Ru360在增强小鼠胚胎成纤维细胞对1800MHz射频电磁场敏感度中的应用

摘要

本发明公开了Ru360在增强小鼠胚胎成纤维细胞对射频电磁场敏感度中的应用。Ru360是一种氧桥联的双核钌胺络合物，是一种线粒体钙离子泵抑制剂，实验表明，3μM Ru360能够显著增强1800MHz射频电磁场对小鼠胚胎成纤维细胞的DNA损伤和细胞活力抑制效应，能够显著增强细胞对射频电磁辐射的敏感性，具有射频电磁场增敏和建立射频电磁场敏感细胞模型的应用前景。

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体是一种线粒体钙离子泵抑制剂Ru360在增强小鼠胚胎成纤维细胞对1800MHz射频电磁场敏感度中的应用。

背景技术

随着科学技术的发展，手机用的越来越多，人们越来越担心手机辐射对身体健康的影响。目前，手机辐射是否会致癌是公众最关心的问题之一，而手机辐射是否会导致细胞内DNA发生损伤则是重要的研究内容。虽然目前已经有很多相关的研究，但是由于射频电磁场的能量很低，效应不够强，导致不同研究之间结果不一致。因此，寻找到对射频电磁场敏感的细胞模型能够加快该领域的研究进展。然而，目前还未找到或报道敏感的细胞模型。

Ru360是一种氧桥联的双核钌胺络合物，是一种选择性的线粒体钙摄取抑制剂。目前，Ru360增强细胞对电磁场的敏感度的作用还未见报道。

Ru360的化学结构为：

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了线粒体钙离子泵抑制剂Ru360在增强细胞对射频电磁场敏感度中的应用。

本发明所采用的技术方案如下：线粒体钙离子摄取抑制剂Ru360在增强小鼠胚胎成纤维细胞对1800MHz射频电磁场敏感度中的应用。

进一步的，所述Ru360在培养液中的作用浓度为3μM。

进一步的，所述Ru360为市售高纯度的Ru360，纯度≥97％。

进一步的，本发明还提供了Ru360增强1800MHz射频电磁场对小鼠胚胎成纤维细胞的DNA损伤作用以及对细胞活力的抑制作用。

本发明提供线粒体钙离子泵抑制剂Ru360在增强细胞对射频电磁场敏感度中的应用，该发明为细胞感应电磁辐射机制及相关研究以及相关领域提供增强细胞对射频电磁场辐射敏感度的方法，具有重要的经济和科研价值。

附图说明

图1是检测小鼠胚胎成纤维细胞内DNA损伤的碱性彗星实验图，其中，

1-4.0W/kg 1800MHz射频电磁场假暴露15分钟，

2-4.0W/kg 1800MHz射频电磁场暴露15分钟，

3-提前15分钟Ru360处理+4.0W/kg 1800MHz射频电磁场假暴露15分钟，

4-提前15分钟Ru360处理+4.0W/kg 1800MHz射频电磁场暴露15分钟。

图2是小鼠胚胎成纤维细胞内DNA损伤水平变化的统计柱状图，其中，

1-4.0W/kg 1800MHz射频电磁场假暴露15分钟，

2-4.0W/kg 1800MHz射频电磁场暴露15分钟，

3-提前15分钟Ru360处理+4.0W/kg 1800MHz射频电磁场假暴露15分钟，

4-提前15分钟Ru360处理+4.0W/kg 1800MHz射频电磁场暴露15分钟，

**P<0.01,***P<0.001。

图3射频电磁场暴露结束1小时后检测细胞活力，其中，

1-4.0W/kg 1800MHz射频电磁场假暴露15分钟，

2-4.0W/kg 1800MHz射频电磁场暴露15分钟，

3-提前15分钟Ru360处理+4.0W/kg 1800MHz射频电磁场假暴露15分钟，

4-提前15分钟Ru360处理+4.0W/kg 1800MHz射频电磁场暴露15分钟，

*P<0.01。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。

1.材料方法：

1)试药αMEM培养液(Hyclone，中国)；胎牛血清(FBS，杭州四季青生物工程材料有限公司，中国)；0.25wt.％胰酶(含0.02wt.EDTA,Gibco,美国)；Cell Counting Kit-8(CCK8，日本同仁，日本)；Ru360(Sigma，中国)。

2)仪器：射频电磁场辐照系统(sXc1800，IT’IS基金会，瑞士)；多功能酶标仪(Spark，Tecan，瑞士)；生物安全柜(HFsafe-1200LC，Heal Force，中国)；二氧化碳细胞培养箱(Forma Steri-Cycle，Themo Scientfic,中国)；彗星电泳槽(JY-SC10，北京君意，中国)；电泳电源(Bio-Rad，美国)。

3)小鼠胚胎成纤维细胞培养小鼠胚胎成纤维细胞培养于含有10％胎牛血清的αMEM培养液中，培养在37℃和5％CO

4)小鼠胚胎成纤维细胞接种取生长状态良好的细胞，消化后制成细胞悬液，以1×10

5)碱性彗星实验检测DNA损伤将单面磨砂载玻片用双蒸水冲洗干净、晾干，在磨砂面上铺一层0.65％琼脂糖凝胶，用盖玻片压平，置于冰上促凝。用0.25％胰酶消化细胞，再加入培养液制成细胞悬液，置于冰上待用。取10μL细胞悬液与75μL 0.65％低熔点琼脂糖混合，铺于第一层琼脂糖凝胶上，用盖玻片压平，置冰上促凝。移去盖玻片，将载玻片浸入预冷的碱性细胞裂解液(2.5M NaCl，1％sodium N-lauroyl sarcosinate，100mM disodiumEDTA，10mM Tris base，pH＝10，1％Triton X-100)中，4℃裂解1小时。随后，浸入酶解液中(0.5mg/mL DNase-free proteinase K，2.5M NaCl，1％sodium N-lauroyl sarcosinate，100mM disodium EDTA，10mM Tris base，pH＝10，1％Triton X-100)中，37℃酶解2小时。电泳前，在预冷的电泳液(300mM NaOH，0.1％8-hydroxyquinoline，2％DMSO，10mMtetrasodium EDTA，pH＝13)中4℃解旋20分钟；电泳。300mA、20V(0.4V/cm)4℃电泳20分钟。电泳结束后在中和缓冲液中(0.4M Tris，pH＝7.5)中和5分钟，用Gel red(1μg/mL)染色、制片，通过荧光显微镜观察拍照并采用CASP软件进行分析。

6)统计分析实验数据用‘X±SD表示，用微软Excel软件进行统计学分析，两组间比较采用t检验，当P<0.05时认为具有统计学差异。

2.结果：

提前15分钟加入3μM Ru360处理小鼠胚胎成纤维细胞，1800MHz 4.0W/kg射频电磁场连续暴露15分钟后，通过碱性彗星实验检测细胞内DNA损伤水平，Ru360能够显著增强射频电磁场对小鼠胚胎成纤维细胞的DNA损伤(见图1-2所示)；同时，通过CCK8法检测细胞活力，Ru360能够显著增强射频电磁场对小鼠胚胎成纤维细胞的细胞活力抑制作用(见图3所示)，具有明显的射频电磁辐射增敏效应。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均包含在本发明的保护范围之内。