一种留取结直肠癌新鲜肿瘤组织的方法

摘要

一种留取结直肠癌新鲜肿瘤组织的方法，其特征在于，将新鲜肿瘤组织从患者体内切除，清理所述肿瘤组织，用预冷取材刀留取小块肿瘤组织，将所述小块肿瘤组织放入冻存管，低温保存。

说明书

技术领域

本发明涉及医学研究中肿瘤组织留取领域，尤其是涉及一种留取结直肠癌新鲜肿瘤组织的方法，以及该方法在治疗疾病中的用途。

背景技术

结直肠癌精准医疗和靶向药物的应用逐步展开，针对结直肠癌的分子病理学检测也普遍开展。目前，临床用于分子病理诊断的样本主要来自患者根治标本的石蜡包埋组织，这种样本的取得简单方便，但随着时间延长会出现 DNA含量不断下降的情况，从而影响基因检测的结果。因此，本发明公开了一种直接获取新鲜肿瘤组织并低温冷冻保存的方法，可以较好地保存肿瘤组织内的DNA、RNA和蛋白质等物质，为后续分子检测取得可靠结果奠定基础。

发明内容

本发明的目的是：公开一种留取结直肠癌新鲜肿瘤组织的方法，其特征在于，将新鲜肿瘤组织从患者体内切除，清理所述肿瘤组织，用预冷取材刀留取小块肿瘤组织，将所述小块肿瘤组织放入冻存管，低温保存。

前述留取新鲜肿瘤组织的方法中，所述小块肿瘤组织放入冻存管前，用外包装包裹。

前述留取新鲜肿瘤组织的方法中，所述外包装是锡纸。

前述留取新鲜肿瘤组织的方法中，所述冻存管放入抽屉式不锈钢冻存管放置器中低温保存。

前述留取新鲜肿瘤组织的方法中，低温保存温度是-80℃。

前述留取新鲜肿瘤组织的方法中，使用液氮进行降温。

前述留取新鲜肿瘤组织的方法中，用预冷取材刀留取小块肿瘤组织的步骤，在冰台上实施。

前述留取新鲜肿瘤组织的方法中，所述冰台为搪瓷消毒方盘，中间布满冰，所述冰面上覆盖两层滤纸。

前述留取新鲜肿瘤组织的方法中，所述新鲜肿瘤组织来自于结直肠癌患者。

前述留取新鲜肿瘤组织的方法中，所述将新鲜肿瘤组织从患者体内切除步骤，具体包括垂直下刀至浅肌层表面，选取肿瘤表面至浅肌层之间留取肿瘤组织。

前述留取新鲜肿瘤组织的方法在治疗疾病中的应用。

进行基因检测的肿瘤组织应含有尽量多的肿瘤实质成分，减少纤维结缔组织等间质的含量，这样可以减少对检测结果的干扰，保证结果的可靠性，为临床治疗提供正确指导。发明人对上百例结直肠癌根治标本的形态学观察，得到的经验是黏膜至黏膜下层肿瘤实质丰富，间质成分较少，肌层以下因肿瘤浸润穿插于平滑肌组织之间，实质含量减少，间质成分增加。因此，发明人切取肿瘤组织时，垂直下刀至浅肌层表面，选取肿瘤表面至浅肌层之间留取肿瘤组织。本发明的优点是可以较好地保存肿瘤组织内的DNA、RNA和蛋白质等物质，为后续分子检测取得可靠结果奠定基础。

具体实施方式

收集结直肠癌住院患者，纳入标准：①术前病理活检诊断为原发于结直肠的浸润癌；②实施标准外科结直肠癌根治术。排除标准：①梅毒、艾滋病等传染性疾病患者的标本；②肿瘤体积＜3cm，或曾行术前新辅助化疗的患者。

留取结直肠癌手术标本新鲜肿瘤组织的流程和方法：

(1)所需设备：取材台、液氮罐、低温冰箱、运输标本专用保温箱和冻存管等耗材。

(2)标本离体前半小时电话通知病理科取材医师。取材医师携带运输标本的保温箱(箱内放置少量干冰)至手术室，标本离体后取材医师核对标本信息无误后立即将标本放置运输箱内。

(3)取材医师将标本运至病理科，放置取材台上，使用纱布清理肿瘤组织上的血污，再进行大体观察和照相。

(4)将标本置于自制的冰台上取材，动作轻柔而迅速，用预冷的取材刀留取肿瘤组织约0.5cm

(5)将冻存管放入抽屉式不锈钢冻存管放置器内，再放入液氮保存。

(6)完善结直肠癌手术标本新鲜肿瘤组织留取登记表，内容包括患者的临床信息、病理号、肿瘤组织数量、正常组织数量和日期。根据对应的病理号可以在病理信息系统内查询到患者根治标本的病理诊断报告，报告内容包括肿瘤的肉眼类型、大小、浸润深度、有无脉管内癌栓和神经侵犯、切缘是否有癌累及、肠周淋巴结有无癌转移、癌旁有无腺瘤，免疫组化错配修复蛋白表达情况以及pTNM分期。相关大体照片单独标记保存。

(7)冻存后1-2周内完成结直肠癌相关基因检测，剩余样本放置-80℃低温冰箱保存，每3-6个月抽样提取DNA，检查样本质量。冰箱锁柜并由专人负责开启。

提取同时期24例由本发明所述方法获得的新鲜冻存肿瘤组织和11例传统石蜡包埋肿瘤组织的核酸，可以看到两者260/280的比值均在1.8-2.0之间，但前者的核酸含量显著高于后者。注：“260/280的比值”是指样品在260nm 和280nm处吸光度的比值，该值大于1.8，说明DNA纯度比较高，符合进一步基因检测的要求，如果＞2可能含有较多RNA，会影响基因检测的结果。

表-1新鲜冻存肿瘤组织与石蜡包埋肿瘤组织的核酸含量、260/280比值比较

以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。