少约80％同一性、至少约85％同一性、至少约90％同一性、至少约95％同一性、至少约96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、或至少99％同一性的多核苷酸，该组由以下组成：130-175、179-181和200。还提供了包含与选自下组的多核苷酸杂交的多核苷酸的多核苷酸，该组由以下组成：130-175、179-181和200。在一些实施例中，在如本领域技术人员已知的，在高严格性条件下进行杂交。

在一些实施例中，多核苷酸包含在同一阅读框中与多核苷酸融合的多肽(例如抗体)的编码序列，该多核苷酸有助于宿主细胞表达和分泌多肽(例如，前导序列，其作为控制多肽转运的分泌序列发挥作用)。多肽可以具有被宿主细胞切割的前导序列，以形成多肽的“成熟”形式。

在一些实施例中，多核苷酸包含在相同阅读框中与标记或标签序列融合的多肽(例如抗体)的编码序列。例如，在一些实施例中，标记序列是六-组氨酸标签(HIS-标签)，其允许与标记融合的多肽的有效纯化。在一些实施例中，当使用哺乳动物宿主(例如，COS-7细胞)时，标记序列是源自流感血凝素蛋白的血凝素(HA)标签。在一些实施例中，标记序列是FLAG

在一些实施例中，多核苷酸是分离的。在一些实施例中，多核苷酸是基本上纯的。

还提供了包含本文所述的多核苷酸的载体和细胞。在一些实施例中，表达载体包含编码本文所述的CD30-结合部分的多核苷酸。在一些实施例中，表达载体包含编码多肽的多核苷酸分子，该多肽是本文所述的CD30-结合部分的一部分。在一些实施例中，宿主细胞包含含有编码本文所述的CD30-结合部分的多核苷酸分子的表达载体。在一些实施例中，宿主细胞包含含有编码多肽的多核苷酸分子的表达载体，该多肽是本文所述的CD30-结合部分的一部分。在一些实施例中，宿主细胞包含编码本文所述的CD30-结合部分的多核苷酸。

本文所述的CD30-结合部分可通过本领域已知的任何方法(包括化学合成和重组表达技术)产生。除非另有说明，否则本发明的实践采用分子生物学、微生物学、遗传分析、重组DNA、有机化学、生物化学、PCR、寡核苷酸合成和修饰、核酸杂交和本领域技术范围内的相关领域中的常规技术。这些技术描述于本文引用的参考文献中并且在文献中被充分解释。参见，例如，Maniatis等人(1982)

可以使用本领域已知的方法来产生和分离本文所述的CD30-结合部分。可以使用化学方法全部或部分合成肽(参见，例如，Caruthers(1980).Nucleic AcidsRes.Symp.Ser.215；Horn(1980)；和Banga,A.K.,

可以使用本领域已知的多种技术(包括杂交瘤和重组技术或其组合的使用)来制备本文所述的包含抗体的CD30-结合部分。例如，可以使用杂交瘤技术来产生单克隆抗体，这些杂交瘤技术包括本领域已知的和例如在Harlow等人,

在一些实施例中，将重组表达载体用于扩增和表达编码CD30-结合部分的DNA。例如，重组表达载体可以是可复制的DNA构建体，该构建体包括编码CD30-结合部分(如可操作地连接至源自哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因的合适的转录和/或翻译调控元件的抗CD30抗体)的多肽链的合成的或源自cDNA的DNA片段。当DNA区在功能上相互关联时，其是“有效连接的”。例如，如果启动子控制序列的转录，则该启动子可操作地连接至编码序列；或者如果核糖体结合位点被定位以允许翻译，则该核糖体结合位点可操作地连接至编码序列。在一些实施例中，旨在在酵母表达系统中使用的结构元件包括使宿主细胞能在细胞外分泌翻译蛋白的前导序列。在一些实施例中，在无前导序列或转运序列，而重组蛋白被表达的情况下，多肽可包括N-末端甲硫氨酸残基。

可以使用多种表达宿主/载体组合。用于真核宿主的有用的表达载体包括，例如，包含来自SV40、牛乳头瘤病毒、腺病毒和巨细胞病毒的表达控制序列的载体。用于细菌宿主的有用的表达载体包括已知的细菌质粒，例如来自大肠杆菌的质粒，包括pCR1、pBR322、pMB9和其衍生物，以及更广泛的宿主范围质粒，如M13和其他丝状单链DNA噬菌体。

在一些实施例中，本披露的CD30-结合部分(例如，抗体)表达自一种或多种载体。用于表达CD30-结合部分(例如，抗体)或CD30蛋白质或其片段以用作抗原或免疫原的合适的宿主细胞包括原核生物、酵母细胞、昆虫细胞或在合适的启动子控制下的高等真核细胞。与细菌、真菌、酵母和哺乳动物细胞宿主一起使用的合适的克隆和表达载体，以及蛋白质生产(包括抗体生产)的方法在本领域中是熟知的。

合适的哺乳动物宿主细胞系的实例包括，但不限于，COS-7(源自猴肾)、L-929(源自鼠成纤维细胞)、C127(源自鼠乳腺肿瘤)、3T3(源自鼠成纤维细胞)、CHO(源自中国仓鼠卵巢)、HeLa(源自人宫颈癌)、BHK(源自仓鼠肾成纤维细胞)、HEK-293(源自人胚胎肾脏)细胞系及其变体。哺乳动物表达载体可以包含非转录元件(如复制起点、与待表达的基因连接的合适的启动子和增强子和其他5'或3'侧翼非转录序列)和5'或3'非翻译序列(如必需的核糖体结合位点、聚腺苷酸化位点、剪接供体和受体位点)以及转录终止序列。重组蛋白在昆虫细胞培养系统(例如，杆状病毒)中的表达也提供了产生正确折叠和具有生物学功能的蛋白质的可靠方法。昆虫细胞中产生异源蛋白质的杆状病毒系统是本领域技术人员熟知的。

因此，本披露提供了包含本文所述的CD30-结合部分的细胞。在一些实施例中，这些细胞产生本文所述的CD30-结合部分。在一些实施例中，这些细胞产生抗体。在一些实施例中，这些细胞产生结合人CD30的抗体。在一些实施例中，这些细胞产生结合恒河猴CD30的抗体。在一些实施例中，这些细胞产生结合人CD30和恒河猴CD30的抗体。在一些实施例中，这些细胞产生抗体AS47863。在一些实施例中，这些细胞产生抗体AS47863(被称为AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11或AS47863VH12)的人源化形式。在一些实施例中，这些细胞产生抗体AS48433。在一些实施例中，这些细胞产生抗体AS48433(被称为AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11或AS48433VH12)的人源化形式。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS48463的抗体。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS48463(被称为AS48463VH4或AS48463VH11)的抗体的人源化形式。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS48481的抗体。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS48481(被称为AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13或AS48481VH14)的抗体的人源化形式。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS48508的抗体。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS48508(被称为AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11或AS48508VH12)的抗体的人源化形式。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS48542的抗体。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS48542(被称为AS48542VH5或AS48542VH12)的抗体的人源化形式。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS53445的抗体。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS53445(被称为AS53445VH4或AS53445VH11)的抗体的人源化形式。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS53574的抗体。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS53574(被称为AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12或AS53574VH13)的抗体的人源化形式。在一些实施例中，这些细胞产生抗体AS53750。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS53750(被称为AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11或AS53750VH12)的抗体的人源化形式。在一些实施例中，这些细胞产生抗体AS54233。在一些实施例中，这些细胞产生指定为AS54233(被称为AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11或AS54233VH12)的抗体的人源化形式。在一些实施例中，该细胞是原核细胞(例如，大肠杆菌)。在一些实施例中，该细胞是真核细胞。在一些实施例中，该细胞是哺乳动物细胞。在一些实施例中，该细胞是杂交瘤细胞。

可以通过本领域已知的各种方法来分析本披露的CD30-结合部分(例如，抗体)的物理、化学和/或生物学特性。在一些实施例中，测试抗CD30抗体结合CD30(例如，人CD30和/或恒河猴CD30)的能力。结合测定包括，但不限于，SPR(例如，Biacore)、ELISA和FACS。此外，可以评估抗体的溶解性、稳定性、热稳定性、粘度、表达水平、表达质量和/或纯化效率。

表位定位是鉴定抗体(或其他结合部分)结合的靶蛋白上的结合位点、区域或表位的方法。用于定位靶蛋白上的表位的多种方法是本领域已知的。这些方法包括诱变，包括但不限于鸟枪诱变(shotgun mutagenesis)、定点诱变和丙氨酸扫描；结构域或片段扫描；肽扫描(例如Pepscan技术)；展示方法(例如，噬菌体展示、微生物展示和核糖体/mRNA展示)；涉及蛋白水解和质谱法的方法；和结构确定(例如，X射线晶体学和NMR)。在一些实施例中，本文所述的CD30-结合部分(例如，抗体)通过测定来表征，这些测定包括但不限于N-末端测序、氨基酸分析、HPLC、质谱法、离子交换色谱和木瓜蛋白酶消化。

在一些实施例中，CD30-结合部分包含含有本文所述的抗CD30抗体的缀合物。在一些实施例中，将抗CD30抗体缀合至细胞毒性剂或部分。在一些实施例中，将抗CD30抗体缀合至细胞毒性剂以形成ADC(抗体-药物缀合物)。在一些实施例中，细胞毒性部分是化学治疗剂，包括但不限于甲氨蝶呤、阿霉素/多柔比星、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、多卡米新、柔红霉素、吡咯开苯并吖庚三烯(pyrrolobenzodiazepine，PBD)或其他嵌入剂。在一些实施例中，细胞毒性部分是微管抑制剂，包括，但不限于奥瑞他汀(auristatin)、美登木素生物碱(maytansinoid)(例如DM1和DM4)和微管溶素。在一些实施例中，细胞毒性部分是细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段，包括但不限于白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链、蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、蒴莲根毒蛋白A链、α-帚曲毒蛋白、油桐蛋白、香石竹毒蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordica charantia)抑制剂、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥阜草(Sapaonariaofficinalis)抑制剂、多花白树毒蛋白、丝林霉素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酿霉素(phenomycin)、依诺霉素(enomycin)和单端抱菌素(tricothecenes)。在一些实施例中，将抗体缀合至一种或多种小分子毒素，如卡里奇霉素(calicheamicin)、美登木素生物碱、trichothenes和CC1065。

在一些实施例中，将本文所述的CD30-结合部分(例如，抗体)与允许该药剂用于诊断和/或检测的可检测物质或分子缀合。可检测物质可以包括但不限于酶，如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和乙酰胆碱酯酶；辅基，如一种或多种生物素和黄素；荧光材料，如伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素(FITC)、罗丹明、异硫氰酸四甲基罗丹明(TRITC)、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯、花青(Cy3)和藻红蛋白；生物发光材料，如荧光素酶；放射性物质，如

本文所述的CD30-结合部分(例如，抗体)可以附接至固体支持物。此类固体支持物包括但不限于，玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。在一些实施例中，将固定化的抗CD30抗体用于免疫测定法中。在一些实施例中，将固定化的抗CD30抗体用于靶抗原(例如，人CD30或恒河猴CD30)的纯化中。

3.CD30 CAR

在一方面，本文提供了特异性结合CD30的嵌合抗原受体(CAR)(“CD30CAR”)。在一些实施例中，CD30 CAR包含CD30-结合部分、跨膜(TM)结构域和胞内结构域(从N-末端到C-末端)。CD30-结合部分可以是本文所述的任何CD30-结合部分或其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含本文所述的抗CD30抗体或其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含本文所述的两种抗CD30抗体或其变体。在某些实施例中，CD30-结合部分包含本文披露的sdAb或其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含HCAb，该HCAb包含与人IgG1铰链和Fc区融合的sdAb。在某些实施例中，CD30-结合部分包含本文披露的scFv或其变体。在某些实施例中，CD30-结合部分包含本文披露的scFv的串联重复或其变体。在一些实施例中，CD30-结合部分包含抗原结合片段或其变体，该抗原结合片段包含含有CDR(例如CDR1、CDR2和CDR3)的sdAb、HCAb、Fab、Fab’、F(ab’)

在一些实施例中，CD30 CAR包含特异性结合CD30的CRD6(例如，SEQ ID NO:8)的CD30-结合部分，跨膜结构域和胞内结构域(从N-末端到C-末端)。在一些实施例中，CD30CAR包含特异性结合CD30的CRD1(例如，SEQ ID NO:3)的抗原结合片段，跨膜结构域和胞内结构域(从N-末端到C-末端)。在一些实施例中，CD30 CAR包含特异性结合CD30的CRD6(例如，SEQ ID NO:8)和CD30的CRD1(例如，SEQ ID NO:3)的CD30-结合部分，跨膜结构域和胞内结构域(从N-末端到C-末端)。

在一些实施例中，本文提供的CAR具有含有以下的CD30-结合部分：(i)包含选自由SEQ ID NO:87-95组成的组的氨基酸序列的CDR1；(ii)包含选自由SEQ ID NO:100-106组成的组的氨基酸序列的CDR2；和(iii)包含选自由SEQ ID NO:111-120组成的组的氨基酸序列的CDR3；或在CDR1、CDR2和CDR3中的每一个中均包含多达3个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，本文提供的CAR具有含有以下的CD30-结合部分：(1)包含SEQ IDNO:87的CDR1；包含SEQ ID NO:100的CDR2；和包含SEQ ID NO:111的CDR3；(2)包含SEQ IDNO:87的CDR1；包含SEQ ID NO:100的CDR2；和包含SEQ ID NO:112的CDR3；(3)包含SEQ IDNO:88的CDR1；包含SEQ ID NO:101的CDR2；和包含SEQ ID NO:113的CDR3；(4)包含SEQ IDNO:89的CDR1；包含SEQ ID NO:102的CDR2；和包含SEQ ID NO:114的CDR3；(5)包含SEQ IDNO:90的CDR1；包含SEQ ID NO:103的CDR2；和包含SEQ ID NO:115的CDR3；(6)包含SEQ IDNO:91的CDR1；包含SEQ ID NO:104的CDR2；和包含SEQ ID NO:116的CDR3；(7)包含SEQ IDNO:92的CDR1；包含SEQ ID NO:105的CDR2；和包含SEQ ID NO:117的CDR3；(8)包含SEQ IDNO:93的CDR1；包含SEQ ID NO:106的CDR2；和包含SEQ ID NO:118的CDR3；(9)包含SEQ IDNO:94的CDR1；包含SEQ ID NO:103的CDR2；和包含SEQ ID NO:119的CDR3；或(10)包含SEQID NO:95的CDR1；包含SEQ ID NO:103的CDR2；和包含SEQ ID NO:120的CDR3；或在这些CDR中包含多达约5个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，本文提供的CAR具有包含选自下组的氨基酸序列的CD30-结合部分或其变体，该组由SEQ ID NO:9-54、199组成。

