萘哌地尔作为葡萄糖醛酸转移酶UGT2B诱导剂的应用

摘要

本发明属于医药技术领域，特别涉及化合物的新应用，具体为萘哌地尔或其药学上可接受的盐作为葡萄糖醛酸转移酶UGT2B诱导剂的应用。本发明还提供萘哌地尔或其药学上可接受的盐可显著诱导葡萄糖醛酸转移酶UGT2B15在前列腺癌中表达上调；及萘哌地尔或其药学上可接受的盐可显著诱导葡萄糖醛酸转移酶UGT2B7在肝癌中表达上调。本发明的诱导剂萘哌地尔通过诱导UGT2B7和UGT2B15的表达，促进雄激素代谢失活，抑制雄激素蓄积效应。同时，本发明萘哌地尔可通过诱导肝脏中的葡萄糖醛酸转移酶UGT2B7表达上调，提高底物的肝脏代谢清除，减少其毒副作用。

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别涉及化合物的新应用，具体为萘哌地尔或其药学上可接受的盐作为葡萄糖醛酸转移酶UGT2B诱导剂的应用。

背景技术

雄激素在正常前列腺功能表达以及前列腺疾病的发生发展中都扮演着至关重要的角色。前列腺是雄激素敏感性器官，体内活性雄激素与雄激素受体(Androgen Receptor，AR)结合后，激活雄激素受体通路，随后在前列腺细胞增殖、分化和形态发生等方面均发挥着至关重要的作用。内源性雄激素中活性最强的是AR激动剂。高浓度的雄激素蓄积，能够激活细胞浆中的AR，促使AR入核，启动一系列特异性反应，对细胞的增殖和凋亡进行调控，进而诱导前列腺癌的发生和发展。因此，现阶段临床治疗前列腺癌及相关前列腺疾病的手段主要有两种：阻制AR的DNA结合区域；抑制活性雄激素合成。

人体中有多种活性雄激素，其中对AR的激动作用最强的是睾丸分泌的睾酮(Testosterone，T)和它经由5α还原酶代谢生成的二羟睾酮(Dihydrotestosterone，DHT)。DHT通过氧化还原反应代谢为雄甾酮(Androsterone，ADT)和雄烷-3α,17β-二醇(Androstane-3α,17β-diol，3α-DIOL)。ADT和3α-DIOL是亦能与AR结合的活性雄激素。体内外研究表明，以上活性雄激素最终主要通过葡萄糖全酸化代谢酶(UDP-glucuronosyltransferases，UGTs)代谢失去活性，且该过程不可逆。其中，T和DHT主要由UGT2B15和UGT2B17代谢失活，ADT主要由UGT2B7和UGT2B17代谢失活，3α-DIOL主要由UGT2B7，UGT2B15和UGT2B17代谢失活(J.Steroid Biochem.Mol.Biol.2008,109:247-253)。UGT2B15和UGT2B17主要分布于前列腺，UGT2B7主要分布于肝脏。目前，随着对雄激素代谢及其影响的深入研究，通过调控UGT2B15/17促进雄激素代谢消除有望成为前列腺疾病发展和治疗新分子标志物和新靶点(J.Steroid Biochem.Mol.Biol.2015,145:187-192；Pharmacological Research.2016,106:114-122)。

UGT2B15和UGT2B17作为使雄激素失活的最主要的代谢酶，其表达和活性能够决定雄激素浓度，从而直接影响雄激素-AR复合物引起的系列生理病理反应。然而，目前对于UGT2B15/17调控剂的研究相对空白。活性雄激素不仅是UGT2B15/17的底物，过量雄激素通过诱导核受体AR负调控UGT2B15/17的表达和活性，加剧雄激素蓄积(CancerResearch.2013,73:6963-6971)。因此，AR拮抗剂和雄激素合成抑制剂可通过AR间接发挥上调UGT2B15/17活性和表达的副作用。而不依赖AR作用的UGT2B15/17的调控剂还未见报道。

开发以UGT2B15/17作为新靶点的前列腺疾病药物，亟待解决的问题包括：已发现的UGT2B15/17的调节剂很少，相关研究数据非常有限；介导调控UGT2B15/17的核受体在不同分子的作用下，对UGT2B15和UGT2B17的调控作用不同；由于UGT2B15和UGT2B17在不同前列腺细胞，特别是前列腺癌发展至不同表型的细胞中的分布不同，药物调节它们对于各种细胞中雄激素代谢的影响，以及细胞增殖和凋亡的影响不同。

