出血和CENTHAQUIN引起的复苏后内皮素受体的变化

摘要

本公开涉及用于治疗或预防肾损伤或衰竭的方法和组合物，包括给予内皮素B(ETB)受体激动剂和/或α2肾上腺素能剂。

说明书

相关申请的交叉引用

本申请根据35USC§119(e)要求2018年5月3日提交的美国临时专利申请62/666,675号和2018年5月25日提交的印度申请201841019588号的优先权，其公开内容整体以引用方式并入本文。

技术领域

本公开涉及用于治疗或预防肾损伤或衰竭的方法和组合物，包括给予内皮素B(ET

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背景技术

出血性休克常因迅速大量出血导致不充分的血液循环、灌注和氧合作用，引起多器官衰竭(Wu等.2009年)。随着出血的发作，可以启动多种补偿机制来保持氧合作用和组织血流。尽管使用静脉内液体进行复苏以恢复循环和氧气输送，但患者仍可能遭受不可逆的血液灌注损失、凝血病、体温过低、酸中毒、免疫抑制、全身性炎症、氧化应激、多器官衰竭和死亡(Acosta等，1998；Jacob和Kumar，2014)。出血性休克导致的死亡通常发生在很早的时候，大部分发生在入院的前6个小时内(Shackford等，1993)。

内皮素(ET)是一种内源性21个氨基酸的肽，大约在三十年前从猪主动脉内皮细胞中分离出来(Yanagisawa等，1988)。共有三种不同的异构肽：ET-1、ET-2和ET-3，它们存在于多种哺乳动物组织中，发挥着多种生理和病理作用，例如调节血压和灌注、凋亡以及细胞增殖和迁移(Ehrenreich等，2000；Inoue等，1989；Vidovic等，2008；Yanagisawa等，1988)。ET肽通过激活G蛋白偶联受体ET

发明内容

在一些方面，本公开内容涉及ET

在进一步的方面，本公开内容涉及将ET

在一些方面，本公开内容提供了通过向有需要的个体施用治疗有效量的内皮素B(ET

在一些实施方案中，肾损伤或衰竭是急性的。在进一步的实施方案中，肾衰竭是由暴露于放射造影剂、非甾体抗炎药(NSAID)、抗生素、化学治疗剂、利华单抗诱导的急性肉芽肿性肾小管间质性肾炎或肾毒性药物引起的。在一些实施方案中，急性肾衰竭是由严重疾病、心输出量减少、创伤、血液氧合减少、由于对另一器官的损伤的反应引起的全身毒性、由心肾综合征、心脏手术或急性失代偿性心力衰竭引起的全身性低血压、由于出血造成的循环体积降低、败血性休克、低血容量性休克、严重登革热、外科手术、横纹肌溶解、或肝肾综合征或肝移植引起的局部肾血流量减少、或腹泻、呕吐、利尿剂或出汗过多引起的脱水引起的循环量减少。

在一些实施方案中，个体的肾小球滤过率提高。在其他实施方案中，个体的血清肌酐水平降低。

在一些方面，本公开内容提供了一种组合物，其包含(a)内皮素-B(ET

在其他方面，本公开内容提供一种制品，其包括：(a)包装的组合物，其包含内皮素-B(ET

在一些方面，本公开内容提供了一种治疗患有急性肾功能下降的个体的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的包含centhaquin或其盐的组合物。在一些实施方案中，急性肾功能下降与急性肾衰竭相关。在一些实施方案中，肾功能急性下降的原因是由于流向肾的血流量减少而造成的肾前性，在肾内的组织被直接破坏的情况下的内在性，以及在尿流被阻塞时的肾后性。在一些实施方案中，急性肾衰竭由以下引起或与以下相关：由严重疾病、心输出量减少、创伤、血液氧合减少、由于对另一器官的损伤的反应引起的全身毒性、由心肾综合征、心脏手术或急性失代偿性心力衰竭引起的全身性低血压、由于出血造成的循环体积降低、败血性休克、低血容量性休克、严重登革热、外科手术、横纹肌溶解、或肝肾综合征或肝移植引起的局部肾血流量减少、由药物、放射性造影剂、非甾体抗炎药(NSAID)、抗生素或化学治疗剂引起的肾毒性、或腹泻、呕吐、利尿剂或出汗过多引起的脱水引起的循环量减少。

