化合物EPZ5676及其相关抑制剂在制备治疗心肌纤维化疾病药物中的用途

摘要

本发明属制药领域，涉及化合物EPZ5676在制药中的新用途，具体涉及化合物EPZ567(C

说明书

技术领域

本发明属制药领域，涉及化合物EPZ5676在制药中的新用途，具体涉及化合物EPZ567(C₃₀H₄₂N₈O₃)及其相关抑制剂在制备治疗心肌纤维化疾病药物中的用途。

背景技术

现有技术公开了心肌梗死(myocardial infarction，MI)是因冠状动脉或其分支阻塞而引起的缺血性心肌病，可导致心室重构，并可逐步进展为心力衰竭，严重威胁人类的健康和生命。心肌纤维化(myocardial fibrosis，MF)是多种心脏疾病发展到一定阶段的共同病理改变，是最具特征性的结构改变之一，为MI后心室重构的主要表现之一，可促进心肌收缩和舒张功能失调。研究显示，心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CFs)的长期激活，即增强的胶原含量、肌成纤维细胞分化和伴随的细胞外基质分泌，可导致心肌纤维化。

研究公开了EPZ5676为有效的DOT1L组蛋白甲基化转移酶DOT1L抑制剂，在治疗MLL重排白血病与胚胎发育方面的研究居多；在所述的病理过程中，DOT1L所介导的H3K79位点的甲基化修饰的转移能对疾病发生发展过程中基因表达的活跃状态进行调控，实验结果也提示EPZ5676通过抑制DOT1L参与胶原沉积改善，对心肌纤维化效应进行调控。但迄今，尚未见EPZ5676对心肌纤维化具有治疗作用的报道。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供新的治疗心肌纤维化疾病的药物，具体涉及化合物EPZ5676及其相关抑制剂在制备治疗心肌纤维化疾病药物中的用途。

发明内容

本发明目的在于针对现有技术存在的缺陷，提供新的治疗心肌纤维化疾病的药物，具体涉及化合物EPZ5676及其相关抑制剂在制备治疗心肌纤维化疾病药物中的用途。

本发明所述的EPZ5676的分子式为：C₃₀H₄₂N₈O₃。

本发明采用C57BL/6J小鼠左冠状动脉前降支的心肌梗死模型进行实验研究，心脏超声检测心功能参数；western-blotting法检测EPZ5676对心肌胶原 (collagen)和效应蛋白结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达水平的影响；HE染色法检测EPZ5676对心脏梗死区及梗死边缘区形态学的影响；Masson染色法检测对梗死区及梗死边缘区胶原含量的影响，结果显示EPZ5676显著提高射血分数(EF％)和左室短轴缩短率(FS％)的值，减少心肌纤维化面积，并有效抑制collagen和CTGF的蛋白表达水平；本发明中通过体外建立组织生长因子(TGF-β)诱导的大鼠原代成纤维细胞(aCFs)心肌纤维化模型，检测EPZ5676对纤维化效应的影响，结果显示，化合物EPZ5676能显著抑制细胞胶原含量；免疫荧光法及western-blotting法检测结果显示，其能显著抑制TGF-β诱导的纤维化效应蛋白的表达，实验结果表明，所述化合物EPZ5676对原代心肌成纤维细胞的纤维化效应产生抑制。进一步，所述化合物EPZ5676及其相关抑制剂可制备治疗心肌纤维化疾病的药物。

附图说明

图1：EPZ5676对心功能的影响，

其中，sham:假手术组，model:左冠状动脉前降支结扎手术组，EPZ5676：左冠状动脉前降支结扎手术+EPZ5676给药组，15mg/kg/day。#:model组与sham组相比，p<0.05；*:EPZ5676组与model组相比，p<0.05。