在一些实施例中，本文提供的CAR具有为sdAb的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为指定为以下的sdAb的CD30-结合部分：AS47863、AS47863VH4、AS47863VH5、AS47863VH11、AS47863VH12、AS48433、AS48433VH4、AS48433VH5、AS48433VH11、AS48433VH12、AS48463、AS48463VH4、AS48463VH11、AS48481、AS48481VH5、AS48481VH6、AS48481VH13、AS48481VH14、AS48508、AS48508VH4、AS48508VH5、AS48508VH11、AS48508VH12、AS48542、AS48542VH5、AS48542VH12、AS53445、AS53445VH4、AS53445VH11、AS53574、AS53574VH4、AS53574VH5、AS53574VH6、AS53574VH7、AS53574VH11、AS53574VH12、AS53574VH13、AS53750、AS53750VH4、AS53750VH5、AS53750VH11、AS53750VH12、AS54233、AS54233VH4、AS54233VH5、AS54233VH11或AS54233VH12。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS47863的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS47863VH4的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS47863VH5的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS47863VH11的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS47863VH12的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48433的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48433VH4的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48433VH5的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48433VH11的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48433VH12的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48463的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48463VH4的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48463VH11的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48481的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48481VH5的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48481VH6的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48481VH13的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48481VH14的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48508的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48508VH4的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48508VH5的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48508VH11的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48508VH12的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48542的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48542VH5的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS48542VH12的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53445的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53445VH4的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53445VH11的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53574的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53574VH4的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53574VH5的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53574VH6的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53574VH11的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53574VH12的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53574VH13的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53750的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53750VH4的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53750VH5的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53750VH11的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS53750VH12的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS54233的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS54233VH4的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS54233VH5的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS54233VH11的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有为AS54233VH12的CD30-结合部分。

在一些实施例中，本文提供的CAR具有包含以下的CD30-结合部分：(a)含有以下的VH：(i)包含SEQ ID NO:96、97或98的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO:107、108或109的VHCDR2，和(iii)包含SEQ ID NO:121、122或123的VH CDR3；和(b)含有以下的VL：(i)包含SEQID NO:99的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO:110的VL CDR2；和(iii)包含SEQ ID NO:124、125或126的VL CDR3；或在VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3中的每一个中均包含多达约3个氨基酸取代的其变体。

在一些实施例中，本文提供的CAR具有包含以下的CD30-结合部分：(a)含有包含SEQ ID NO:96的VH CDR1、包含SEQ ID NO:107的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:121的VH CDR3的VH；和/或(b)含有包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:124的VL CDR3的VL。

在一些实施例中，本文提供的CAR具有包含以下的CD30-结合部分：(a)含有包含SEQ ID NO:97的VH CDR1、包含SEQ ID NO:108的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:122的VH CDR3的VH；和/或(b)含有包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:125的VL CDR3的VL。

在一些实施例中，本文提供的CAR具有包含以下的CD30-结合部分：(a)含有包含SEQ ID NO:98的VH CDR1、包含SEQ ID NO:109的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:123的VH CDR3的VH；和/或(b)含有包含SEQ ID NO:99的VL CDR1、包含SEQ ID NO:110的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:126的VL CDR3的VL。

在一些实施例中，本文提供CAR具有包含指定为以下的scFv的CD30-结合部分：AS57659、AS57765或AS57911。

本文提供的CAR可以具有二价CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR包含第一抗CD30抗体、接头、第二抗CD30抗体、跨膜结构域和胞内结构域(从N-末端到C-末端)。第一抗CD30抗体和第二抗CD3抗体可以结合CD30的不同表位。第一抗CD30抗体和第二抗CD3抗体可以结合CD30的相同表位。第一抗CD30抗体和第二抗CD30抗体可以是任何本文所述的抗CD30抗体或其变体。例如，本文提供的CAR包含AS48542、接头、AS53574、跨膜结构域和胞内结构域(从N-末端到C-末端)。又例如，本文提供的CAR包含AS53574、接头、AS48542、跨膜结构域和胞内结构域(从N-末端到C-末端)。

部分基于如下意外发现：包含抗CD30抗体的串联重复的二价CD-30结合部分赋予了提高的对T细胞的细胞毒性。在一些实施例中，本文提供的CAR具有包含以下的二价CD30-结合部分：本文所述的抗CD30抗体的串联重复或其变体、跨膜结构域和胞内结构域。在某些实施例中，CD30-结合部分包含本文披露的sdAb的串联重复或其变体。例如，在一些实施例中，本文提供的CAR具有包含AS53574的串联重复的CD30-结合部分。在一些实施例中，本文提供的CAR具有包含AS48542的串联重复的CD30-结合部分。

在某些实施例中，本文披露的CAR的CD30-结合部分包含前导序列(例如，氨基酸序列SEQ ID NO:61的前导序列)。不受理论束缚，在某些实施例中，前导序列促进CAR在细胞表面的表达，但是表达的CAR中，前导序列的存在对于CAR发挥功能可能不是必需的。在一些实施例中，当CAR在细胞表面表达后，全部或部分前导序列可从CAR上切除。

在一些实施例中，前导序列位于CD30-结合部分的N-末端。前导序列可以包含本领域已知的任何合适的前导序列。在一些实施例中，本文披露的CAR的CD30-结合部分包含前导序列，该前导序列包含SEQ ID NO:61或由其组成。

在一些实施例中，本文披露的CAR包含连接CD-30结合部分和跨膜结构域的铰链结构域。在一些实施例中，该铰链结构域是人铰链。在一些实施例中，该铰链结构域包含人CD8α铰链结构域。在一些实施例中，该铰链结构域包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列或由其组成。在一些实施例中，该铰链结构域包含人CD28铰链结构域。在一些实施例中，该铰链结构域包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列或由其组成。

本披露提供的CAR包含CD30-结合部分、跨膜(TM)结构域和胞内结构域。在一些实施例中，该跨膜结构域是人跨膜结构域。在一些实施例中，该跨膜结构域包含人CD8α跨膜结构域。在一些实施例中，该跨膜结构域包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列或由其组成。在一些实施例中，该跨膜结构域包含人CD28跨膜结构域。在一些实施例中，该跨膜结构域包含SEQID NO:128的氨基酸序列或由其组成。

本披露提供的CAR包含CD30-结合部分、跨膜结构域和胞内结构域。在结合表达CD30的细胞时，细胞内结构域介导表达此类CAR的T细胞的激活。在一些实施例中，胞内结构域包含一个或多个结构域(例如，信号传导结构域和/或共刺激结构域)。在一些实施例中，该胞内结构域包含信号传导结构域。在一些实施例中，该胞内结构域包含共刺激结构域。在一些实施例中，一种或多种胞内结构域是一种或多种人结构域。一般而言，信号传导结构域(例如CD3ζ)可在T细胞激活期间介导下游信号传导，其可源自T细胞受体的细胞内信号传导部分；共刺激结构域可增强细胞因子的产生，其可源自共刺激蛋白(例如CD28和4-1BB)的细胞内信号传导结构域。

在一些实施例中，本披露提供的CAR包含CD30-结合部分、跨膜结构域和至少一个信号传导结构域。信号传导结构域可以是本领域已知的适于在T细胞激活期间介导下游信号传导的任何信号传导结构域。在一些实施例中，信号传导结构域源自CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、或其任何组合。在一些实施例中，信号传导结构域是CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、或其任何组合的信号传导结构域。在一些实施例中，信号传导结构域是CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、或其任何组合的胞内部分。在一些实施例中，信号传导结构域也可以是天然信号传导结构域的变体，该变体在T细胞激活期间维持其在介导下游信号传导中的活性。在一些实施例中，本文披露的CAR包含至少一个信号传导结构域。在一些实施例中，本文披露的CAR包含至少两个信号传导结构域。在一些实施例中，本文披露的CAR包含至少三个信号传导结构域。在一些实施例中，本文披露的CAR包含CD3ζ的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，本文披露的CAR包含FcRγ的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，本文披露的CAR包含FcRβ的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，本文披露的CAR包含CD3γ的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，本文披露的CAR包含CD3δ的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，本文披露的CAR包含CD3ε的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，本文披露的CAR包含CD5的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，本文披露的CAR包含CD22的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，本文披露的CAR包含CD79a的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，本文披露的CAR包含CD79b的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，本文披露的CAR包含CD66d的信号传导结构域或其变体。

在一些实施例中，本披露提供的CAR包含CD30-结合部分、跨膜结构域和至少一个共刺激结构域。共刺激结构域可以是本领域已知的适用于在T细胞激活期间增强细胞因子的产生、T细胞存活和增殖或其他T细胞功能性的任何共刺激结构域。在一些实施例中，本文披露的CAR包含至少一个共刺激结构域。在一些实施例中，本文披露的CAR包含至少两个共刺激结构域。在一些实施例中，本文披露的CAR包含至少三个共刺激结构域。在一些实施例中，共刺激结构域可以源自CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD27、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、TNFRSF9、TNFRSF4、TNFRSF8、CD40LG、ITGB2、KLRC2、TNFRSF18、TNFRSF14、HAVCR1、LGALS9、CD83、特异性地与CD83结合的配体、或其任何组合。在一些实施例中，共刺激结构域可以是来自以下的信号传导结构域：CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD27、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、TNFRSF9、TNFRSF4、TNFRSF8、CD40LG、ITGB2、KLRC2、TNFRSF18、TNFRSF14、HAVCR1、LGALS9、CD83、特异性地与CD83结合的配体、或其任何组合。在一些实施例中，共刺激结构域可以是以下的胞内部分：CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD27、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、TNFRSF9、TNFRSF4、TNFRSF8、CD40LG、ITGB2、KLRC2、TNFRSF18、TNFRSF14、HAVCR1、LGALS9、CD83、特异性地与CD83结合的配体、或其任何组合。在一些实施例中，共刺激结构域可以是以下的胞内结构域：CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD27、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、TNFRSF9、TNFRSF4、TNFRSF8、CD40LG、ITGB2、KLRC2、TNFRSF18、TNFRSF14、HAVCR1、LGALS9、CD83、和特异性地与CD83结合的配体、或其任何组合。在一些实施例中，信号传导结构域也可以是天然共刺激结构域的变体，其维持其在T细胞活化期间的增强细胞因子产生、T细胞存活和增殖或其他T细胞功能性中的活性。

在一些实施例中，共刺激结构域包含CD28的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含4-1BB(CD137)的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含CD27的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含OX40的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含CD40的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含PD-1的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含ICOS的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含CD2的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含CD7的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含LIGHT的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含NKG2C的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含B7-H3的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含TNFRSF9的T细胞信号传导结构域的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含TNFRSF4的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含TNFRSF8的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含CD40LG的T细胞信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含ITGB2的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含KLRC2的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含TNFRSF18的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含TNFRSF14的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含HAVCR1的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含LGALS9的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含CD83的信号传导结构域或其变体。在一些实施例中，共刺激结构域包含特异性地与CD83结合的配体的信号传导结构域或其变体。

在一些实施例中，本文披露的CAR的胞内结构域包含信号传导结构域和共刺激结构域。在一些实施例中，胞内结构域包含信号传导结构域和共刺激结构域(从N-末端到C-末端)。在一些实施例中，胞内结构域包含共刺激结构域和信号传导结构域(从N-末端到C-末端)。信号传导结构域可以是本文披露的或本领域中以其他方式已知的任何信号传导结构域。共刺激结构域可以是本文披露的或本领域中以其他方式已知的任何共刺激结构域。例如，在一些实施例中，本文披露的CAR包含含有CD3ζ和4-1BB的信号传导结构域的胞内结构域。在另一个实施例中，本文披露的CAR包含含有CD3ζ和CD28的信号传导结构域的胞内结构域。在另一个实施例中，本文披露的CAR包含含有CD3ζ、4-1BB和CD28的信号传导结构域的胞内结构域。在一些实施例中，CD3ζ信号传导结构域包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列或由其组成。在一些实施例中，4-1BB信号传导结构域包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列或由其组成。在某些实施例中，CD28信号传导结构域包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列或由其组成。

在一些实施例中，本文披露的CAR包含前导序列、CD30-结合部分、铰链、跨膜区和胞内结构域(从N-末端至C-末端)。在一些实施例中，本文披露的CAR包含前导序列、CD30-结合部分、铰链、跨膜、共刺激结构域和信号传导结构域(从N-末端至C-末端)。

在一些实施例中，本文披露的CAR包含前导序列(例如，SEQ ID NO:61)、CD30-结合部分(例如，本文披露的sdAb或scFv)、铰链(例如，CD8α铰链或CD28铰链)、跨膜区(例如，CD8α跨膜区或CD28跨膜区)、共刺激结构域(例如4-1BB或CD28的T细胞信号传导结构域)、和信号传导结构域(例如，CD3ζ的T细胞信号传导结构域)(从N-末端至C-末端)。

在一些实施例中，本文披露的CAR包含前导序列(SEQ ID NO:61)、靶结合部分(即，抗CD30 sdAb或scFv)、CD8α铰链(SEQ ID NO:62)、CD8α跨膜(TM)区(SEQ ID NO:63)、4-1BB(CD137)分子的胞内部分(SEQ ID NO:64)、和CD3ζ分子的胞内部分(SEQ ID NO:65)(从N-末端至C-末端)。将这些CAR指定为“[CD30-结合部分]bbz”。例如，指定为AS47863bbz的CAR包含前导序列(例如，SEQ ID NO:61)、指定为AS47863的sdAb抗体(SEQ ID NO:9)、CD8α铰链(SEQ ID NO:62)、CD8α跨膜(TM)区(SEQ ID NO:63)、4-1BB(CD137)分子的胞内部分(SEQ IDNO:64)、和CD3ζ分子的胞内部分(SEQ ID NO:65)(从N-末端至C-末端)。又例如，指定为AS48542VH5bbz的CAR包含前导序列(例如，SEQ ID NO:61)、指定为AS48542VH5的抗体(SEQID NO:37)、CD8α铰链(SEQ ID NO:62)、CD8α跨膜(TM)区(SEQ ID NO:63)、4-1BB(CD137)分子的胞内部分(SEQ ID NO:64)、和CD3ζ分子的胞内部分(SEQ ID NO:65)(从N-末端至C-末端)。

在一些实施例中，本文披露的CAR包含前导序列(SEQ ID NO:61)、靶结合部分(即，抗CD30 sdAb或scFv)、CD28铰链(SEQ ID NO:127)、CD28跨膜(TM)区(SEQ ID NO:128)、CD28分子的胞内部分(SEQ ID NO:129)、和CD3ζ分子的胞内部分(SEQ ID NO:65)(从N-末端至C-末端)。将这些CAR指定为“[CD30-结合部分]-28z”。又例如，指定为AS48542-28z的CAR(SEQID NO:201)包含前导序列(例如，SEQ ID NO:61)、指定为AS48542的抗体(SEQ ID NO:14)、CD28铰链(SEQ ID NO:127)、CD28跨膜(TM)区(SEQ ID NO:128)、CD28分子的胞内部分(SEQID NO:129)、和CD3ζ分子的胞内部分(SEQ ID NO:65)(从N-末端至C-末端)。

因此，在一些实施例中，本文提供了指定为AS47863bbz、AS48433bbz、AS48463bbz、AS48481bbz、AS48508bbz、AS48542bbz、AS53445bbz、AS53574bbz、AS53750bbz、AS54233bbz、AS57659bbz、AS57765bbz或AS57911bbz的CD30 CAR。在一些实施例中，本文提供了指定为AS47863bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS47863bbz的CD30 CAR包含SEQID NO:70的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48433bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS48433bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48463bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS48463bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48481bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS48481bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48508bbz的CD30CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS48508bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48542bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS48542bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53750bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS53750bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS54233bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS54233bbz的CD30 CAR包含SEQID NO:77的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53445bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS53445bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS53574bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS57911bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS57911bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS57659bbz的CD30CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS57659bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS57765bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS57765bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列。