在一些方面，本公开内容提供了一种治疗患有肾损伤的个体的方法，该方法包括施用有效量的包含centhaquin或其盐的组合物。在一些实施方案中，肾损伤是由缺血事件或缺血再灌注事件引起的。在进一步的实施方案中，该盐是柠檬酸盐、丙酮酸盐或乳酸盐。在一些实施方案中，以大约0.0001mg/kg至大约1.0mg/kg的剂量施用centhaquin或其盐。在进一步的实施方案中，centhaquin或其盐以单剂量或多剂量施用。

附图说明

图1显示了出血对假对照和出血的大鼠的平均动脉压、心率、心输出量和全身血管阻力的影响。用高渗盐水或centhaquin使出血大鼠复苏。该值表示为平均值±SEM(n＝5)。*与基线相比p<0.05，

图2描述了出血对假对照和出血大鼠中ET

图3显示了出血对假对照和出血大鼠中ET

图4显示了出血对假对照和出血大鼠的血浆TNF-α、IL-6和IL-10的影响。用高渗盐水或centhaquin使出血大鼠复苏。该值表示为平均值±SEM(n＝5)。*与假对照相比p<0.05，

图5显示了出血对大量出血的雄性大鼠的肾血液灌注的影响。用载剂(盐水)或低剂量centhaquin(0.01mg/kg)或高剂量centhaquin(0.1mg/kg)使出血大鼠复苏。该值表示为平均值±SEM(n＝5)。*与出血相比p<0.05，#与载剂(盐水)相比p<0.05。

图6显示了出血对大量出血雌性大鼠的肾血液灌注的影响。用载剂(盐水)或低剂量centhaquin(0.01mg/kg)或高剂量centhaquin(0.1mg/kg)使出血大鼠复苏。该值表示为平均值±SEM(n＝5)。*与出血相比p<0.05，#与载剂(盐水)相比p<0.05。

图7显示了实验结果，其中使用氨基甲酸乙酯麻醉雄性大鼠，对股静脉进行插管以进行药物施用，对股动脉进行插管以测量平均动脉压(MAP)，并将激光多普勒血流探头置于肾髓质中测量血液灌注。通过抽血使MAP维持在35mmHg 30分钟来引发出血性休克。进行去甲肾上腺素输注以使MAP维持在70mmHg。在诱发休克前，休克(出血)后30分钟以及复苏后15、30、45、60、75和90分钟测量了centhaquin对心血管功能的影响。与复苏后的载剂对照相比，centhaquin改善了出血的雄性大鼠的肾血液灌注。去甲肾上腺素引起的血管收缩的不良反应可以被centhaquin减轻。

图8显示了实验结果，其中用氨基甲酸乙酯麻醉雌性大鼠，对股静脉进行插管以进行药物施用，对股动脉进行插管以测量平均动脉压(MAP)，并将激光多普勒血流探头置于肾髓质中测量血液灌注。通过抽血使MAP维持在35mmHg 30分钟来引发出血性休克。进行去甲肾上腺素输注以使MAP维持在70mmHg。在诱发休克前，休克(出血)后30分钟以及复苏后15、30、45、60、75和90分钟测量了centhaquin对心血管功能的影响。与复苏后的载剂对照相比，centhaquin改善了出血雌性大鼠的肾血液灌注，并且观察到实验结束前血液灌注得到改善。去甲肾上腺素引起的血管收缩的不良反应可以被centhaquin减轻。

图9显示了对因过度出血引起的低血容量性休克的作为复苏剂的centhaquin进行II期研究的结果，其中确定了患者在研究中入院时(基线)和出院时(研究结束)的收缩压和舒张压。中期分析显示，接受centhaquin治疗的患者的血压升高大于对照组的血压升高。这些结果表明，centhaquin是一种有效的复苏剂，可改善低血容量性休克患者的预后。