萘哌地尔(Naftopidil)为选择性的α1受体拮抗剂，能够抑制α1受体引起的血压上升，并兼有钙离子拮抗作用。目前，临床应用主要集中在亚洲地区。1999年，萘哌地尔在日本作为治疗前列腺增生和下尿路梗阻治疗药物上市。2001年，萘哌地尔以抗高血压药物获得国家一类新药证书(新药证书编号：国药证字X20010136)，并于同年在国内上市(新药生产批件编号：X2001002)。上述药物的主要药理作用为阻断分布在前列腺和膀胱颈平滑肌表面α1-肾上腺素受体，消除动力学因素所致的平肌收缩与紧张，解除膀胱出口梗阻和缓解下尿路刺激症状。相较于坦索罗辛和西洛多辛等其它α1肾上腺素受体拮抗剂，萘哌地尔药效更好，副作用发生率更低。以上临床作用均应用其外消旋体形式。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供萘哌地尔或其药学上可接受的盐作为葡萄糖醛酸转移酶UGT2B诱导剂的应用。

本发明的目的通过下述方案实现：

萘哌地尔或其药学上可接受的盐作为葡萄糖醛酸转移酶UGT2B诱导剂的应用，具体表现为萘哌地尔或其药学上可接受的盐显著诱导葡萄糖醛酸转移酶UGT2B的上调表达。

所述的萘哌地尔为左旋体、右旋体或消旋体。

所述萘哌地尔的结构式如下所示：

所述的葡萄糖醛酸转移酶UGT2B可包括UGT2B7、UGT2B15等。

进一步的，本发明还提供萘哌地尔或其药学上可接受的盐在诱导葡萄糖醛酸转移酶UGT2B15上调表达中的应用。

本发明通过实验证明，萘哌地尔对映体R(+)-NAF和S(-)-NAF能够显著诱导UGT2B15的表达上调。

进一步的，本发明还提供萘哌地尔或其药学上可接受的盐在诱导葡萄糖醛酸转移酶UGT2B7上调表达中的应用。

本发明通过实验证明，萘哌地尔对映体R(+)-NAF和S(-)-NAF能够显著诱导UGT2B7的表达上调。

更进一步的，萘哌地尔或其药学上可接受的盐可显著诱导葡萄糖醛酸转移酶UGT2B15在前列腺癌中表达上调。所述的前列腺癌指前列腺癌细胞，具体可为前列腺癌LNCap细胞等。

基于UGT2B7和UGT2B15的雄激素代谢作用，萘哌地尔通过诱导UGT2B高效表达，增强体内雄激素代谢，从而缓解和消除雄激素蓄积效应。

更进一步的，萘哌地尔或其药学上可接受的盐可显著诱导葡萄糖醛酸转移酶UGT2B7在肝癌中表达上调。所述的肝癌指肝癌细胞，具体可为肝癌Huh-7细胞等。

基于UGT2B7的作用，萘哌地尔通过显著诱导UGT2B7的表达上调，从而提高UGT2B7底物清除率。

更进一步的，萘哌地尔或其药学上可接受的盐在促进UGT2B7酶底物代谢中的应用。

具体为，萘哌地尔可通过诱导肝脏中的葡萄糖醛酸转移酶UGT2B7表达上调，提高底物在肝脏的代谢清除，减少药物带来的毒副作用。

本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：

1、新靶点：本发明诱导剂的作用靶点不同于传统去雄激素治疗药物靶点——抑制雄激素合成和抑制雄激素受体活性，作用在促进雄激素消除。本发明诱导剂通过诱导UGT2B7和UGT2B15的表达，促进雄激素代谢失活，抑制雄激素蓄积效应。

2、安全性高：萘哌地尔以外消旋体形式作为抗前列腺增生药物已经上市和使用多年。临床已证明其安全性明显高于其他雄激素-雄激素受体通路抑制剂。本发明属于老药新作用及新应用。另外本发明将萘哌地尔的对映体分别进行研究，明确其对映体均具有显著的诱导作用，进一步从立体选择性的角度规避了毒性风险。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为萘哌地尔的对映体结构式。