在一些实施例中，本文提供了指定为以下的CD30 CAR：AS47863VH4bbz、AS47863VH5bbz、AS47863VH11bbz、AS47863VH12bbz、AS48433VH4bbz、AS48433VH5bbz、AS48433VH11bbz、AS48433VH12bbz、AS48463VH4bbz、AS48463VH11bbz、AS48481VH5bbz、AS48481VH6bbz、AS48481VH13bbz、AS48481VH14bbz、AS48508VH4bbz、AS48508VH5bbz、AS48508VH11bbz、AS48508VH12bbz、AS48542VH5bbz、AS48542VH12bbz、AS53445VH4bbz、AS53445VH11bbz、AS53574VH4bbz、AS53574VH5bbz、AS53574VH6bbz、AS53574VH7、AS53574VH11bbz、AS53574VH12bbz、AS53574VH13bbz、AS53750VH4bbz、AS53750VH5bbz、AS53750VH11bbz、AS53750VH12bbz、AS54233VH4bbz、AS54233VH5bbz、AS54233VH11bbz或AS54233VH12bbz。在一些实施例中，本文提供了指定为AS47863VH4bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS47863VH4bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS47863VH5bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS47863VH11bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS47863VH12bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48433VH4bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48433VH5bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48433VH11bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48433VH12bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48463VH4bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS48463VH4bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48463VH11bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48481VH5bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48481VH6bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48481VH13bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48481VH14bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48508VH4bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48508VH5bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48508VH11bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48508VH12bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48542VH5bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS48542VH5bbz的CD30 CAR包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48542VH12bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53445VH4bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53445VH11bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH4bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH5bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH6bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH7bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH11bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH12bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH13bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53750VH4bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53750VH5bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53750VH11bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53750VH12bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS54233VH4bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS54233VH5bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS54233VH11bbz的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS54233VH12bbz的CD30 CAR或其变体。

因此，在一些实施例中，本文提供了指定为以下的CD30 CAR：AS47863-28z、AS48433-28z、AS48463-28z、AS48481-28z、AS48508-28z、AS48542-28z、AS53445-28z、AS53574-28z、AS53750-28z、AS54233-28z、AS57659-28z、AS57765-28z或AS57911-28z。在一些实施例中，本文提供了指定为AS47863-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48433-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48463-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48481-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48508-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48542-28z的CD30CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53750-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS54233-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53445-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS57911-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS57659-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS57765-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS48542-28z的CD30 CAR包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列。

在一些实施例中，本文提供了指定为以下的CD30 CAR：AS47863VH4-28z、AS47863VH5-28z、AS47863VH11-28z、AS47863VH12-28z、AS48433VH4-28z、AS48433VH5-28z、AS48433VH11-28z、AS48433VH12-28z、AS48463VH4-28z、AS48463VH11-28z、AS48481VH5-28z、AS48481VH6-28z、AS48481VH13-28z、AS48481VH14-28z、AS48508VH4-28z、AS48508VH5-28z、AS48508VH11-28z、AS48508VH12-28z、AS48542VH5-28z、AS48542VH12-28z、AS53445VH4-28z、AS53445VH11-28z、AS53574VH4-28z、AS53574VH5-28z、AS53574VH6-28z、AS53574VH7、AS53574VH11-28z、AS53574VH12-28z、AS53574VH13-28z、AS53750VH4-28z、AS53750VH5-28z、AS53750VH11-28z、AS53750VH12-28z、AS54233VH4-28z、AS54233VH5-28z、AS54233VH11-28z或AS54233VH12-28z。在一些实施例中，本文提供了指定为AS47863VH4-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS47863VH5-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS47863VH11-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS47863VH12-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48433VH4-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48433VH5-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48433VH11-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48433VH12-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48463VH4-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48463VH11-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48481VH5-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48481VH6-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48481VH13-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48481VH14-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48508VH4-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48508VH5-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48508VH11-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48508VH12-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48542VH5-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS48542VH12-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53445VH4-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53445VH11-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH4-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH5-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH6-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH7-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH11-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH12-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53574VH13-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53750VH4-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53750VH5-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53750VH11-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS53750VH12-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS54233VH4-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS54233VH5-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS54233VH11-28z的CD30 CAR或其变体。在一些实施例中，本文提供了指定为AS54233VH12-28z的CD30CAR或其变体。在一些实施例中，指定为AS48542VH5-28z的CD30 CAR包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列。在一些实施例中，指定为AS47863VH4-28z的CD30 CAR包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列。

在一些实施例中，本文提供了具有二价CD30-结合部分的CAR。在一些实施例中，本文提供了具有双互补位CD30-结合部分的CAR。在一些实施例中，本文披露的CAR包含前导序列(例如，SEQ ID NO:61)、第一抗CD30 sdAb、接头、第二抗CD30sdAb、铰链(例如，CD8α铰链或CD28铰链)、跨膜区(例如，CD8α跨膜区或CD28跨膜区)、共刺激结构域(例如，4-1BB或CD28的T细胞信号传导结构域)、和信号传导结构域(例如，CD3ζ的T细胞信号传导结构域)(从N-末端至C-末端)。在一些实施例中，该第二抗CD30 sdAb是第一抗CD30 sdAb的串联重复。在一些实施例中，该第二抗CD30 sdAb与第一抗CD30 sdAb不同。在一些实施例中，该第二抗CD30 sdAb和第一抗CD30 sdAb结合CD30上的不同表位。

在一些实施例中，本文披露的CAR包含前导序列(例如，SEQ ID NO:61)、第一抗CD30 sdAb、接头、第二抗CD30 sdAb、CD8α铰链(SEQ ID NO:62)、CD8α跨膜(TM)区(SEQ IDNO:63)、4-1BB(CD137)分子的胞内部分(SEQ ID NO:64)、和CD3ζ分子的胞内部分(SEQ IDNO:65)(从N-末端至C-末端)，其中该第二抗CD30 sdAb是第一抗CD30 sdAb的串联重复。如果接头是长(G4S)

在一些实施例中，本文披露的CAR包含前导序列(例如，SEQ ID NO:61)、第一抗CD30 sdAb、接头、第二抗CD30 sdAb、CD8α铰链(SEQ ID NO:62)、CD8α跨膜(TM)区(SEQ IDNO:63)、4-1BB(CD137)分子的胞内部分(SEQ ID NO:64)、和CD3ζ分子的胞内部分(SEQ IDNO:65)(从N-末端至C-末端)，其中该第二抗CD30 sdAb与第一抗CD30 sdAb不同。如果接头是长(G4S)

在一些实施例中，本文披露的CAR包含前导序列(例如，SEQ ID NO:61)、第一抗CD30 sdAb、接头、第二抗CD30 sdAb、CD28铰链(SEQ ID NO:127)、CD28跨膜(TM)区(SEQ IDNO:128)、CD28分子的胞内部分(SEQ ID NO:129)、和CD3ζ分子的胞内部分(SEQ ID NO:65)(从N-末端至C-末端)，其中该第二抗CD30 sdAb是第一抗CD30 sdAb的串联重复。如果接头是长(G4S)

在一些实施例中，本文披露的CAR包含前导序列(例如，SEQ ID NO:61)、第一抗CD30 sdAb、接头、第二抗CD30 sdAb、CD28铰链(SEQ ID NO:127)、CD28跨膜(TM)区(SEQ IDNO:128)、CD28分子的胞内部分(SEQ ID NO:129)、和CD3ζ分子的胞内部分(SEQ ID NO:65)(从N-末端至C-末端)，其中该第二抗CD30 sdAb与第一抗CD30 sdAb不同。如果接头是长(G4S)

在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR，该氨基酸序列与SEQID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:81、SEQID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:182、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:184、SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:186、SEQ ID NO:187、SEQ IDNO:188、SEQ ID NO:189、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:192、SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:194、SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210或SEQ IDNO:211具有至少80％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR，该氨基酸序列与SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ IDNO:86、SEQ ID NO:182、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:184、SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:186、SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:189、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:191、SEQ IDNO:192、SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:194、SEQ ID NO:201、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210或SEQ ID NO:211具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ IDNO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:182、SEQ ID NO:183、SEQID NO:184、SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:186、SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:189、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:192、SEQ ID NO:193、SEQ ID NO:194、SEQID NO:201、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:209、SEQ ID NO:210或SEQ ID NO:211。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:70具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:70具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:70具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:70具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:70具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:70具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:70的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:71具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:71具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:71具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:71具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:71具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:71具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:71的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:72具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:72具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:72具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:72具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:72具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:72具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:72的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:73具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:73具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:73具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:73具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:73具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:73具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:73的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:74具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:74具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:74具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:74具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:74具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:74具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:74的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:75具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:75具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:75具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:75具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:75具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:75具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:75的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:76具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:76具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:76具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:76具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:76具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:76具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:76的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:77具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:77具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:77具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:77具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:77具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:77具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:77的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:78具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:78具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:78具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:78具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:78具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:78具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:78的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:79具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:79具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:79具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:79具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:79具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:79具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:79的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:80具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:80具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:80具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:80具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:80具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:80具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:80的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:81具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:81具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:81具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:81具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:81具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:81具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:81的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:82具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:82具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:82具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:82具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:82具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:82具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:82的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:83具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:83具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:83具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:83具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:83具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:83具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:83的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:84具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:84具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:84具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:84具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:84具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:84具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:84的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:85具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:85具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:85具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:85具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:85具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:85具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:85的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:86具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:86具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:86具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:86具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:86具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:86具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ IDNO:86的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:182具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:182具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:182具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:182具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:182具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:182具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:183具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:183具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:183具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:183具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:183具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:183具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:184具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:184具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:184具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:184具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:184具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:184具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:185具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:185具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:185具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:185具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:185具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:185具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:186具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:186具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:186具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:186具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:186具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:186具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:187具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:187具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:187具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:187具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:187具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:187具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:188具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:188具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:188具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:188具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:188具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:188具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:188的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:189具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:189具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:189具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:189具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:189具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:189具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:189的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:190具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:190具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:190具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:190具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:190具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:190具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:190的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:191具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:191具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:191具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:191具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:191具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:191具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:191的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:192具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:192具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:192具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:192具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:192具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:192具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:192的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:193具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:193具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:193具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:193具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:193具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:193具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:193的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:194具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:194具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:194具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:194具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:194具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:194具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:194的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:201具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:201具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:201具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:201具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:201具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:201具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:208具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:208具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:208具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:208具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:208具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:208具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:209具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:209具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:209具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:209具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:209具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:209具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:210具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:210具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:210具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:210具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:210具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:210具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列。

在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:211具有至少80％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:211具有至少85％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQID NO:211具有至少90％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:211具有至少95％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:211具有至少97％同一性。在一些实施例中，CD30 CAR具有氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:211具有至少99％同一性。在一些实施例中，CAR具有包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列。

在一些实施例中，本文披露的CAR可以是任何长度。在某些实施例中，CAR可以包含任何数目的氨基酸，其条件是CAR保持其生物活性(例如，特异性结合抗原、治疗哺乳动物和/或预防哺乳动物的病症的能力)。作为非限制性实例，CAR的长度可以是约50至约5000个氨基酸，如长度为约50至约500、约500至约1000、约1000至约1500、约1500至约2000、约2000至约2500、约2500至约3000、约3000至约3500、约3500至约4000、约4000至约4500、约4500至约5000、或约5000或更多个氨基酸。

本文进一步提供了本文所述的CAR的变体。本文提供的变体是与亲本CAR具有实质性序列同一性或相似性并且保持亲本CAR的生物学活性的CAR。

在一些实施例中，本文提供了包含编码本文所述的多肽(即，CD30 CAR)的多核苷酸的多核苷酸。在一些实施例中，多核苷酸包含编码含有选自下组的氨基酸序列的多肽的多核苷酸(例如，核苷酸序列)，该组由以下组成：SEQ ID NO:70-86、182-198、201和208-211。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:84的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:85的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:86的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ IDNO:182的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQID NO:183的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:184的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:186的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:187的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:188的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:189的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:190的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:191的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:192的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:193的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:194的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:195的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:196的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:197的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:198的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:201的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:208的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该多核苷酸包含编码含有SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。

本披露还提供了本文所述的多核苷酸的变体，其中该变体编码例如本文所述的CD30 CAR的片段、类似物和/或衍生物。在一些实施例中，本披露提供了包含具有核苷酸序列的多核苷酸的多核苷酸，该核苷酸序列与编码本文所述的多肽的多核苷酸序列具有至少约80％同一性、至少约85％同一性、至少约90％同一性、至少约95％同一性、至少约96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、或至少99％同一性。

多核苷酸变体可以在编码区、非编码区或两者中含有改变。在一些实施例中，多核苷酸变体含有产生沉默取代、添加或缺失但不改变编码的多肽的性质或活性的改变。在一些实施例中，多核苷酸变体包含沉默取代，其不导致多肽的氨基酸序列的改变(由于遗传密码的简并性)。可以出于多种原因产生多核苷酸变体，例如，为了优化特定宿主的密码子表达(例如，将人mRNA中的密码子改变为细菌宿主如大肠杆菌所偏好的那些)。在一些实施例中，多核苷酸变体在序列的非编码或编码区中包含至少一个沉默突变。

在一些实施例中，产生了多核苷酸变体以调节或改变编码的多肽的表达(或表达水平)。在一些实施例中，产生了多核苷酸变体以增加编码的多肽的表达。在一些实施例中，产生了多核苷酸变体以减少编码的多肽的表达。在一些实施例中，与亲本多核苷酸序列相比，多核苷酸变体具有增加的编码的多肽的表达。在一些实施例中，与亲本多核苷酸序列相比，多核苷酸变体具有减少的编码的多肽的表达。

在一些实施例中，多核苷酸包含具有核苷酸序列的多核苷酸，该核苷酸序列与编码选自下组的氨基酸序列的多核苷酸具有至少约80％同一性、至少约85％同一性、至少约90％同一性、至少约95％同一性、至少约96％同一性、至少97％同一性、至少98％同一性、或至少99％同一性，该组由以下组成：SEQ ID NO:70-86、182-198、201和208-211。还提供了包含与编码选自下组的氨基酸序列的多核苷酸杂交的多核苷酸的多核苷酸，该组由以下组成：SEQ ID NO:SEQ ID NO:70-86、182-198、201和208-211。在一些实施例中，在如本领域技术人员已知的，在高严格性条件下进行杂交。

在一些实施例中，多核苷酸包含在同一阅读框中与多核苷酸融合的多肽(例如抗体)的编码序列，该多核苷酸有助于宿主细胞表达和分泌多肽(例如，前导序列，其作为控制多肽转运的分泌序列发挥作用)。多肽可以具有被宿主细胞切割的前导序列，以形成多肽的“成熟”形式。

在一些实施例中，多核苷酸包含在相同阅读框中与标记或标签序列融合的多肽的编码序列。例如，在一些实施例中，标记序列是六-组氨酸标签(HIS-标签)，其允许与标记融合的多肽的有效纯化。在一些实施例中，当使用哺乳动物宿主(例如，COS-7细胞)时，标记序列是源自流感血凝素蛋白的血凝素(HA)标签。在一些实施例中，标记序列是FLAG

在一些实施例中，多核苷酸是分离的。在一些实施例中，多核苷酸是基本上纯的。

还提供了包含本文所述的多核苷酸的载体和细胞。在一些实施例中，表达载体包含编码本文所述的CD30 CAR的多核苷酸。在一些实施例中，表达载体包含编码多肽的多核苷酸分子，该多肽是本文所述的CD30 CAR的一部分。在某些实施例中，该载体是病毒载体。在一些实施例中，宿主细胞包含含有编码本文所述的CD30 CAR的多核苷酸分子的表达载体。

