化合物EPZ5676及其相关抑制剂在制备抗脑缺血疾病药物中的用途

摘要

本发明属制药领域，涉及化合物EPZ5676在制药中的新用途，具体涉及化合物(C30H42N8O3)及其相关抑制剂在制备预防或治疗脑缺血疾病药物中的用途，本发明通过建立的小鼠脑缺血模型和OGD/R诱导的原代神经元细胞体外模型实验，结果表明EPZ5676通过改善脑缺血小鼠行为学症状，减少脑梗死体积，抑制炎症蛋白与凋亡蛋白表达，促进链接蛋白表达，对脑缺血疾病具有保护作用。所述的化合物EPZ5676可用于制备抗脑缺血药物，同时也为脑缺血疾病的研究提供了新的方向。

说明书

技术领域

本发明属制药领域，涉及化合物EPZ5676在制药中的新用途，具体涉及化合物(C

背景技术

现有技术公开了脑缺血(又名脑卒中)是威胁人类健康的三大疾病之一，具有患病率高、复发率高、致残率高、死亡率高的特点。调查显示，缺血性卒中占脑卒中的60％～80％，然而，迄今临床干预中尚缺乏有效治疗缺血性脑卒中的药物；临床实践显示脑缺血后缺血区域会水肿，分泌大量炎性因子；由于神经元细胞为最敏感细胞，故梗死中心及其周围区域神经元细胞会出现大量死亡，因此如何保护神经元，减少神经元的死亡已成为业内研究脑缺血后神经修复的一大重点。

研究公开了化合物EPZ5676为有效的DOT1L组蛋白甲基化转移酶DOT1L抑制剂，具有显著的抗肺纤维化的作用，且可用于治疗白血病。但迄今，尚未见EPZ5676在脑缺血中的作用的相关报道。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供新的有效防治脑缺血疾病的药物，具体涉及化合物EPZ5676在制药中的新用途，尤其涉及化合物(C

发明内容

本发明的目的是基于现有技术的现状，提供新的有效防治脑缺血疾病的药物，具体涉及化合物EPZ5676在制药中的新用途，尤其涉及化合物(C

本发明提供了化合物EPZ5676在防治脑缺血疾病的新药理作用和用途，通过建立的小鼠脑缺血模型和OGD/R诱导的原代神经元细胞体外模型实验，结果显示，在体内，EPZ5676能改善脑缺血小鼠行为学症状，减少脑梗死体积，抑制炎症蛋白与凋亡蛋白表达，促进链接蛋白表达；在体外，EPZ5676能降低炎症蛋白与凋亡蛋白表达，促进链接蛋白表达。因此，所述的化合物EPZ5676可用于制备抗脑缺血药物。

本发明所述的EPZ5676的分子式为：C

本发明中，采用C57小鼠线栓法制备脑缺血再灌损伤模型进行实验，Bederson评分检测小鼠脑缺血后行为学损伤，结果表明，EPZ5676可改善脑缺血小鼠行为学症状；TTC法检测小鼠脑缺血后脑梗死体积，结果表明，EPZ5676可减少脑梗死体积；免疫荧光法检测小鼠脑缺血后炎性指标、凋亡指标及链接指标的变化，结果显示，EPZ5676可降低炎性指标及凋亡指标的表达，升高链接指标的表达；Western blot法检测小鼠脑缺血后炎性蛋白、凋亡蛋白及链接蛋白的表达，结果显示，EPZ5676可降低炎性蛋白与凋亡蛋白的表达，升高链接蛋白的表达。

本发明中，体外通过OGD/R诱导大鼠原代皮质神经元细胞建立脑缺血模型，进行EPZ5676对脑缺血后神经元细胞的作用试验，免疫荧光结果显示，EPZ5676其能显著降低炎症指标与凋亡指标的表达；同时，Western blot结果显示，EPZ5676其能显著降低炎性蛋白与凋亡蛋白的表达，升高链接蛋白的表达；实验结果证实所述化合物EPZ5676对脑缺血疾病具有保护作用。