图2：EPZ5676对心脏组织中纤维化效应蛋白表达水平的影响，

其中，sham:假手术组，model:左冠状动脉前降支结扎手术组，EPZ5676：左冠状动脉结扎手术+EPZ5676给药组，15mg/kg/day。

图3：EPZ5676对心脏梗死区及梗死边缘区的形态学影响，

其中，sham:假手术组，model:左冠状动脉前降支结扎手术组，EPZ5676：左冠状动脉结扎手术+EPZ5676给药组，15mg/kg/day。

图4：EPZ5676对心脏梗死区及梗死边缘区胶原含量的影响，

其中，sham:假手术组，model:左冠状动脉前降支结扎手术组，EPZ5676：左冠状动脉结扎手术+EPZ5676给药组，15mg/kg/day。

图5：EPZ5676对TGF-β诱导的aCFs细胞纤维化效应蛋白CTGF表达水平的影响，其中，control：正常对照组，model：模型组，EPZ5676:TGF-β+EPZ5676。

图6：EPZ5676对TGF-β诱导的aCFs细胞中胶原含量的影响，

其中，control：正常对照组，model：模型组，EPZ5676:TGF-β+EPZ5676。

图7：EPZ5676对TGF-β诱导的aCFs细胞中CTGF蛋白表达的影响，

其中，control：正常对照组，model：模型组，EPZ5676:TGF-β+EPZ5676。

具体实施方式

实施例1

本实施例表明了EPZ5676能明显提高心梗后EF％和FS％值，降低组织中胶原沉积，抑制心脏组织中纤维化效应蛋白的表达。

实验中，将体重25-30g雄性C57BL/6J小鼠，异氟烷气麻后仰卧固定，胸部备皮；于左侧胸腔第三、第四肋间开胸，用7-0号带线缝合针在左心耳和肺动脉圆锥之间，距主动脉根部约1mm处永久性结扎左冠状动脉前降支，观察到供血区域心肌变白为模型成功标准；常规关闭胸腔清洁后缝合皮肤，保温待小鼠清醒后给予水和标准饲料分笼饲养；假手术组除不结扎冠状动脉外，其余操作相同；EPZ5676以生理盐水溶解；随机分为假手术组(sham，生理盐水，ip.n＝6)，模型组(MI，生理盐水，ip.n＝6),模型+EPZ5676组(MI+EPZ5676，15mg/kg/day，ip.n＝6)，连续给药14天后，心脏超声法检测小鼠心功能，常规处理后取心脏4％多聚甲醛固定，包埋做石蜡切片，HE染色观察组织形态学，Masson染色法检测组织胶原含量；

结果显示，与模型组相比，EPZ5676组显著提高小鼠心脏EF％和FS％值(如图1所示)，Western-blotting结果提示EPZ5676显著降低纤维化效应蛋白CTGF的表达(如图2所示)，HE染色结果显示EPZ5676显著改善心梗边缘区残存的心肌细胞肥大、梗死区炎性细胞的侵润，使心肌组织排列整齐、边界清楚，细胞核大小均一(如图3所示)，Masson染色结果显示EPZ5676明显减少心脏梗死区及梗死边缘区的胶原沉积(如图4所示)。

实施例2.

本实施例表明了EPZ5676降低TGF-β诱导的aCFs细胞胶原含量及效应蛋白水平；

采用大鼠原代心肌成纤维细胞培养于含10％胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃，5％CO2孵箱中培养，当细胞汇合度达80-90％时传代，细胞种于24孔板，设置正常对照组(Control，无药物干预，不加TGF-β)，模型组(Model，无药物干预，TGF-β刺激48h),EPZ5676组(EPZ5676，25μM，提前4h预加后以TGF-β刺激)；免疫荧光法结果显示，EPZ5676能有效降低原代心肌成纤维细胞中胶原含量及效应蛋白的水平(如图5,图6所示)；细胞种于6孔板，各试验对照组以TGF-β诱导48h后裂解细胞收取蛋白，Western-Blotting法检测心肌纤维化效应蛋白CTGF，结果显示EPZ5676能明显降低纤维化效应蛋白的表达水平(如图7所示。