在某些实施例中，载体可以包括本领域已知的所有载体，包括并入重组多核苷酸的粘粒、质粒(例如，裸的或包含在脂质体中的)和病毒(例如慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)。在一些实施例中，该载体是慢病毒载体。慢病毒是最有效的基因递送方法之一。慢病毒可以感染非分裂细胞，并且其可以将大量遗传信息递送到宿主细胞。慢病毒载体可以是源自慢病毒基因组的至少一部分的载体，包括特别是如Milone等人,Mol.Ther.17(8):1453-1464(2009)中提供的自灭活的慢病毒载体。在一些实施例中，可以使用本领域已知的任何慢病毒载体。

本文提供的CAR可以通过本领域已知的方法获得。一旦组装后，则可将本文披露的编码多肽序列(例如，CD30 CAR)的多核苷酸序列插入表达载体中，并且可操作地连接至适用于在所需宿主中表达蛋白质的表达控制序列。可以通过核苷酸测序、限制性内切酶定位和/或生物活性多肽在合适宿主中的表达来确认正确的组装。

如本领域熟知的，为了在宿主中获得高表达水平的转染基因，必需将该基因可操作地连接至在所选的表达宿主中起作用的转录和翻译表达控制序列。在一些实施例中，将重组表达载体用于扩增和表达编码本文所述的多肽或分子的DNA。与细菌、真菌、酵母和哺乳动物细胞宿主一起使用的合适的克隆和表达载体是本领域技术人员所熟知的。

可以将核酸克隆到许多类型的载体中，这些载体包括但不限于质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、动物病毒和粘粒。特别感兴趣的载体包括表达载体、复制载体、探针生成载体和测序载体。在某些实施例中，可以将表达载体以病毒载体的形式提供至细胞。病毒载体技术是本领域熟知的并且描述于例如Sambrook等人(2001,

在一些实施例中，宿主细胞包含含有编码多肽的多核苷酸分子的表达载体，该多肽是本文所述的CD30 CAR的一部分。在一些实施例中，宿主细胞包含编码本文所述的CD30-结合部分的多核苷酸。作为非限制性实例，用于表达本文披露的多肽的合适的宿主细胞包括在合适的启动子控制下的原核生物、酵母细胞、昆虫细胞或更高等的真核细胞。在某些实施例中，原核宿主细胞可包括大肠杆菌并且真核细胞可以包括哺乳动物来源的已建立的细胞系，如猿猴COS细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。也可以使用无细胞翻译系统。重组蛋白在哺乳动物细胞中的表达通常是经适当修饰的、正确折叠的并且具有生物学功能。在其他实施例中，可以从噬菌体展示文库或使用其他细胞表面展示技术分离重组蛋白或其片段。

可以通过任何合适的制备多肽或蛋白质的方法来制备本文披露的特异性结合CD30的CAR。从头合成多肽和蛋白质的合适方法是本领域已知的。此外，可以使用，例如Green和Sambrook,

本文披露的或本领域已知的任何方法均可用于将本文披露的核酸引入宿主细胞。为了确认宿主细胞中重组DNA序列的存在，可以进行多种测定。作为非限制性实例，此类测定包括本领域技术人员熟知的分子生物学测定，例如DNA印迹法、RNA印迹法、RT-PCR和PCR；生物化学测定，如例如通过免疫学方法(ELISA和蛋白质印迹)来检测特定肽的存在或不存在。

4.表达CD30 CAR的细胞

本披露提供了重组表达本文披露的CD30 CAR的细胞。在一些实施例中，该细胞是免疫细胞。在一些实施例中，这些细胞源自人(在重组之前是人来源的)。免疫细胞可以是淋巴谱系的细胞。淋巴谱系的细胞的非限制性实例包括T细胞和自然杀伤(NK)细胞。T细胞表达T细胞受体(TCR)，其中大多数细胞表达α和β链并且少数表达γ和δ链(“γδT细胞”)。用作本披露的免疫细胞的T细胞可以是CD4+或CD8+，并且可以包括，但不限于T辅助细胞(CD4+)、细胞毒性T细胞(CD8+)、自然杀伤T细胞、γδT细胞、粘膜相关的不变T细胞(MAIT)和记忆T细胞(包括中枢记忆T细胞、干细胞样记忆T细胞(或干样记忆T细胞)和效应记忆T细胞)，例如TEM细胞和TEMRA(CD45RA+)细胞。可以在本披露中使用的免疫细胞(重组表达如上所述的CAR)的前体细胞是例如造血干细胞和/或祖细胞。造血干细胞和/或祖细胞可以通过本领域已知的方法衍生自骨髓、脐带血、细胞因子动员后的成人外周血等，然后将其进行基因工程化以重组表达本文披露的CD30 CAR。特别有用的前体细胞是可以分化为淋巴谱系的那些，例如，造血干细胞或淋巴谱系的祖细胞。

在一些实施例中，该细胞是T细胞。本文提供了重组表达特异性结合本文披露的CD30的CAR的T细胞(“CAR T”)。在一些实施例中，该T细胞选自由以下组成的组：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、和γδT细胞。本文提供了重组表达本文披露的CD30CAR的细胞毒性T细胞。本文提供了重组表达本文披露的CD30 CAR的辅助T细胞。本文提供了重组表达本文披露的CD30 CAR的细胞毒性T细胞。本文提供了重组表达本文披露的CD30CAR的辅助T细胞。本文提供了重组表达本文披露的CD30 CAR的NKT细胞。在一些实施例中，该细胞是Vα24-不变NKT细胞。本文提供了重组表达本文披露的CD30 CAR的γδT细胞。

免疫细胞和其前体细胞可以通过本领域熟知的方法分离，这些方法包括可商购的分离方法(参见，例如，Rowland-Jones等人,Lymphocytes:A Practical Approach,OxfordUniversity Press,New York(1999))。免疫细胞或其前体细胞的来源包括但不限于外周血、脐带血、骨髓或其他造血细胞来源。可以采用多种技术来分离细胞，以分离或富集所需的免疫细胞。例如，阴性选择方法可以用于去除不是所需免疫细胞的细胞。此外，阳性选择方法可以用于分离或富集所需免疫细胞或其前体细胞，或者可以采用阳性和阴性选择方法的组合。单克隆抗体(MAb)对鉴定与特定细胞谱系和/或阳性和阴性选择两者的分化阶段相关的标记特别有用。如果要分离特定类型的细胞(例如，特定类型的T细胞)，各种细胞表面标记或标记的组合(包括但不限于，CD3、CD4、CD8、CD34(用于造血干细胞和祖细胞)等)可以用于分离细胞，如本领域熟知的(参见Kearse,

用于分离细胞的程序包括但不限于，密度梯度离心、偶联至改变细胞密度的颗粒、用抗体包被的磁珠进行磁分离、亲和色谱法；与单克隆抗体(mAb)连接或与其结合使用的细胞毒剂(包括但不限于，补体和细胞毒素)、和与附着于固体基质(例如，板或芯片)的抗体一起淘选、淘析、流式细胞术、或任何其他方便的技术(参见，例如，Recktenwald等人,

在本文披露的治疗方法中，免疫细胞或其前体细胞对于其所施用的受试者来说可以是自体的或非自体的。从将要施用重组表达CD30 CAR的工程化细胞的受试者中分离出自体细胞。任选地，可以通过白细胞去除术获得细胞，其中将白细胞从抽取的血液中选择性除去，进行重组，并且然后重新输注到供体中。可替代地，可以使用来自非自体供体的同种异体细胞，该供体不是受试者。在非自体供体的情况下，将细胞分型并与人白细胞抗原(HLA)匹配以确定合适的相容性水平(如本领域熟知的)。对于自体和非自体细胞两者，可以使用本领域熟知的方法任选地将这些细胞冷冻保存直至准备用于遗传操作和/或施用于受试者。

先前已经描述了分离可以用于CAR重组表达的免疫细胞的各种方法，并且可以使用，包括但不限于，使用外周供体淋巴细胞(Sadelain等人,Nat.Rev.Cancer 3:35-45(2003)；Morgan等人,Science 314:126-129(2006)，使用肿瘤活检中源自肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的淋巴细胞培养物(Panelli等人,J.Immunol.164:495-504(2000)；Panelli等人,JImmunol.164:4382-4392(2000))，以及使用采用人工抗原呈递细胞(AAPC)或树突状细胞的选择性地体外扩增的抗原特异性外周血白细胞(Dupont等人,Cancer Res.65:5417-5427(2005)；Papanicolaou等人,Blood 102:2498-2505(2003))。在使用干细胞的情况下，可以通过本领域熟知的方法来分离细胞(参见，例如，Klug等人,Hematopoietic Stem CellProtocols,Humana Press,New Jersey(2002)；Freshney等人,Culture of Human StemCells,John Wiley&Sons(2007))。

本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)可以进一步重组表达一种或多种另外的因子(例如，多核苷酸或多肽)，这些因子可以增强表达CAR的细胞的存活、增殖或功能性(例如抗癌活性)。在一些实施例中，将另外的因子缀合至CD30 CAR。在一些实施例中，将分离的免疫细胞和前体细胞离体基因工程化以重组表达CAR。可以通过本领域熟知的方法来对细胞进行基因工程化以重组表达。

在某些实施例中，将另外的因子缀合至CAR的C-末端。在一些实施例中，将该因子缀合至CAR的N-末端。在一些实施例中，将该CAR直接缀合至该因子。在一些实施例中，将该CAR经由接头缀合至该因子。适用于连接两个多肽的本领域已知的任何接头都可以用于连接CAR和不同的因子。在一些实施例中，接头是可切割的接头。在一些实施例中，可切割的接头是自切割的肽。

在一些实施例中，接头是“2A”肽。2A肽是约18-22个氨基酸长的病毒寡肽，这些病毒寡肽在真核细胞的翻译过程中介导多肽的切割。名称“2A”是指病毒基因组的特定区域，并且通常以产生其的病毒来命名不同的病毒2A。在一些实施例中，将该CAR经由2A接头缀合至另外的因子。在一些实施例中，2A接头选自由以下组成的组：2A猪捷申病毒-1(porcineteschovirus-1)(P2A)、明脉扁刺蛾β四体病毒2A(thosea asigna virus)(T2A)、马鼻炎A病毒2A(equine rhinitis A virus 2A)(E2A)、口蹄疫病毒(F2A)、质型多角体病毒(BmCPV2A)。在一些实施例中，将该CAR经由P2A接头缀合至另外的因子。在一些实施例中，将该CAR经由T2A接头缀合至另外的因子。在一些实施例中，将该CAR经由E2A接头缀合至另外的因子。在一些实施例中，将该CAR经由F2A接头缀合至另外的因子。在一些实施例中，该接头包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列或由其组成。

在一些实施例中，另外的因子可以促进表达CAR的细胞向肿瘤位点的运输和浸润。在一些实施例中，另外的因子可以促进表达CAR的细胞的增殖。在一些实施例中，另外的因子可以促进表达CAR的细胞的细胞毒性。在一些实施例中，另外的因子可以促进表达CAR的细胞的细胞因子产生。在一些实施例中，另外的因子可以释放由抑制分子(即，免疫抑制分子)诱导的免疫抑制作用。作为非限制性实例，在一些实施例中，免疫抑制分子是PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIM-3、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)、LAG-3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4或TGFRβ。在一些实施例中，另外的因子可以具有一个或多个上述功能。

在某些实施例中，表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含一个另外的因子。在某些实施例中，表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含两个另外的因子。在某些实施例中，表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含三个另外的因子。在某些实施例中，表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含四个或更多个另外的因子。在某些实施例中，表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含选自由以下组成的组的至少一个另外的因子：C-C趋化因子受体4型(CCR4)、显性负性转化生长因子β受体II(dnTGFβRII)、开关型嵌合程序性死亡1受体(PD1CD28)及其任何组合。

在一些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含CCR4。趋化因子受体CCR4(也称为CD194)是七种跨膜G蛋白偶联的细胞表面受体分子(在造血系统的细胞上选择性表达)。在一些实施例中，趋化因子受体基因(如CCR4)在CART细胞中的掺入和表达可促进其运输和浸润入肿瘤位点，并且促进有效的T细胞介导的肿瘤细胞杀伤。在一些实施例中，CCR4的表达可以改善表达CAR的细胞的效应子功能。在某些实施例中，CCR4表达改善了T细胞对CD30+肿瘤细胞的细胞毒性。

在一些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步表达CCR4。在一些实施例中，将本文披露的CAR缀合至CCR4。在一些实施例中，将CCR4缀合至本文披露的CAR的N-末端，指定为“4C-[CAR]”。在一些实施例中，将CCR4缀合至本文披露的CAR的C-末端，指定为“[CAR]-4C”(图11，右上)。在一些实施例中，CCR4具有包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列。CAR可以是本文披露的任何CAR。在一些构建体中，CCR4分子和CAR经由P2A(SEQ ID NO:66)连接。

例如，本文提供了指定为AS48542VH5bbz-4C的CD30 CAR缀合物(SEQ ID NO:198)，其包含指定为AS48542VH5bbz的CAR和CCR4(从N-末端至C-末端)。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:198具有至少80％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQID NO:198具有至少85％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:198具有至少90％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:198具有至少95％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQID NO:198具有至少97％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:198具有至少99％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有包含SEQ ID NO:198的氨基酸序列的CD30 CAR缀合物。在一些实施例中，本文提供了编码包含本文所述的CD30 CAR缀合物的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，本文提供了编码包含具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物的多肽的多核苷酸，该氨基酸序列与SEQ ID NO:198具有至少80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。在一些实施例中，本文提供了编码包含SEQ ID NO:198的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。

在一些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含可以拮抗转化生长因子β(TGFβ)的活性的因子。TGFβ是具有多效功能(包括细胞生长的调节、分化和免疫调节)的细胞因子。作为免疫系统的有效抑制剂，其是由许多人肿瘤(作为免疫逃避策略的一部分)分泌的。TGFβ显著抑制肿瘤特异性细胞免疫，抑制肿瘤微环境中的细胞毒性淋巴细胞的活性。从TGFβ介导的免疫抑制中释放可以恢复抗肿瘤免疫力。在一些实施例中，显性负性TGFβRII(dnTGFβRII)的表达可以阻断T细胞中的TGFβ信号传导，从而增加其浸润、增殖和介导抗肿瘤应答的能力。在某些实施例中，dnTGFβRII的表达可以增强一种或多种细胞因子(例如，IL-4、IL-5、IL-13、IL-2、IFN-γ、MIP1-α、MIP1-β、GM-CSF和/或RANTES)的产生和/或分泌。在某些实施例中，dnTGFβRII的表达可以增强IFN-γ和GM-CSF的产生和/或分泌。在一些实施例中，dnTGFβRII的表达可以增强本文披露的表达CAR的细胞的浸润和/或增殖。

在一些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含dnTGFβRII。在一些实施例中，显性负性TGFβRII的表达可以通过，例如，对Smad2磷酸化的抑制来阻断T细胞中TGFβ信号转导。在一些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步表达dnTGFβRII。在一些实施例中，将本文披露的CAR缀合至dnTGFβRII。在一些实施例中，将dnTGFβRII缀合至本文披露的CAR的N-末端，指定为“TR2D-[CAR]”。在一些实施例中，将dnTGFβRII缀合至本文披露的CAR的C-末端，指定为“[CAR]-TR2D”。在一些实施例中，dnTGFβRII具有包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列。CAR可以是本文披露的任何CAR。