本发明属提供了化合物EPZ5676(C

附图说明

图1是诱导小鼠脑缺血模型，显示了EPZ5676明显减少脑梗死体积。

图2是诱导小鼠脑缺血模型，显示了EPZ5676明显降低凋亡指标的定位，降低凋亡相关蛋白表达。

图3是诱导小鼠脑缺血模型，显示了EPZ5676明显降低炎症指标的定位，降低炎症相关蛋白表达。

图4是诱导小鼠脑缺血模型，显示了EPZ5676明显促进链接指标的定位，促进链接相关蛋白表达。

图5是Western blot方法检测OGD/R损伤的原代神经元细胞的凋亡相关蛋白表达水平。

图6是Westernblot方法检测OGD/R损伤的原代神经元细胞的炎症相关蛋白表达水平。

图7是Westernblot方法检测OGD/R损伤的原代神经元细胞的链接相关蛋白表达水平。

图8是Immunofluorescence方法检测OGD/R损伤的原代神经元细胞的凋亡相关指标的表达。

图9是Immunofluorescence方法检测OGD/R损伤的原代神经元细胞的炎症相关指标的表达。

具体实施方式

实施例1EPZ5676对体外OGD/R损伤的原代神经元细胞的保护作用试验

分组：将原代培养的皮质神经元细胞随机分成5组，即：1)Sham组；2)I/R组；3)抑制剂10μM组；4)抑制剂20μM组；5)抑制剂40μM组。抑制剂提前给予4h，然后缺氧缺糖2h，在复氧4h，制备体外脑缺血模型。收集蛋白，用Westernblot法检测p53、PARP1、caspase3、caspase9、Bax、Bcl-2、iNOS、COX-2、VCAM-1、ZO-1、Claudin-1蛋白表达；爬片，用免疫荧光染色tunnel、caspase3、iNOS、VCAM-1指标。结果显示，EPZ5676能显著降低凋亡指标与炎症指标的表达；同时，降低炎性蛋白与凋亡蛋白的表达，升高链接蛋白的表达。

实验结果证明，所述的EPZ5676对OGD/R诱导的体外脑缺血模型有显著的保护作用，可制备抗脑缺血相关疾病的药物。

表1是诱导小鼠脑缺血再灌模型，EPZ5676明显改善行为学结果，

其中，Sham:假手术组；I/R:线栓制备的脑缺血再灌组；inhibitor:20mg/kg/dayEPZ5676，*:I/R和inhibitor组与Sham组相比，p<0.05；

表1.Bederson score.

实施例2EPZ5676对体内小鼠脑缺血模型的治疗作用

分组：体重21-24g雄性C57小鼠，1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后仰卧固定，开颈部正中皮肤，切口长约2cm。钝性分离皮下组织，暴露左侧颈总动脉(CCA)，向上依次分离暴露颈外动脉(ECA)与颈内动脉(ICA)，分别在颈总动脉，颈外动脉远心端挂线，活结结扎颈总动脉，死结结扎颈外动脉，然后在颈内动脉远心端挂线，用拉钩拉住。再在颈外动脉近心端挂线，打活结。然后在颈外动脉与颈内动脉“Y形”分叉处，用显微剪在偏颈外动脉处剪一小口，将线栓从切口处导入颈外动脉，顺势插入颈总动脉，然后拉紧结扎口，剪断一侧颈外动脉，在轻微牵拉颈外动脉残端，使得颈外动脉与颈内动脉在一条直线上，调整线栓角度，与颈前正中呈45°角水平向外的夹角。待线栓插入颈内动脉，移去颈内动脉的挂线，轻柔的将线栓导入颅内，遇阻力即停止，然后固定结扎线栓。剪去多余线栓，仅留1mm左右长的残端。移去颈总动脉的挂线，观察有无出血情况后，缝合切口。待梗塞1.5h后，打开切口，拔出线栓至颈外动脉与颈总动脉分支处。缝合皮肤，碘伏消毒后放置在笼中，全程注意保温，术后提供充足的水和食物。假手术组除不插线栓，其他操作与模型组相同。EPZ5676以2％DMSO+30％PEG300+5％吐温80+ddH