图2为萘哌地尔诱导前列腺癌LNCap细胞中UGT2B15的蛋白表达上调。

图3为萘哌地尔诱导肝癌Huh-7细胞中UGT2B7的mRNA表达水平的浓度和时间趋势。

图4为萘哌地尔诱导肝癌Huh-7细胞中UGT2B7的蛋白表达上调。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。下列实施例中涉及的物料若无特殊说明均可从商业渠道获得。所述方法若无特别说明均为常规方法。

所用的前列腺癌LNCap细胞(目录号SCSP-5021)、肝癌Huh-7细胞(目录号SCSP-526)均购买自中国科学院细胞库。其他试剂除特殊标注的，均可通过市售获得。

一实施方法，萘哌地尔或其药学上可接受的盐作为葡萄糖醛酸转移酶UGT2B诱导剂的应用，具体表现为萘哌地尔或其药学上可接受的盐显著诱导葡萄糖醛酸转移酶UGT2B的上调表达。所述的萘哌地尔为左旋体、右旋体或消旋体。萘哌地尔的对映体结构式见图1。

所述的葡萄糖醛酸转移酶UGT2B可包括UGT2B7、UGT2B15等。

一实施方法，所述萘哌地尔或其药学上可接受的盐的浓度优选为2.5-40μM。

一实施例中，萘哌地尔或其药学上可接受的盐可显著诱导葡萄糖醛酸转移酶UGT2B15在前列腺癌中表达上调。所述的前列腺癌指前列腺癌细胞，具体可为前列腺癌LNCap细胞等。

如前所述，通过调控UGT2B15/17促进雄激素代谢消除有望成为前列腺疾病发展和治疗新分子标志物和新靶点。本发明所述萘哌地尔或其药学上可接受的盐可显著上调UGT2B的高效表达，增强体内雄激素代谢，从而缓解和消除雄激素蓄积效应。

进一步的，萘哌地尔或其药学上可接受的盐在促进UGT2B7底物代谢中的应用。

具体为，萘哌地尔可通过诱导肝脏中的葡萄糖醛酸转移酶UGT2B7表达上调；而UGT2B7为药物的代谢酶，通过诱导UGT2B7表达上调，加快药物的代谢，提高底物的肝脏代谢清除，促进排毒，减少药物带来的毒副作用。

具体实施例：

实施例1：萘哌地尔诱导UGT2B15蛋白表达

将LNCap接种于6孔板中，孵育24小时后将培养基更换为分别含有萘哌地尔对映体的含药RPMI 1640培养基，化合物浓度范围为0-40μM。在培养24小时后，用蛋白提取试剂收集细胞，并提取蛋白。用western-blot法检测UGT2B15的表达，结果见图2。图2中，LNCap细胞中UGT2B15的蛋白表达水平随萘哌地尔对映体浓度的升高而增强。

实施例2：萘哌地尔诱导UGT2B7的mRNA和蛋白表达

将Huh-7接种于6孔板中，孵育24小时后将培养基更换为分别含有萘哌地尔对映体的含药DMEM培养基，化合物浓度范围为0-40μM。在培养12、24和48小时后，用RNA提取试剂收集细胞，并按照RNA提取试剂所附操作流程提取总mRNA，并用逆转录试剂盒将mRNA逆转录为cDNA，随后用real-time PCR测定细胞中UGT2B7的mRNA表达水平，结果见图3。图3中，Huh-7细胞中UGT2B7的mRNA表达水平随着药物浓度和孵育时间而增大；当浓度为25μM培养12h即可获得2倍及以上的mRNA表达水平。

将Huh-7接种于6孔板中，孵育24小时后将培养基更换为分别含有萘哌地尔对映体的含药DMEM培养基，化合物浓度范围为0-40μM。在培养24小时后，用蛋白提取试剂收集细胞，并提取蛋白。用western-blot法检测UGT2B7的表达，结果见图4。图4中，Huh-7细胞中UGT2B7的蛋白表达水平随萘哌地尔对映体浓度的升高而增强；当浓度为25μM培养24h即可获得8倍及以上的蛋白表达水平。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。