例如，本文提供了指定为TR2D-AS48542VH5bbz的CD30 CAR缀合物(SEQ ID NO:196)，其包含dnTGFβRII和指定为AS48542VH5bbz的CAR(从N末端至C-末端)。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:196具有至少80％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:196具有至少85％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:196具有至少90％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:196具有至少95％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:196具有至少97％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:196具有至少99％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有包含SEQ ID NO:196的氨基酸序列的CD30 CAR缀合物。在一些实施例中，本文提供了编码包含本文所述的CD30 CAR缀合物的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，本文提供了编码包含具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物的多肽的多核苷酸，该氨基酸序列与SEQ ID NO:196具有至少80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。在一些实施例中，本文提供了编码包含SEQ ID NO:196的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。本披露还提供了指定为TR2D-AS47863VH4bbz的CD30 CAR缀合物(SEQ ID NO:206)，其包含dnTGFβRII和指定为AS47863VH4bbz的CAR(从N末端至C-末端)。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:206具有至少80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有SEQ ID NO:206的氨基酸序列的CD30 CAR缀合物。本披露提供了指定为TR2D-AS48542VH5dil-bbz的CD30 CAR缀合物(SEQ ID NO:205)，其包含dnTGFβRII和指定为AS48542VH5dil-bbz的CAR(从N末端至C-末端)。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:205具有至少80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有SEQ IDNO:205的氨基酸序列的CD30CAR缀合物。本披露还提供了指定为TR2D-AS47863VH4dil-bbz的CD30 CAR缀合物(SEQ ID NO:207)，其包含dnTGFβRII和指定为AS47863VH4dil-bbz的CAR(从N末端至C-末端)。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:207具有至少80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有SEQ ID NO:207的氨基酸序列的CD30 CAR缀合物。本披露提供了指定为TR2D-AS48542VH5-28z的CD30 CAR缀合物(SEQ ID NO:212)，其包含dnTGFβRII和指定为AS48542VH5-28z的CAR(从N末端至C-末端)。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:212具有至少80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有SEQ ID NO:212的氨基酸序列的CD30CAR缀合物。本披露提供了指定为TR2D-AS47863VH4-28z的CD30 CAR缀合物(SEQ ID NO:214)，其包含dnTGFβRII和指定为AS47863VH4-28z的CAR(从N末端至C-末端)。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:214具有至少80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有SEQ IDNO:214的氨基酸序列的CD30 CAR缀合物。本披露还提供了指定为TR2D-AS48542VH5dil-28z的CD30 CAR缀合物(SEQ ID NO:213)，其包含dnTGFβRII和指定为AS48542VH5dil-28z的CAR(从N末端至C-末端)。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:213具有至少80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有SEQ ID NO:213的氨基酸序列的CD30CAR缀合物。本披露还提供了指定为TR2D-AS47863VH4dil-28z的CD30 CAR缀合物(SEQ ID NO:215)，其包含dnTGFβRII和指定为AS47863VH4dil-28z的CAR(从N末端至C-末端)。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:215具有至少80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有SEQ ID NO:215的氨基酸序列的CD30 CAR缀合物。

在一些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含作为PD-1信号传导的抑制剂的因子。PD-1(也称为CD279)是细胞表面受体(属于免疫球蛋白超家族)并且在活化的T细胞、NK细胞、B细胞、巨噬细胞和DC的几个子集的细胞表面表达。在抗原和配体受体接合后，通过其目前已知的配体，PD-L1(也称为B7-H1或CD274)和PD-L2(也称为B7-DC或CD273)来上调其的表达。在一些实施例中，对PD-1信号传导的抑制增强了表达CAR的细胞的抗肿瘤活性。

PD1CD28是含有与共刺激分子CD28的跨膜和胞内结构域融合的PD-1的胞外结构域的开关型嵌合受体。PD1CD28开关型受体可以经由至少两种机制来拮抗PD-1的免疫抑制活性。首先，当此开关型受体的PD-1部分与其配体(例如，PD-L1)接合时，除了传递抑制信号之外，它可以经由CD28胞内结构域来传递激活信号。其次，受体可以作为显性负性受体(与肿瘤和骨髓细胞上存在的PD-L1接合)起作用，以将其与完整的抑制性PD-1隔离，从而减少抑制性信号传导。在某些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞中PD1CD28的表达具有增加的细胞因子(例如，IFNγ和IL2)的产生和/或分泌。在某些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞中PD1CD28的表达可以增强表达CAR的细胞的抗肿瘤活性。在某些实施例中，本文披露的CAR T细胞中PD1CD28的表达可以增强CAR T细胞的细胞毒性活性。

在一些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含PD1CD28。在一些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步表达PD1CD28。在一些实施例中，将本文披露的CAR缀合至PD1CD28。在一些实施例中，将PD1CD28缀合至本文披露的CAR的N-末端，指定为“PD1CD28-[CAR]”。在一些实施例中，将PD1CD28缀合至本文披露的CAR的C-末端，指定为“[CAR]-PD1CD28”。在一些实施例中，PD1CD28具有包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列。CAR可以是本文披露的任何CAR。

例如，本文提供了指定为PD1CD28-AS48542VH5bil-bbz的CD30 CAR缀合物(SEQ IDNO:197)，其包含PD1CD28和指定为AS48542VH5bbz的CAR(从N-末端至C-末端)。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:197具有至少80％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:197具有至少85％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:197具有至少90％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:197具有至少95％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:197具有至少97％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:197具有至少99％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有包含SEQ ID NO:197的氨基酸序列的CD30 CAR缀合物。在一些实施例中，本文提供了编码包含本文所述的CD30 CAR缀合物的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，本文提供了编码包含具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物的多肽的多核苷酸，该氨基酸序列与SEQ ID NO:197具有至少80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。在一些实施例中，本文提供了编码包含SEQ ID NO:197的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。

在一些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含CCR4和dnTGFβRII。在一些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含CCR4和PD1CD28。在一些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含dnTGFβRII和PD1CD28。在一些实施例中，本文披露的表达CAR的细胞(例如CAR T)进一步包含CCR4、dnTGFβRII和PD1CD28。CAR可以是本文披露的任何CAR。

在一些实施例中，将本文披露的CAR缀合至CCR4和dnTGFβRII。在一些实施例中，本文提供的缀合物包含CAR、CCR4和dnTGFβRII(从N-末端到C-末端)，指定为“[CAR]-4C-TR2D”。在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR缀合物包含CAR、dnTGFβRII和CCR4(从N-末端到C-末端)，指定为“[CAR]-TR2D-4C”。在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR缀合物包含dnTGFβRII、CAR和CCR4(从N-末端到C-末端)，指定为“TR2D-[CAR]-4C”。在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR缀合物包含CCR4、CAR和dnTGFβRII(从N-末端到C-末端)，指定为“4C-[CAR]-TR2D”。在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR缀合物包含dnTGFβRII、CCR4和CAR(从N-末端到C-末端)，指定为“TR2D-4C-[CAR]”。在一些实施例中，本文提供的CD30 CAR缀合物包含CCR4、dnTGFβRII和CAR(从N-末端到C-末端)，指定为“4C-TR2D-[CAR]”。CAR可以是本文披露的任何CAR。

例如，本文提供了指定为TR2D-AS48542VH5bbz-4C的CD30 CAR缀合物(SEQ ID NO:195)。TR2D-AS48542VH5bbz-4C包含dnTGFβRII、指定为AS48542VH5bbz的CAR和CCR4(从N-末端到C-末端)。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:195具有至少80％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:195具有至少85％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:195具有至少90％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:195具有至少95％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:195具有至少97％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物，该氨基酸序列与SEQ ID NO:195具有至少99％同一性。在一些实施例中，本文提供了具有包含SEQ ID NO:195的氨基酸序列的CD30CAR缀合物。在一些实施例中，本文提供了编码包含本文所述的CD30 CAR缀合物的多肽的多核苷酸。在一些实施例中，本文提供了编码包含具有氨基酸序列的CD30 CAR缀合物的多肽的多核苷酸，该氨基酸序列与SEQ ID NO:195具有至少80％、85％、90％、95％、97％或99％同一性。在一些实施例中，本文提供了编码包含SEQ ID NO:195的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。

可以使免疫细胞或其前体细胞经受有利于免疫细胞或其前体细胞的维持或扩增的条件(参见Kearse,

对于产生重组表达本文披露的CD30 CAR和任选地具有至少一种另外的因子的细胞，使用合适的表达载体来将编码CD30 CAR和任选地至少一种另外的因子的一种或多种核酸引入免疫细胞或其前体细胞中。优选地将免疫细胞(例如，T细胞)或其前体细胞用编码CD30 CAR和任选地另外的因子的一种或多种核酸转导。在表达CAR和另外的因子两者的情况下，根据需要，可以将CAR和另外的因子的编码核酸置于分开的载体上或同一载体上。例如，可以将编码CD30 CAR或另外的因子的多核苷酸克隆进合适的载体(如逆转录病毒载体)中，并且使用熟知的分子生物学技术来将其引入免疫细胞(参见Ausubel等人,

在一个实施例中，载体是用于将CD30 CAR和任选的另外的因子引入免疫细胞或其前体细胞的逆转录病毒载体，例如，γ逆转录病毒或慢病毒载体。为了遗传修饰细胞以表达CD30 CAR和任选地另外的因子，通常使用逆转录病毒载体来转导。然而，应当理解，可以使用任何合适的病毒载体或非病毒递送系统。逆转录病毒载体和合适的包装系的组合也是合适的，其中衣壳蛋白将具有感染人细胞的功能。已知多种产生两性病毒的细胞系，包括但不限于PA12(Miller等人,Mol.Cell.Biol.5:431-437(1985))；PA317(Miller等人,Mol.Cell.Biol.6:2895-2902(1986))；和CRIP(Danos等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:6460-6464(1988))。非两亲性颗粒也是合适的，例如VSVG、RDl 14或GALV包膜的和本领域中任何其他已知的假型颗粒(Relander等人,Mol.Therap.11:452-459(2005))。可能的转导方法还包括将细胞与生产细胞直接共培养(例如，Bregni等人,Blood80:1418-1422(1992))，或与单独的病毒上清液或具有或不具有适当生长因子和聚阳离子的浓缩载体原种一起培养(参见，例如，Xu等人,Exp.Hemat.22:223-230(1994)；Hughes,等人J.Clin.Invest.:1817-1824(1992))。

通常，选择的载体表现出高的感染效率和稳定的整合和表达(参见，例如，Cayouette等人,Human Gene Therapy 8:423-430(1997)；Kido等人,Current EyeResearch 15:833-844(1996)；Bloomer等人,J.Virol.71:6641-6649(1997)；Naldini等人,Science 272:263 267(1996)；和Miyoshi等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94:10319-10323(1997))。可以使用的其他病毒载体包括，例如，腺病毒、慢病毒、和腺相关的病毒载体、牛痘病毒、源自牛乳头瘤病毒的载体或疱疹病毒，如艾伯斯坦-巴尔病毒(参见，例如，Miller,Hum.Gene Ther.1(1):5-14(1990)；Friedman,Science 244:1275-1281(1989)；Eglitis等人,BioTechniques 6:608-614(1988)；Tolstoshev等人,CurrentOpin.Biotechnol.1:55-61(1990)；Sharp,Lancet 337:1277-1278(1991)；Cornetta等人,Prog.Nucleic Acid Res.Mol.Biol.36:311-322(1989)；Anderson,Science 226:401-409(1984)；Moen,Blood Cells 17:407-416(1991)；Miller等人,Biotechnology 7:980-990(1989)；Le Gal La Salle等人,Science 259:988-990(1993)；和Johnson,Chest 107:77S-83S(1995))。逆转录病毒载体尤其得到了很好开发，并且已用于临床环境中(Rosenberg等人,N.Engl.J.Med.323:370(1990)；Anderson等人,美国专利号5,399,346)。

用于表达CD30 CAR的特别有用的载体和任选的如本文所述的另外的因子包括已用于人基因疗法的载体。在一个非限制性的实施例中，载体是逆转录病毒载体。已经描述了逆转录病毒载体在T细胞或其他免疫细胞(包括工程化的CAR T细胞)中表达的用途(参见Scholler等人,Sci.Transl.Med.4:132-153(2012)；Parente-Pereira等人,J.Biol.Methods l(2):e7(1-9)(2014)；Lamers等人,Blood 117(l):72-82(2011)；Reviere等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92:6733-6737(1995))。在一个实施例中，载体是SGF逆转录病毒载体，如SGFγ-逆转录病毒载体，其是基于Moloney鼠白血病的逆转录病毒载体。先前已描述了SGF载体(参见，例如，Wang等人,Gene Therapy 15:1454-1459(2008))。

本文所述的载体包括用于在特定宿主细胞中表达的合适的启动子。启动子可以是诱导型启动子或组成型启动子。在特定的实施例中，表达载体的启动子在免疫细胞如T细胞或其前体细胞中提供表达。也可以使用非病毒载体，只要该载体含有用于在免疫细胞或其前体细胞中表达的合适的表达元件。一些载体，如逆转录病毒载体，可以整合到宿主基因组中。如果需要，可以使用核酸酶、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)、锌指核酸酶(ZFN)和/或成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)等技术，通过同源重组等来进行靶向整合(Gersbach等人,Nucl.Acids Res.39:7868-7878(2011)；Vasileva,等人Cell DeathDis.6:el831.(2015年7月23日)；Sontheimer,Hum.Gene Ther.26(7):413-424(2015))。

任选地可以将载体和构建体设计成包括报道子。例如，可以将载体设计成表达报道蛋白，该蛋白可以用于鉴定包含载体或载体上提供的核酸(如已经整合到宿主染色体中的核酸)的细胞。在一个实施例中，可以将报道子表达为具有CD30 CAR和至少一种另外的因子的双顺反子或多顺反子表达构建体。示例性的报道蛋白包括，但不限于，荧光蛋白如mCherry、绿色荧光蛋白(GFP)、蓝色荧光蛋白(例如EBFP、EBFP2、Azurite和mKalamal)、青色荧光蛋白(例如，ECFP、Cerulean和CyPet)和黄色荧光蛋白(例如，YFP、Citrine、Venus和YPet)。在另外的实施例中，载体构建体可以包含P2A序列，该序列提供了报道分子的任选共表达。P2A是自切割肽序列，其可用于蛋白质序列的双顺反子或多顺反子表达(参见，Szymczak等人,Expert Opin.Biol.Therapy 5(5):627-638(2005))。

可以使用常规的分子生物学技术来将测定用于确定CD30 CAR和任选地另外的因子的转导效率。如果构建体中已包括标记(如荧光蛋白)，则可以通过FACS分析(以量化转导的(例如，GFP+)免疫细胞(如T细胞或其前体细胞)的级分)和/或通过定量PCR来监测基因转移效率。使用已经确立的共培养系统(Gade等人,Cancer Res.65:9080-9088(2005)；Gong等人,Neoplasia 1:123-127(1999)；Latouche等人,Nat.Biotechnol.18:405-409(2000))，可以确定表达癌抗原的成纤维AAPC(相对于对照)是否指导来自表达CAR的转导免疫细胞(如T细胞)的细胞因子释放(用于IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-a和GM-CSF的细胞上清液LUMINEX(Austin TX)测定)、T细胞增殖(通过羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记)和T细胞存活(通过Annexin V染色)。可以评估CD80和/或4-1BBL对T细胞存活、增殖和功效的影响。可以将T细胞暴露于癌抗原阳性靶细胞的重复刺激，并且可以确定T细胞增殖和细胞因子应答是否保持相似水平或随着重复刺激而减少。可以在等效的测定条件下并排比较CD30CAR构建体。可以使用铬释放测定来进行多种E:T比的细胞毒性测定。