图10显示了由于过度出血引起的低血容量性休克的作为复苏剂的centhaquin的II期研究结果，其中所有受试者均接受了标准的护理以及标准的休克治疗。然后将患者随机分配到接受标准治疗和生理盐水治疗的对照组，或接受标准治疗和centhaquin联合治疗的centhaquin组。患者在研究中入院时(基线)和出院时(研究结束)确定血清肌酐水平。根据批准的方案进行的中期分析显示，对照组中的血清肌酐水平降低了25.35％，接受centhaquin治疗的患者中血清肌酐水平降低了42.61％。数据表明，与标准治疗相比，centhaquin使血清肌酐水平降低了17.26％。

图11显示了由于过度出血引起的低血容量性休克的作为复苏剂的centhaquin的II期研究结果，所有受试者均接受了标准的护理以及标准的休克治疗。然后将患者随机分配到接受标准治疗和生理盐水治疗的对照组，或接受标准治疗和centhaquin联合治疗的centhaquin组。患者在研究中入院时(基线)和出院时(研究结束)确定了血液尿素氮。根据批准的方案进行的中期分析显示，对照组和centhaquin治疗患者的血尿素氮相似。

图12显示了由于过度出血引起的低血容量性休克的作为复苏剂的centhaquin的II期研究结果，所有受试者均接受了标准的护理以及标准的休克治疗。然后将患者随机分配到接受标准治疗和生理盐水治疗的对照组，或接受标准治疗和centhaquin联合治疗的centhaquin组。患者在研究中入院时(基线)和出院时(研究结束)确定肾小球滤过率。根据批准的方案进行的中期分析显示，对照组中的肾小球滤过率提高了40.00％，接受centhaquin治疗的患者肾小球滤过率提高了81.52％。数据表明，与标准治疗相比，通过centhaquin使肾小球滤过率增加了41.52％。

具体实施方式

已经确定，低剂量的centhaquin(2-[2-(4-(3-(甲基苯基)-1-哌嗪基)]乙基-喹啉)柠檬酸盐可显著降低血乳酸，并增加出血性休克的平均动脉压(MAP)、脉搏血压(PP)和心输出量(CO)(Gulati等，2012；Gulati等，2013；Lavhale等，2013；Papapanagiotou等，2016)。在将centhaquin和现有复苏剂分为3个不同的类别之间进行了比较研究(见实施例2)：(a)液体，例如乳酸林格氏液，高渗盐水；(b)肾上腺素能药物，例如去甲肾上腺素，以及(c)新鲜血液。使用(i)恒压出血的大鼠模型，(ii)创伤失控的兔子模型以及(iii)大量出血的猪模型的结果表明，centhaquin在降低低血容量性休克后的死亡率方面非常有效(Gulati等，2012年；Gulati等，2013年；Lavhale等，2013年；Papapanagiotou等，2016年)。与其他复苏剂(升压药)不同，centhaquin通过增加中风体积(SV)和CO来增加MAP；并降低心率和全身血管阻力(SVR)。

出血性休克期间血浆ET-1水平升高以及流向肾和肺部的血流减少(Chang等，1993；Edwards等，1994)。出血性休克后肺和肾血流的减少，导致ET-1清除率降低，可能是循环血浆ET-1增加的原因，这在维持血管紧张度和组织血液灌注中起着重要作用(Chang等，1993)。出血性休克后循环中的ET-1可能通过作用于ET

Centhaquin目前在临床开发中正作为复苏剂用于出血性休克。不希望受到理论的束缚，所提出的机制是中心肽作用于静脉

肾损伤/衰竭

急性肾衰竭是肾在不损失电解质的情况下突然丧失过滤废物的能力。多数情况下，急性肾衰竭(也称为急性肾损伤或AKI)是由到肾的血液流量减少引起的(肾前性急性肾衰竭)，不过约20％的病例是由于感染或毒素直接影响肾引起的(内在性ARF)，并且约10％是由于肾下游的阻塞(肾后性阻塞)所致。重症监护患者的急性肾损伤(AKI)患病率很高。早期发现可能会阻止患者发展为慢性肾疾病，并需要进行肾置换治疗。在大多数住院患者中，急性肾衰竭是由缺血性和/或肾毒性损伤导致的急性肾小管坏死引起的。肾血流灌注不足是由低血容量性、心源性和败血性休克引起的，由施用血管收缩药或肾血管损伤引起的。肾毒素包括外源性毒素，例如造影剂和氨基糖苷，以及内源性毒素，例如肌红蛋白。研究表明，在大多数人类急性肾衰竭病例中，肾组织中的细胞凋亡是突出的，凋亡细胞死亡的主要部位是远端肾单位。在缺血性损伤的初始阶段，肌动蛋白细胞骨架的完整性丧失会导致上皮变平、刷状缘的丧失、局灶性细胞接触的丧失、以及随后细胞与下层基质的脱离。已经提出凋亡小管细胞死亡可能比坏死性细胞死亡更能预测功能改变(Komarov等，1999；Supavekin等，2003)。有发展缺血性急性肾衰竭风险的个体包括具有糖尿病、潜在的肾功能不全、肾病综合征、老年、动脉粥样硬化疾病、肾毒性药物接受者、败血症、低血压个体、低氧个体、手术前、肌红蛋白尿血尿、与妊娠相关的急性肾衰竭和肝病的个体。

