一种COX-2酶抑制剂的荧光标记物的合成

摘要

本发明将非甾体抗炎药吲哚美辛转与罗丹明B反应形成缀合物，该缀合物能够选择性和有效地抑制两种纯化蛋白中的COX‑2和完整的细胞。这些不会显着抑制COX‑1的结合物可在体内炎症性病变和表达COX‑2的肿瘤中对COX‑2进行光学成像。该研究用于优化来自多种NSAID或COX‑2选择性抑制剂(COXIB)的荧光缀合物。将缀合物评估为靶向COX‑2的成像剂，并在体外和体内验证活性分子作为靶向COX‑2的细胞和肿瘤制剂。这为我们提供了一种荧光标记的光学成像剂，该荧光剂经验证可用于靶向COX一2的炎症和癌症体内成像。本发明以吲哚美辛为原料，经与己二胺缩合，所得产物再与罗丹明B进行缩合。本发明提供了一种操作简便、原料易得，杂质含量少、生产成本低的在COX‑2抑制剂吲哚美辛上引入荧光基团的合成方法，在保证其基本骨架结构的基础上引入荧光基团，该化合物可自发荧光，为其在细胞生物学中的示踪应用。

说明书

技术领域

本发明属于药物化学领域

背景技术

早期发现是当代临床癌症护理的关键挑战之一。微小的癌前病变和早期原发肿瘤的检测对于有效的癌症治疗至关重要。因此，近几十年来，对用于临床肿瘤学的高灵敏度成像技术的兴趣大大增加。许多小组研究了使用适合于各种成像方式的造影剂对肿瘤进行体内检测的方法，以最大化配体在肿瘤中的定位并最小化在周围正常组织中的摄取以实现高信噪比。这些方法包括使用特异性结合肿瘤细胞受体的单克隆抗体对肿瘤进行靶向成像，蛋白酶激活的近红外荧光探针以检测肿瘤，以叶酸受体为靶点的体内肿瘤成像使用近红外(NIR)染料-叶酸共轭物，和整联蛋白靶向成像使用

环氧合酶(COX)同工酶催化花生四烯酸向多种前列腺素的生物转化，这些前列腺素是炎症性疾病的重要生物介质。COX-1在大多数正常组织中组成性表达，例如止血，血管紧张和胃粘膜的细胞保护。大多数上皮细胞中不存在COX-2或以非常低的水平表达COX-2，但在炎症性病变以及许多恶变前和恶性肿瘤中却发现COX-2的水平很高。在肿瘤发生的早期，例如结肠中的腺瘤性息肉或巴雷特食管中，可以检测到COX-2 mRNA。COX-2表达促进肿瘤细胞的生长，血管生成和转移。最近的研究表明，选择性COX-2抑制剂可用于预防各种人类癌症。

与周围正常组织相比，癌前和恶性肿瘤中的高水平COX-2表明，它是通过放射性标记或荧光COX-2抑制剂进行分子成像的理想靶标。

发明内容

本发明将非甾体抗炎药吲哚美辛转与罗丹明B反应形成缀合物，该缀合物能够选择性和有效地抑制两种纯化蛋白中的COX-2和完整的细胞。这些不会显着抑制COX-1的结合物可在体内炎症性病变和表达COX-2的肿瘤中对COX-2进行光学成像。该研究用于优化来自多种NSAID或COX-2选择性抑制剂(COXIB)的荧光缀合物。将缀合物评估为靶向COX-2的成像剂，并在体外和体内验证活性分子作为靶向COX-2的细胞和肿瘤制剂。这为我们提供了一种荧光标记的光学成像剂，该荧光剂经验证可用于靶向COX-2的炎症和癌症体内成像。

本发明提供的合成吲哚美辛罗丹明合物的技术方案如下：

吲哚美辛酰胺的制备方法：

将吲哚美辛(10mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(100ml)中，搅拌至完全溶解，随后向溶液中加入N-BOC己二胺(30mmol)，1-羟基苯并三唑水合物(15mmol)，N，N-二异丙基乙胺(30mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(11mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。真空除去溶剂，得到残余物，将其溶于100ml水中，并用乙酸乙酯(3×754ml)萃取。合并的有机层经Na

将上述所得的化合物溶于5mL两当量的盐酸乙酸乙酯溶液中，0度下反应4h，直接真空除去溶剂即得棕色固体，产率72.4％。反应式如下：

吲哚美辛罗丹明合物的制备方法：

将罗丹明B(0.45g，1mmol)溶于1，2-二氯乙烷(12mL)的溶液，并逐滴加入三氯氧磷(0.4mL)，并将反应混合物加热回流3h，然后将所得溶液冷却至室温，并减压除去溶剂，得到若丹明B酰氯，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。将罗丹明B酰氯溶解在乙腈(80mL)中，并逐滴添加到含有吲哚美辛酰胺(0.30g，1mmol)，TEA(0.5mL)，乙腈(20mL)的溶液中，并加热回流过夜。反应式如下：

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不限于此

实施例1

吲哚美辛酰胺的制备方法：将吲哚美辛(10mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(100ml)中，搅拌至完全溶解，随后向溶液中加入N-BOC己二胺(30mmol)，1-羟基苯并三唑水合物(15mmol)，N，N-二异丙基乙胺(30mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(11mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。真空除去溶剂，得到残余物，将其溶于100ml水中，并用乙酸乙酯(3×754ml)萃取。合并的有机层经Na

吲哚美辛罗丹明合物的制备方法：

将罗丹明B(0.45g，1mmol)溶于1，2-二氯乙烷(12mL)的溶液，并逐滴加入三氯氧磷(0.4mL)，并将反应混合物加热回流3h，然后将所得溶液冷却至室温，并减压除去溶剂，得到若丹明B酰氯，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。将罗丹明B酰氯溶解在乙腈(80mL)中，并逐滴添加到含有吲哚美辛酰胺(0.30g，1mmol)，TEA(0.5mL)，乙腈(20mL)的溶液中，并加热回流过夜。然后将反应溶液倒入蒸馏水中，并用CH