除了在用于在免疫细胞或其前体细胞中表达的载体中提供编码CD30 CAR的核酸和任选地另外的因子外，还在更适用于遗传操作(如用于在细菌细胞(如大肠杆菌)中表达各种构建体)的其他类型的载体中提供了编码多肽的核酸。此类载体可以是任何已知的表达载体，包括可商购的表达载体(参见Sambrook等人,

如果需要，可以对编码用于基因工程化本发明的细胞的多肽(如CD30 CAR)和任选地另外的因子的核酸进行密码子优化，以增加在免疫细胞或其前体细胞中的表达效率。可以将密码子优化用于在给定细胞中实现更高水平的表达。涉及蛋白质表达的不同阶段的因子包括密码子适应性、mRNA结构以及转录和翻译中的各种顺式元件。可以将本领域技术人员已知的任何合适的密码子优化方法或技术用于修饰编码多肽的多核苷酸。此类密码子优化方法是熟知的，包括可商购的密码子优化服务，例如，OptimumGene

可以将其他的修饰引入本发明的免疫细胞或其前体细胞。例如，可以修饰细胞以解决免疫并发症和/或通过CD30 CAR靶向表达与肿瘤细胞相同的靶抗原的健康组织。例如，在需要时，可以将自杀基因引入细胞中，以耗尽细胞。合适的自杀基因包括，但不限于，单纯疱疹病毒胸苷激酶(hsv-tk)、诱导型半胱天冬酶9自杀基因(iCasp-9)和截短的人表皮生长因子受体(EGFRt)多肽。将药剂施用给已经施用了含有自杀基因的细胞的受试者，这些药剂包括但不限于，用于hsv-tk的更昔洛韦(GCV)(Greco等人，Frontiers Pharmacol.6:95(2015)；Barese等人,Mol.Therapy 20:1932-1943(2012))、用于iCasp-9的AP1903(DiStasi等人,N.Engl.J.Med.365:1673-1683(2011))和用于EGFRt的西妥昔单抗(美国专利号8,802,374)，以促进细胞死亡。在一个实施例中，施用设计为激活自杀基因的前药(例如，可以激活iCasp-9的前药(如API 903)触发自杀基因激活的细胞中的细胞凋亡。在一个实施例中，iCasp9由具有F36V突变的人FK506-结合蛋白(FKBP12；GenBank号，AH002818(AH002818.1，M92422.1，GL 182645；AH002818.2，GI：1036032368))的序列组成，该序列通过Ser-Gly-Gly-Gly-Ser接头(SEQ ID NO:204)与编码人半胱天冬酶9(CASP9；GenBank号，NM001229(NM_001229.4，GL493798577))的基因连接，该iCasp9已删除其内源性半胱天冬酶激活和募集结构域。FKBP12-F36V与另外的生物惰性小分子二聚剂AP1903以高亲和力结合。在AP1903存在下，iCasp9前分子二聚化并且激活固有的凋亡途径，导致细胞死亡(Di Stasi等人,N.Engl.J.Med.365:1673-1683(2011))。在另一个实施例中，自杀基因是EGFRt多肽。EGFRt多肽可以通过施用抗EGFR单克隆抗体(例如西妥昔单抗)来消除细胞。自杀基因可以在单独的载体上表达，或任选地在编码CD30 CAR和任选地另外的因子的载体内表达，并且可以是与编码CD30 CAR和任选地另外的因子的核酸连接的双顺反子或多顺反子构建体。

5.组合物

本披露还提供了包含本文披露的表达CAR的细胞的药物组合物。该药物组合物包含有效量的本文披露的表达CAR的细胞和药学上可接受的载剂。表达CAR的细胞可以是工程化的免疫细胞。在一些实施例中，工程化的免疫细胞是选自由以下组成的组的T细胞：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、γδT细胞和NKT细胞。在一些实施例中，药物组合物包含治疗有效的本文披露的CAR T细胞群，和药学上可接受的载剂。本文披露的表达CAR的细胞和包含这些细胞的组合物可以方便地以无菌液体制剂(例如，典型地具有细胞悬浮液的等渗水溶液)或任选地作为乳剂、分散剂等(典型地被缓冲至选定的pH值)的形式提供。组合物可以包含适用于细胞的完整性和活力以及细胞组合物的施用的载剂，例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水等。

可以通过将本文披露的表达CAR的细胞与各种量的其他成分(根据需要)掺入适量的适当溶剂中来制备无菌注射溶液。此类组合物可以包括药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂，如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等，其适用于与细胞组合物一起使用和施用至受试者，如人。用于提供细胞组合物的合适缓冲液是本领域熟知的。使用的任何媒介物、稀释剂或添加剂均与保留本发明的细胞的完整性和活力相容。

组合物将通常是等渗的，即，其具有与血液和泪液相同的渗透压。本发明的细胞组合物的理想等渗性可以使用氯化钠或其他药学上可接受的药剂如右旋糖、硼酸、酒石酸钠或其他无机或有机溶质来实现。对于含有钠离子的缓冲液，特别优选的是氯化钠。一种特别有用的缓冲液是盐水，例如生理盐水。本领域技术人员将认识到，所选择的组合物的组分应该是具有化学惰性的，并且将不影响本发明的细胞的活力或功效，并且对于施用于受试者，如人将是相容的。技术人员可以容易地确定在本发明的方法中要施用的组合物中的细胞和任选的添加剂、媒介物和/或载剂的量。

在某些实施例中，本发明的药物组合物包含与一种或多种药学上可接受的载剂组合的本文披露的表达CAR的细胞群。药学上可接受的载剂可以是本领域已知的任何可接受的载剂、稀释剂和/或赋形剂。在一些实施例中，本文披露的药物组合物可以包含缓冲液，如中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水等；碳水化合物，例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露醇；蛋白质；多肽或氨基酸，例如甘氨酸；抗氧化剂；螯合剂，如EDTA或谷胱甘肽；佐剂(例如氢氧化铝)；和防腐剂。

本文披露的表达CAR的细胞可以在任何生理学上可接受的媒介物中施用。本文描述了合适的施用剂量。包含本文披露的表达CAR的细胞的细胞群可以包含纯化的细胞群。如本文所述的，本领域技术人员可以使用各种熟知的方法容易地确定细胞群中细胞的百分比。包含本文披露的表达CAR的细胞的细胞群中的纯度范围可以是约50％至约55％、约55％至约60％、约65％至约70％、约70％至约75％、约75％至约80％、约80％至约85％；约85％至约90％、约90％至约95％、或约95％至约100％。本领域技术人员可以容易地调节剂量；例如，纯度降低可能需要增加剂量。

本披露还提供了用于制备本发明的细胞的试剂盒。在一个实施例中，该试剂盒包含用于产生表达本文披露的CD30 CAR的基因工程化免疫细胞，如T细胞或其前体细胞的一种或多种载体。这些试剂盒可以用于从源自受试者的自体细胞或非自体细胞(将施用于相容的受试者)产生基因工程化免疫细胞。在另一个实施例中，这些试剂盒可以包含用于施用于受试者的本文披露的表达CAR的细胞，例如自体或非自体细胞。在特别的实施例中，试剂盒在一个或多个容器中包含本文披露的表达CAR的细胞。

在一些实施例中，本文提供了包含本文披露的表达CAR的细胞中的至少两种的细胞群。在一些实施例中，细胞群是同质细胞群。在一些实施例中，细胞群是异质细胞群。在一些实施例中，细胞群包含表达不同CAR(例如，本文披露的一种或多种CAR，以及任选地本文未披露的一种或多种CAR)的细胞的混合物。作为实例，在一些实施例中，细胞群包含表达如本文披露的CD30 CAR的第一种细胞和表达特异性结合除CD30以外的抗原的CAR的第二种细胞。在一个实施例中，细胞群包含表达特异性结合第一CD30表位的CAR的第一种细胞和表达特异性结合第二CD30表位的CAR的第二种细胞。第二CD30表位可以与第一CD30表位不同。在一些实施例中，细胞群包含表达具有本文所述的CD30-结合部分的CAR的第一种细胞和表达具有本文所述的第二CD30-结合部分的CAR的第二种细胞。第二CD30-结合部分可以与第一CD30-结合部分不同。

在一些实施例中，细胞群包含本文所述的本文披露的表达CAR的细胞的同质群。细胞群可以包括10万-5亿个细胞。在一些实施例中，细胞群包含本文所述的20万个细胞的同质群。在一些实施例中，细胞群包含本文所述的50万个细胞的同质群。在一些实施例中，细胞群包含本文所述的100万个细胞的同质群。在一些实施例中，细胞群包含本文所述的200万个细胞的同质群。在一些实施例中，细胞群包含500万个本文所述的细胞的同质群。在一些实施例中，细胞群包含1000万个本文所述的细胞的同质群。在一些实施例中，细胞群包含2000万个本文所述的细胞的同质群。在一些实施例中，细胞群包含5000万个本文所述的细胞的同质群。在一些实施例中，细胞群包含1亿个本文所述的细胞的同质群。在一些实施例中，细胞群包含2亿个本文所述的细胞的同质群。在一些实施例中，细胞群包含3亿个本文所述的细胞的同质群。在一些实施例中，细胞群包含5亿个本文所述的细胞的同质群。

6.方法和用途

本披露还提供了CD30-结合部分、CD30 CAR、编码此类CD30-结合部分和CD30 CAR的多核苷酸、包含此类多核苷酸的重组表达载体、表达CD30 CAR的细胞或具有本文披露的此类细胞的药物组合物在治疗表达CD30的癌症或肿瘤中的用途的方法。不受理论束缚，本文披露的表达CD30 CAR的细胞可在体内特异性靶向表达CD30的癌细胞，从而递送其消除、裂解和/或杀伤癌细胞的治疗作用。在一个实施例中，这些方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文披露的表达CD30 CAR的免疫细胞或前体细胞。在一个实施例中，这些方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文披露的CD30 CAR T细胞。表达CD30 CAR的细胞应以足够的量施用，以在合理的时间范围内在受试者或动物中产生治疗或预防性应答。

在一些实施例中，本文提供了在有需要的受试者中治疗表达CD30的肿瘤或癌症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本文披露的表达CD30 CAR的细胞或药物组合物。可以被治疗的表达CD30的癌症或肿瘤包括非实体瘤(如血液学肿瘤，例如白血病和淋巴瘤)和实体瘤。在一些实施例中，表达CD30的癌症或肿瘤可以是淋巴瘤。淋巴瘤可以是B细胞淋巴瘤或T细胞淋巴瘤。该B细胞淋巴瘤可以是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBL)、霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、纵隔灰区淋巴瘤、或结节硬化型HL。该T-细胞淋巴瘤可以是间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、外周T细胞淋巴瘤非特指型(PTCL-NOS)、或血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)。

在一些实施例中，本文提供了在有需要的受试者中治疗淋巴瘤的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本文披露的表达CD30 CAR的细胞或药物组合物。在一些实施例中，该淋巴瘤是B细胞淋巴瘤。在一些实施例中，该淋巴瘤是DLBCL。在一些实施例中，该淋巴瘤是PMBL。在一些实施例中，该淋巴瘤是HL。在一些实施例中，该淋巴瘤是NHL。在一些实施例中，该淋巴瘤是纵隔灰区淋巴瘤。在一些实施例中，该淋巴瘤是结节硬化型HL。在一些实施例中，该淋巴瘤是结外NK-T细胞淋巴瘤。在一些实施例中，该淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤。在一些实施例中，该淋巴瘤是EBV-阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤。在一些实施例中，该淋巴瘤是T细胞淋巴瘤。在一些实施例中，该淋巴瘤是ALCL。在一些实施例中，该淋巴瘤是PTCL。在一些实施例中，该淋巴瘤是PTCL-NOS。在一些实施例中，该淋巴瘤是CTCL。例如，在一些实施例中，本文提供了在有需要的受试者中治疗HL的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本文披露的表达CD30 CAR的细胞或药物组合物。在特定的实施例中，表达CD30 CAR的细胞是CAR T细胞。

晚期系统性肥大细胞病中的肿瘤肥大细胞已经显示表达CD30。在一些实施例中，本文提供了在有需要的受试者中治疗表达CD30的实体癌或瘤的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本文披露的表达CD30 CAR的细胞或药物组合物。在一些实施例中，表达CD30的癌症或肿瘤是生殖细胞瘤。在一些实施例中，表达CD30的癌症或肿瘤是胚胎癌(EC)。在一些实施例中，表达CD30的癌症或肿瘤是睾丸胚胎癌。在一些实施例中，表达CD30的癌症或肿瘤是睾丸生殖细胞瘤(TGCT)。

在一些实施例中，本文披露的方法可以增加患有表达CD30的癌症的受试者的外周血中的TNFα和/或IL12p70水平。在一些实施例中，本文披露的方法可以减少CD30阳性肿瘤细胞的数量。在一些实施例中，本文披露的方法可导致淋巴结肿块缩小。在一些实施例中，本文披露的方法可导致淋巴结肿块缩小。在一些实施例中，药物组合物可以减少可测量的淋巴结和/或结外负荷。在一些实施例中，本文披露的方法可以减少受试者的肿瘤负荷。

监测患者对施用本文披露的药物组合物的应答的方法是本领域已知的并且可以根据本文披露的方法来使用。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来监测患者对施用本文披露的药物组合物的应答。在一些实施例中，本领域已知的方法可用于监测病变的大小和/或淋巴结的大小。

作为非限制性示例，在一些实施例中，对比增强的CT扫描可以检测和/或监视患者中的病变和/或淋巴结。在一些实施例中，施用本文披露的药物组合物可以减小患者中通过CT扫描检测的病变的大小。在一些实施例中，施用本文披露的药物组合物可能引起异常淋巴结的缩小。

在一些实施例中，可以将测定用于检测本文披露的药物组合物(例如，CAR T细胞)在肿瘤细胞和/或淋巴结中的浸润。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来检测特定位点的表达CD30 CAR的细胞和/或细胞群的持久性。作为非限制性实例，可以将免疫组织化学和/或qPCR用于检测特定位点(例如，在肿瘤细胞和/或淋巴结中)处的本发明的细胞和/或细胞群的浸润。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来检测外周血中的CD30CAR转基因的拷贝数。

在一些实施例中，可以纯化或富集将施用的表达CAR的细胞。例如，可以将本文提供的方法用于在受试者中治疗癌症或减轻肿瘤负荷，其中该癌症或肿瘤是表达CD30的癌症或肿瘤。在一个实施例中，将本文提供的方法用于治疗癌症。应当理解，治疗癌症的方法可以包括改善与癌症有关的体征和症状的任何作用。此类体征和症状包括，但不限于，减轻肿瘤负荷，包括抑制肿瘤的生长、减慢肿瘤的生长速度、减小肿瘤的尺寸、减少肿瘤的数量、消除肿瘤，所有这些均可以使用本领域熟知的常规肿瘤成像技术测量。与癌症相关的其他体征和症状包括，但不限于，疲劳、疼痛、体重减轻和与各种癌症有关的其他体征或症状。在一个非限制性实例中，本文提供的方法可以减少肿瘤负荷。因此，本发明的细胞的施用可以减少受试者中的肿瘤细胞的数量、减小肿瘤的尺寸、和/或根除肿瘤。肿瘤可以是实体瘤。本发明的方法还可以向患有癌症的受试者提供增加或延长的存活率。此外，本发明的方法可以在受试者中提供针对癌症的增加的免疫应答。

在本发明的方法中，将免疫细胞或其前体细胞施用给需要癌症治疗的受试者。该受试者可以是哺乳动物。该受试者是人。将包含本发明的细胞的药物组合物施用于受试者以引发抗癌应答，目标是减轻受试者的病症。可以消除受试者中的癌细胞或肿瘤细胞，但是任何临床改善都能带来好处。临床改善包含降低癌症或肿瘤的风险或进展速率或者减少癌症或肿瘤的病理后果。

