肺泡灌洗病原微生物宏基因组去除宿主化核酸提取方法

摘要

本发明提出了一种肺泡灌洗病原微生物宏基因组去除宿主化核酸提取方法，包括如下步骤：S1、差异裂解去宿主：取样离心弃上清，重悬于PBS溶液中，加入皂素溶液孵育后加入无菌水再次孵育；加入NaCl震荡均匀后离心弃上清，重新悬浮于PBS溶液中；S2、去除宿主DNA：向S1中所得溶液中加入PMA溶液，经历黑暗孵育以及光照孵育；S3、微生物菌体破壁：采用研磨珠以及溶菌酶对S2中得到的溶液进行破壁处理；S4、核酸提取：对S3得到的溶液进行DNA提取，并检测质量。本发明通过使用叠氮溴化丙锭(PMA)。当暴露在可见光下时，PMA分子的叠氮基被光解裂解，并发生C‑H插入反应，与DNA形成共价键，可有效地从下游分析中消除任何暴露的DNA。