另一组合适的受试者可以是具有癌症病史的但是已经对另一种治疗方式有应答的受试者。先前的疗法可以包括，但不限于，外科手术切除、放射疗法和传统化学疗法。因此，这些个体没有临床上可测量的肿瘤。然而，他们疑似有在原发肿瘤位点附近的或转移的疾病的进展风险。可以将此组进一步细分为高风险和低风险的个体。基于初始治疗之前或之后观察到的特征来进行细分。这些特征在临床领域中是已知的，并且针对不同类型的癌症来适当的定义。高风险亚组的典型特征是肿瘤侵入邻近组织或者显示淋巴结受累的那些。任选地，可以施用本发明的细胞以预防性地治疗，以防止在怀疑具有癌症易感性(例如，基于家族史和/或基因检测)的受试者中发生癌症。

受试者可以患有疾病的晚期形式，在这种情况下，治疗目标可以包括缓解或逆转疾病进展和/或改善副作用。受试者可以具有已对其进行治疗的病史，在这种情况下，治疗目标可以是减少或延迟复发的风险。此外，可以使用本文披露的细胞或药物组合物来治疗难治性或复发性恶性肿瘤。在一些实施例中，本文提供了在有需要的受试者中治疗HL的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本文披露的表达CD30 CAR的细胞或药物组合物，其中患有HL的受试者对于一线治疗(例如化疗)或自体干细胞移植(ASCT)是难治的或者一线治疗(例如化疗)或自体干细胞移植(ASCT)后复发。

任何表达CD30 CAR的细胞均可在本文披露的方法中使用。如上所述，在一些实施例中，细胞是包括但不限于以下的T细胞：T辅助细胞(CD4+)、细胞毒性T细胞(CD8+)、自然杀伤T细胞、γδT细胞、粘膜相关的不变T细胞(MAIT)和记忆T细胞(包括中枢记忆T细胞、干细胞样记忆T细胞(或干样记忆T细胞)和效应记忆T细胞)，例如TEM细胞和TEMRA(CD45RA+)细胞。在一些实施例中，在本文所述的方法中使用的表达CD30 CAR的细胞是细胞毒性T细胞。在一些实施例中，在本文所述的方法中使用的表达CD30 CAR的细胞是T辅助细胞。在一些实施例中，施用于受试者的表达CD30 CAR的细胞包含细胞毒性T细胞和T辅助细胞，因此在受试者中产生了辅助和细胞毒性T细胞应答。

为了治疗，施用的量是有效产生所需效果的量。有效量或治疗有效量是足以在治疗时提供有利或需要的临床结果的量。可以以单次施用或一系列施用(一个或多个剂量)来提供有效量。可以以丸剂或通过连续灌注来提供有效量。就治疗而言，有效量是足以减轻、改善、稳定、逆转或减慢疾病进展的或以其他方式减少疾病的病理后果的量。有效量可以由医师针对特定受试者来确定。当确定合适的剂量以达到有效量时，典型地要考虑几个因素。这些因素包括受试者的年龄、性别和体重，所治疗的病症，病症的严重程度和所施用的本发明的细胞的形式和有效浓度。

本发明的细胞通常以基于细胞/千克的将被施用细胞的受试者的体重(细胞/kg)的剂量来施用。

通常，细胞剂量的范围是约10

示例性的细胞剂量包括，但不限于，在约10

本文提供的细胞或药物组合物可以通过本领域已知的任何方法施用，包括但不限于胸膜内施用、静脉内施用、皮下施用、结内施用、肿瘤内施用、鞘内施用、胸膜内施用、腹膜内施用、颅内施用给药、和直接施用于胸腺。在一些实施例中，本文提供的细胞或药物组合物可以静脉内施用。在一个实施例中，可以使用熟知的方法将本文提供的细胞局部递送至肿瘤，所述方法包括但不限于，肝或主动脉泵；肢体、肺或肝脏灌注；在门静脉中；通过静脉分流；在肿瘤附近的腔或静脉中等。在另一个实施例中，本文提供的细胞可以全身性施用。在优选的实施例中，在肿瘤部位局部施用细胞。也可以例如通过在肿瘤部位和/或向肿瘤脉管系统中直接注射细胞来瘤内施用细胞。本领域技术人员可以基于癌症的类型和/或要治疗的肿瘤的位置来选择合适的施用方式。可以通过注射或导管引入细胞。在一个实施例中，向需要的受试者胸膜内施用细胞，例如，使用胸膜内导管。任选地，可以在施用细胞之前、期间或之后将扩增剂和/或分化剂施用给受试者，以增加体内的本发明细胞的产生。

本发明的细胞的增殖通常在施用给受试者之前离体完成，并且在施用给受试者之后可能希望本发明的细胞在体内增殖(参见Kaiser等人,Cancer Gene Therapy 22:72-78(2015))。细胞增殖应伴随有细胞存活，以允许细胞扩增和持久性，如T细胞。

本文提供的方法可以进一步包括在用本发明的细胞治疗之前、期间或之后与佐剂疗法组合。因此，本发明的细胞治疗方法可以与其他与本发明细胞的施用相容的标准癌症护理和/或疗法一起使用。

在某些实施例中，将本文披露的表达CD30的细胞或药物组合物多次施用于有需要的受试者。在一些实施例中，受试者在第一次施用后小于约15天接受第二次施用。在一些实施例中，受试者在第一次施用后小于约14、小于约13、小于约12、小于约11、小于约10、小于约9、小于约8、小于约7、小于约6天、小于约5天、小于约4天、小于约3天或小于约2天接受第二次施用。在一个实施例中，将本文披露的表达CD30的细胞或药物组合物每两周、每周、每两周或每月施用于有需要的受试者。

在一些实施例中，在本文所述的方法中使用的表达CD30 CAR的细胞对其所施用的受试者来说是自体的。在一些实施例中，本文披露的方法进一步包括从受试者获得亲本免疫或前体细胞。亲本免疫或前体细胞可以从本领域已知的许多来源获得。在一些实施例中，细胞可以获得自外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤。在一些实施例中，细胞可以通过细胞去除术获得。在一些实施例中，在本文所述的方法中使用的表达CD30 CAR的细胞对其所施用的受试者来说是非自体的。在一些实施例中，本文披露的方法进一步包括HLA匹配，以确定合适的相容性水平。HLA匹配的方法也是本领域熟知的。

在一些实施例中，在本文所述的方法中使用的表达CD30 CAR的细胞是CAR T细胞。在使用本文披露的方法扩增并遗传修饰亲本T细胞以产生CAR T细胞之前，可以使用本领域已知的方法来从受试者获得亲本T细胞。在一些实施例中，可以使用本领域技术人员已知的任何数量的技术(例如，Ficoll分离、单采(apheresis))来从受试者收集的血液中获得T细胞。在一些实施例中，可以通过使用本领域已知的方法(例如，通过梯度离心或通过逆流离心淘析)来裂解红细胞并且消耗单核细胞来从外周血淋巴细胞分离T细胞。在某些实施例中，可以通过本领域已知的阳性或阴性选择技术来进一步分离T细胞的特定亚群。

本文所述的方法涉及产生用于通过设计改善的抗原受体和包括免疫检查点途径的细胞内在抑制来增强免疫细胞功能的过继疗法的靶向癌症的免疫细胞或其前体细胞。在一些实施例中，本文提供的方法可以进一步包括向受试者施用另外的疗法。在一些实施例中，另外的疗法是化学疗法、放射疗法、联合用药疗法(CMT)、自体干细胞移植(ASCT)。任选地，本文提供的施用细胞的方法可以另外包括对宿主的免疫调节，以促进本发明的施用细胞在组合疗法中的有效性。在一些实施例中，另外的疗法包括施用一种免疫调节剂。免疫调节剂的非限制性实例包括免疫刺激剂和检查点免疫阻断剂。

使用具有不同作用机理的药剂的组合疗法可以产生累加或协同作用。组合疗法可以允许每种药剂的剂量比在单一疗法中使用的更低，从而减少本文披露的药剂的毒副作用和/或增加其治疗指数。组合疗法可以降低抗性癌细胞发展的可能性。在一些实施例中，另外的疗法导致本文所述的细胞或药物组合物的治疗指数增加。在一些实施例中，另外的疗法导致本文所述的细胞或药物组合物的毒性和/或副作用降低。

可以在施用本文所述的细胞或药物组合物之前、同时或之后施用另外的疗法。组合施用可以包括以单一药物配制品或使用单独的配制品共同施用，或以任何顺序(但通常在一定的时间段内)连续施用，使得所有活性剂可同时发挥其生物学活性。本领域技术人员可以基于所治疗的受试者的需要，容易地确定用于施用本文所述的细胞和另外的疗法的组合的合适方案，这些方案包括组合疗法中使用的另外的药剂的时间选择和剂量。

应理解，在本文提供的本发明的定义内，还提供了基本上不影响本发明的多个实施例的活性的修饰。因此，以下实例仅仅是用来说明而不是限定本发明的。

实例

除非另外说明，否则以下提供的实例仅用于说明的目的，而不旨在有所限制。因此，本发明决不应解释为限于以下实例，而应解释为涵盖由于本文提供的教导而变得显而易见的任何和所有变型。

实例1动物免疫和文库构建

动物免疫

根据所有当前的动物福利法规，用重组人CD30蛋白质免疫一只骆驼。为了免疫，将抗原用CFA(初次免疫)或IFA(加强免疫)配制为乳剂。在颈部进行肌内双点注射来施用抗原。该动物接受了两次乳剂注射(该乳剂含有100μg来自R&D系统公司的重组人CD30细胞外结构域(ECD)蛋白(登录号P28908，F19-K379，SEQ ID NO:1)(目录号6126-CD)和4次随后的乳剂注射(该乳剂含有50μg人CD30 ECD蛋白)(间隔为一周)。在免疫期间的不同时间点，从该动物收集10ml的血液样品并且制备血清。将常规的IgG(IgG1)和重链抗体(HCAb、IgG2和IgG3)从免疫前的和经免疫的血清中分离出。在基于酶联免疫吸附测定(ELISA)的实验中，用固定化的人CD30 ECD(R&D系统公司)和内部生产的恒河猴CD30 ECD(登录号EHH14336，F19-K379，SEQ ID NO:2)，使用分离的IgG1、IgG2和IgG3来验证抗原特异性体液免疫应答。

第六次免疫的免疫应答较高(图1A和1B)。五天后，从骆驼采集150ml血液样本(终点采血)。从血液中分离出约1×10

噬菌体展示文库构建

使用

估计文库的大小大于10

实例2抗CD30抗体的生产和表征

本文提供的抗CD30抗体包括由分离自合成的人Fab文库的经免疫的骆驼Fab产或人Fab产生的单域抗体(sdAb)。

噬菌体展示

将经免疫的sdAb和合成的人Fab噬菌体文库二者在过滤灭菌后保存在4℃，以备进一步使用。使用基于蛋白质的淘选以及基于细胞的淘选，用上述噬菌体文库来分离结合物。使用两个文库来对基于蛋白质和基于细胞的淘选方法进行至少一轮淘选，直到CD30特异性噬菌体克隆的百分比达到30％。评估每轮的输出噬菌体的总输出克隆的数量、CD30阳性克隆的百分比(通过ELISA)以及CD30特异性克隆的序列多样性。基于这些结果，选择最佳淘选输出进行高通量筛选。

高通量筛选

将选择的输出噬菌体用于感染指数生长的大肠杆菌细胞。提取输出的双链DNA。将sdAb/Fab插入物从噬菌粒载体切割出，并且插入抗体片段表达载体中以进行高通量筛选。使用所得质粒转化指数生长的大肠杆菌细胞，随后将这些细胞接种并在37℃生长过夜。将数千个菌落分别挑出，并且在含有1ml 2YT培养基的96深孔板中生长。添加1.0mM IPTG来诱导抗体片段的表达。

分析上清液中的sdAb/Fab蛋白质与人和恒河猴CD30 ECD蛋白(通过ELISA)以及表达CD30的HH细胞系(皮肤T细胞淋巴瘤(CTL)，美国典型培养物保藏中心

在BIAcore T200仪(通用电气医疗集团(GE Healthcare))上通过表面等离振子共振(SPR)来对这些独特的结合物中的一些进行进一步表征。如下进行实验。将粗sdAb/Fab蛋白通过亲和标签(6×组氨酸标签)捕获到传感芯片上。高浓度(100.0nM)的人CD30(R&D系统公司，目录号6126-CD)流过传感芯片表面，并且允许其与抗体片段结合300s，随后注入运行缓冲液以使复合物解离。基于一条缔合和解离曲线来粗略计算缔合速率(k

与5F11 scFv的结合亲和力(低于100.0pM)相比，这些结合物的结合亲和力不高，其范围为3.0nM至170.0nM(表3)。

表3.骆驼sdAb和人Fab结合物的亲和力排序

表位确定

人CD30的富半胱氨酸结构域(CRD)和侧翼残基，即CRD1(F19-Q68，SEQ ID NO:3)、CRD2(R66-E107，SEQ ID NO:4)、CRD3(E107-S153，SEQ ID NO:5)、CRD4(E150-Q243，SEQ IDNO:6)、CRD5(R241-E282，SEQ ID NO:7)和CRD6(E282-K379，SEQ ID NO:8)作为在C末端具有人IgG1 Fc片段(SEQ ID NO:217)的Fc融合蛋白产生并且用于按照与上述相似的方案(仅使用的分析物是人IgG1 Fc融合的CRD蛋白质)使用SPR进行表位确定。

在所有结合物中，将8种sdAb结合物，即AS47863(SEQ ID NO:9)、AS48433(SEQ IDNO:10)、AS48463(SEQ ID NO:11)、AS48481(SEQ ID NO:12)、AS48508(SEQ ID NO:13)、AS48542(SEQ ID NO:14)、AS53750(SEQ ID NO:17)和AS54233(SEQ ID NO:18)确认为结合CRD6(近膜结合物)，与阳性对照5F11 scFv(SEQ ID NO:216)相同；将2种sdAb结合物，即AS53445(SEQ ID NO:15)和AS53574(SEQ ID NO:16)确认为结合CRD1(远膜结合物)(图2)。3种人Fab似乎不特异性结合任何CRD构建体。

实例3骆驼sdAb和人scFv单CD30 CAR构建体的体外功效

抗CD30 CAR构建体的克隆

将实例2的10种单域抗体和由实例2的3种人Fab制备的人scFv(SEQ ID NO:58、59和60中列出的氨基酸序列)用作CAR构建体的CD30结合部分，5F11 scFv用作CAR阳性对照的结合部分。

将抗CD30 CAR构建体以常规的第2代CAR的形式设计，此后称为裸CAR。如上所提供的，这些CAR的序列从N-末端到C末端含有：前导序列(SEQ ID NO:61)、靶结合部分(即，抗CD30 sdAb或scFv)、CD8α铰链(SEQ ID NO:62)、CD8α跨膜(TM)区(SEQ ID NO:63)、4-1BB(CD137)分子的胞内部分(SEQ ID NO:64)、和CD3ζ分子的胞内部分(SEQ ID NO:65)。将这些构建体指定为“[CD30-结合部分]bbz”。例如，将使用AS48542 sdAb的裸CAR构建体指定为AS48542bbz。

抗CD30 CAR T细胞的产生

慢病毒产生：将包括pCMV-ΔR-8.47和pMD2.G(Addgene公司，目录号12259)的慢病毒包装质粒与传奇公司(Legend)内部的编码CAR的慢病毒转移质粒以约相等的摩尔比与聚乙烯亚胺(PEI)(以1:4.5的质粒：PEI比)混合。将HEK293细胞用该混合物转染，并且培养过夜。收集培养物上清液并将其离心以除去细胞碎片。将上清液通过0.45μm PES过滤器进行过滤。将病毒颗粒沉淀，并且用预冷的杜氏(Dulbecco)磷酸盐缓冲盐水(DPBS)冲洗。将病毒等分并且立即储存在-80℃。用流式细胞术测定测量supT1细胞系的转导效率来确定病毒效价。

T细胞转导：通过单采来从健康供体中收集白细胞。使用Ficoll-Paque

为了在T细胞上表达CAR，添加蛋白质L和兔-抗sdAb(金斯瑞公司，皮斯卡塔韦，新泽西州)，以分别检测细胞表面的scFv和sdAb。CAR表达水平示于表4。

通过LDH测定的细胞毒性

在转导的第5天，收集转导的T细胞，并以0.5:1的效应细胞:靶细胞比将其与表达CD30的肿瘤细胞系HH(大约1×10

在终点测量乳酸脱氢酶(LDH)水平。细胞毒性定义如下：

其中[LDH]

根据测定结果，用8种近膜结合物CAR构建体(即AS47863bbz、AS48433bbz、AS48508bbz、AS48542bbz、AS53750bbz、AS48463bbz、AS54233bbz和AS48481bbz)转导的T细胞的体外细胞毒性优于5F11bbz CAR T细胞的(表4，图3)，而用远膜结合物CAR T构建体(即AS53574bbz和AS53445bbz)转导的T细胞显示出较差的体外细胞毒性。靶向的表位在分子内的位置可能对T细胞活化的效力具有重大影响(Hombach等人J Immunol.,178:4650-4657(2007))。5F11抗体是对靶标CD30具有极高结合亲和力的CRD6结合物，而5F11bbz CAR T细胞不显示比使用更低亲和力的抗CRD6 sdAb作为CD30结合部分的上述8个CAR构建体更好的细胞毒性，这个事实表明T细胞活化可能独立于免疫受体的结合亲和力。这些数据证实存在针对CAR免疫受体的亲和力阈值，超过该阈值则不能改善T细胞功能或T细胞功能的改善下降(Chmielewski等人J Immunol.,173(12):7647-53(2004))。用3种scFv CAR(即AS57911bbz、AS57659bbz和AS57765bbz)转导的T细胞也显示出比5F11bbz CAR T细胞更高的细胞毒性。

表4.所选的CAR T细胞的表达水平和细胞毒性

此实例表明，与阳性对照5F11bbz CAR T细胞相比，使用所选的骆驼sdAb和人scFv作为CD30-结合部分的大多数CAR T细胞具有与表达CD30的细胞系相似或更高的体外细胞毒性。

实例4体内小鼠模型中抗CD30 CAR T细胞的评估

在HH异种移植模型中评估了抗CD30 CAR T细胞的体内抗肿瘤活性。在第0天，将500万(5.0×10

如图4A所示，剂量为5×10

如上所用的，指定为“AS48542-28z”的CAR从N-末端至C-末端含有：前导序列(SEQID NO:61)、AS48542 sdAb、CD28铰链(SEQ ID NO:127)、CD28跨膜(TM)区(SEQ ID NO:128)、CD28分子的胞内部分(SEQ ID NO:129)、和CD3ζ分子的胞内部分(SEQ ID NO:65)。

考虑到6种近膜CRD6结合物(即AS47863、AS48433、AS48542、AS53750、AS48463和AS54233)在氨基酸序列上高度同源，加之它们显示出相似的体外功效这一事实，预期具有用这些sdAb CD30结合部分构建的CAR的T细胞的体内功效是相当的并且全部优于5F11bbzCAR T细胞。

尽管已证明[CD30结合部分]-28z CAR T细胞的体内功效更有效，但在临床试验中通常认为[CD30结合部分]-bbz CAR T细胞比[CD30结合部分]-28z CAR T细胞功效更持久。因此，在以下测定中对[CD30结合部分]-bbz构建体进行了进一步测试。

实例5串联重复和双互补位CAR T细胞的体外细胞毒性

此实例表明，使用近膜sdAb CD30-结合部分的串联重复可以改善CAR T细胞对具有相对较低的CD30表达的细胞系(如H9)的细胞毒性(而与接头长度无关)，而使用双互补位CD30结合部分显示出与使用单个CD30结合部分相当的功效。

对于串联重复CD30结合部分，两个相同的抗CD30 sdAb分子通过短G4S接头或长(G4S)

在转导后九天，按照实例3中所述的方案，使用串联重复和双互补位CAR T细胞对CD30高表达MJ和CD30低表达H9细胞系进行体外细胞毒性测定(LDH方法)。CAR表达水平和细胞毒性水平显示于表5、图5A和5B中。基于sdAb的CAR阳性细胞的百分比均极高，>90％。所有CAR构建体(无论其使用单sdAb CD30-结合部分还是串联重复的CD30-结合部分或双互补位CD30-结合部分)均对MJ细胞系显示出相似的细胞毒性。另一方面，当将H9用作靶细胞时，两个串联重复CAR构建体均显示出优于具有单CD30-结合部分的AS48542bbz CAR T细胞的细胞毒性(而与接头长度无关)，而双互补位CAR显示出与AS48542bbz CAR T细胞相似的细胞毒性。

表5.双互补位和串联重复CAR T对MJ和H9细胞系的体外细胞毒性。

实例6 sdAb和CAR的人源化

使用CDR移植技术(参见，例如美国专利号5,225,539)将选择的骆驼sdAb(SEQ IDNO.9-18)人源化。在NCBI人种系V基因数据库中搜索骆驼sdAb序列，以鉴定与sdAb(即人受体)具有最高同一性的人VH种系序列(Foote和Winter,J.Mol.Biol.224:487-499(1992)；Morea V.等人,Methods 20:267-279(2000)；Chothia C.等人,J.Mol.Biol.186:651-663(1985).)。表6中列出了最合适在其上建立CDR移植VH的人框架(以下称为人受体)。

表6.针对骆驼sdAb选择的人受体

在CDR移植方法中，人受体的CDR被骆驼sdAb的CDR取代，从而形成了直接移植(straight-graft)序列。直接移植抗体通常失去了结合活性，该结合活性可以通过用非人残基取代对抗体活性关键的框架残基来恢复。为了鉴定这些残基，建立了骆驼sdAb的同源模型。简而言之，将骆驼sdAb序列与结构生物信息学研究合作社(Research Collaboratoryfor Structural Bioinformatics)(RCSB)蛋白质数据库中的序列进行比较。使用最接近的VH结构作为模板，基于该模板来产生骆驼sdAb的同源模型。从模型结构中，鉴定在CDR附近或包埋在分子内部(即侧链溶剂可及表面积小于15％)或两者的残基。这些残基通常对抗体的活性和结构很重要，因此被认为是潜在的回复突变位点。将在潜在的回复突变位点中的人残基逐步引入到直接移植序列，以产生具有不同程度人性化(degrees of humanness)的人源化sdAb(SEQ ID NO.19-54和199)。

将骆驼和人源化sdAb序列与人CD8α铰链(SEQ ID NO:62)和人IgG1 Fc片段(SEQID NO:217)融合，形成人源化HCAb序列。合成编码这些HCAb的DNA，并将其插入pTT5载体。使用HCAb表达质粒来转染HEK293细胞。对分泌到培养基的粗HCAb蛋白质进行SPR亲和力测量。简而言之，使用EDC活化的胺偶联化学法将捕获抗体抗人Fc pAb(通用电气医疗集团)固定在Biacore

将一些人源化HCAb的结合亲和力与其嵌合对应物进行了比较。大多数人源化HCAb保留其结合亲和力(表7)。

表7.骆驼和人源化抗体的单价结合亲和力。

使用四种人源化sdAb构建了CAR构建体，即AS48542VH5bbz(SEQ ID NO:182)、AS48463VH4bbz(SEQ ID NO:183)、AS47863VH4bbz(SEQ ID NO:184)和AS53574VH7bbz(SEQID NO:185)，并且如实例3中所述测试其细胞毒性。

表8.人源化CAR T细胞对MJ和H9细胞系的体外细胞毒性

与阳性对照5F11bbz相比，具有所有四种人源化CAR的T细胞对MJ和H9细胞系均显示出更高的细胞毒性。人源化CAR AS48542VH5bbz具有与骆驼科AS48542bbz CAR相似或稍微更高的细胞毒性(表8和图6)。结果表明，CAR构建体的人源化是成功的。

实例7人源化串联重复和双互补位CAR T细胞的体外细胞毒性

在此实例中，使用人源化sdAb序列构建人源化串联重复和双互补位CAR构建体(SEQ ID NO:186-194)。如实例3中所述进行慢病毒制备、CAR T细胞产生和通过LDH方法进行的体外细胞毒性测定。根据此测定的结果，所有使用人源化sdAb(单结合物、串联重复或双互补位)的CAR T细胞均显示对靶细胞系相似的细胞毒性，并且均优于阳性对照5F11bbzT细胞。交换双互补位CAR的人源化近膜和远膜sdAb结合物对CAR T细胞的细胞毒活性并没有太大的影响(表9和图7)。

表9.通过LDH方法测量的人源化串联重复和双互补位CAR T细胞的体外细胞毒性。

为了区分这些CAR，如下使用FACS方法，以0.2:1的较低效应子与靶标比进行体外细胞毒性研究。

将靶细胞(MJ或HH细胞系)用荧光染料羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE(SIGMA-ALDRICH，目录号21888))标记。将靶细胞与未转导的或用抗CD30CAR转导的效应T细胞以大约1×10

此值结合了靶细胞杀伤和T细胞增殖，并且是CAR T细胞的功能活性的良好指标。

CAR表达水平和细胞毒性水平示于表10和图8，并且可以根据测定结果来对CAR T细胞的体外细胞毒性排序。与LDH测定结果一致，使用人源化sdAb CAR的所有CAR T细胞均显示出优于使用阳性对照5F11bbz的T细胞的细胞毒性。用单结合物CAR构建体AS48542VH5bbz转导的T细胞对MJ和H9细胞系均具有高毒性。在所有串联重复的CAR构建体中，AS48542VH5dil-bbz对MJ细胞的毒性最大，AS47863VH4dil-bbz对H9细胞的毒性最大。在所有双互补位CAR构建体中，AS53574VH7-AS47863VH4bil-bbz对MJ和H9细胞的毒性均最大。使用体内小鼠模型进一步评估了所有四种构建体。

表10.通过FACS测量的人源化串联重复和双互补位CAR T的体外细胞毒性。

实例8体内小鼠模型中人源化抗CD30 CAR T细胞的评估

如实例4中所述(除了以1×10

如图9A和9B所示，以2×10

实例9人源化装甲CAR T细胞的体外细胞毒性

此实例表明，在CAR构建体中掺入显性负性TGFβ受体II(dnTGFβRII)改善了CAR T细胞的体外功效。

在此实例中，设计了CAR构建体，以使其他分子与常规的第2代CAR共表达。在一些构建体中，将CCR4分子与常规的第2代CAR以第2代CAR、P2A(SEQ ID NO:66)和全长CCR4(SEQID NO:67)(从N-末端至C-末端)的模式共表达。将这些构建体指定为“[CD30-结合部分]bbz-4C”(例如AS48542VH5bbz-4C，SEQ ID NO:198)(图11，右上)。在一些构建体中，将dnTGFβRII分子与常规的第2代CAR以dnTGFβRII(SEQ ID NO:68)、P2A(SEQ ID NO:66)和第2代CAR(从N-末端至C-末端)的模式共表达。将这些构建体指定为“TR2D-[CD30-结合部分]bbz”(例如TR2D-AS48542VH5bbz，SEQ ID NO:196)(图11，右下)。Wieser R等人最先报道了缺少胞内激酶结构域的dnTGFβRII序列(M1-S199)(Wieser R,等人,Molecular and cellularbiology13:7239-7247(1993))。在一些构建体中，将开关型嵌合PD-1受体(PD1CD28)与常规的第2代CAR以PD1CD28(SEQ ID NO:69)、P2A(SEQ ID NO:66)和第2代CAR(从N-末端至C-末端)的模式共表达。将这些构建体指定为“PD1CD28-[CD30-结合部分]bbz”(例如PD1CD28-AS48542VH5bbz，SEQ ID NO:197)(图11，左下)。开关型嵌合PD-1受体是在CD28(C141-S220)的铰链、跨膜和胞内部分的N-末端融合的PD-1ECD(M1-H155)。在一些构建体中，将dnTGFβRII和全长CCR4分子两者与常规的第2代CAR以dnTGFβRII(SEQ ID NO:68)、P2A(SEQ ID NO:66)、第2代CAR和全长CCR4(SEQ ID NO:67)(从N-末端至C-末端)的模式共表达。将这些构建体指定为TR2D-[CD30-结合部分]bbz-4C(例如，TR2D-AS48542VH5bbz-4C，SEQ ID NO:195)(图12)。对编码所有CAR序列以及共表达的分子的DNA进行密码子优化，合成，并且将其连接到具有人EF1α启动子的慢病毒载体质粒中以进行表达。

使用如实例7中所述的FACS方法来在与上述分子和其组合共表达的AS48542VH5bbz CAR上进行体外细胞毒性测定。在此测定中，将转导的和未转导的CAR T细胞与MJ细胞以0.1:1的E:T比孵育96小时(细胞密度为大约1×10

表11.通过FACS测量的装甲CAR T细胞对MJ细胞的体外细胞毒性。

如实例3中所述的，使用AS47863VH4或AS48542VH5 CD30结合部分的单个或串联重复(‘dil’)、用4-1BB(‘bbz’)或CD28(‘28z’)共刺激信号、用或不用dnTGFβRII装甲构建新CAR构建体(SEQ ID NO:205-215)，并且对其进行长期重复刺激测定。

如实例3所述，将16种抗CD30 CAR(SEQ ID NO:182、186、184、188、196和205-215)以及5F11bbz的病毒载体用于转导活化的T细胞。转导后六天，将CAR T细胞与cHL系L540细胞以1:3的E:T比(即10

根据靶细胞裂解的结果(表12和图13)，即使在第一轮共孵育下，未转导的T细胞也不能消除L540细胞。5F11bbz CAR T细胞在共孵育的前三轮中几乎消除了所有的肿瘤细胞，但在第四轮中失败。除TR2D-AS47863VH4-28z(显示与未装甲的CAR相似的潜力)外，大多数装甲的CAR构建体均显示比其未装甲的对应物更高的长期杀伤潜力。这表明TGFβDNRII的共表达确实改善了CAR T细胞的体外功效。在所有构建体中，TR2D-AS47863VH4dil-28z和TR2D-AS48542VH5dil-28z显示长期杀伤活性的最高潜力。在靶细胞的刺激下，这两种构建体还显示出最佳的T细胞扩增(表13和图14)。

表12.CAR T细胞每轮杀伤后，裂解的L540细胞的百分比。

表13.每一轮杀伤后，T细胞扩增倍数。

实例10体内小鼠模型中装甲的人源化CAR T细胞的评估

此实例表明，在CAR构建体中掺入显性负性TGFβ受体II(dnTGFβRII)改善了HH小鼠模型中CAR T细胞的体内功效。

如实例4中所述(仅将CAR T细胞的剂量降低至1×10

如图15A所示，与HBSS和未转导的T细胞对照相比，以10

序列