急性肾损伤的特征在于选自由以下组成的组的至少一种病况：血清肌酐比基线增加至少50％，血清肌酐绝对增加超过基线至少0.3mg/dL，肾小球滤过率与基线相比减少至少为25％，和尿排出量减少至每小时每公斤体重0.5ml或更少并持续至少6小时。

社区获得性急性肾衰竭(ARF)的发生率仅为每百万人口约100例，死亡率为7％。已公布的ARF发病率占所有住院病人的1％至13％(美国为34×10

急性肾损伤可能涉及由以下引起的或与之相关的肾前性肾损害：导致流向肾的总血流量减少的心排血量减少，创伤，血液氧合减少，对另一器官损伤的反应引起的全身毒性，由心肾综合征或急性失代偿性心力衰竭引起的系统性低血压，出血引起的循环量减少，外科手术或肝肾综合征导致的局部肾血流量减少。

在一项研究中，急性肾损伤在整个人群中占52.6％(n＝8270)，在年轻成年人群(16-25岁)中占39.8％。对于年轻的成年年龄组，糖尿病、入院的手术原因、疾病的严重程度、低血压和某些药物(万古霉素和钙调神经磷酸酶活性剂)均与急性肾损伤独立相关。急性肾损伤是住院时间更长、重症监护病房死亡率和出院后死亡率的重要预测指标。因此，急性肾损伤是常见事件，与住院时间延长和高死亡风险相关(Fuhrman等，2018)。

使用2001年National Hospital Discharge Survey，Liangos等(2006)发现，所有医院出院的1.9％均显示了ARF代码，相当于美国的646,000的发生率。死亡率为21.3％。作者通过检查2001年从St.Elizabeth's(Boston)出院的所有13,237名患者来验证了这项研究。值得注意的是，有2.6％的患者有ARF代码，但实验室数据显示有12％的患者经历过ARF。因此，ARF代码仅在大约20％的发生率上出现(大概是最严重的情况)(Liangos等，2006)。

急性肾衰竭的治疗方法是在等待肾恢复的同时，给予补液以逆转血容量不足并清除毒素。在某些情况下，患者保留了过多的水，或他们的电解质平衡达到需要透析的程度。急性肾衰竭患者最常见的死亡原因是心力衰竭、败血症和呼吸衰竭。从急性肾衰竭中恢复的患者在接下来的5年和10年中死亡和慢性肾疾病的几率增加。在动物中表现出前景的数十种新疗法和药物已在急性肾衰竭患者中进行了临床测试，但在随机临床试验中均未显示出任何益处。测试的一些治疗方法包括增加尿液流量的利尿剂、多巴胺和增加肾血流量的心房利钠肽(ANP)、保护小管上皮细胞的许多细胞保护剂，例如自由基清除剂、热休克蛋白、血红素加氧酶、黄嘌呤氧化酶活性剂、前列腺素和钙通道阻滞剂，以及加快近端小管的恢复的几种生长因子(Allgren等，1997；Hirschberg等，1999)。

在以下情况后有急性肾损伤的报道：心脏手术；肝移植；严重登革热；败血性休克；低血容量性休克；肾毒性药物，例如静脉造影、万古霉素、哌拉西林-他唑巴坦联合万古霉素、粘菌素、尼古鲁单抗诱导的急性肉芽肿性肾小管间质性肾炎、抗癌药物、顺铂引起的急性肾损伤；重症实体瘤患者；黎石病引起的急性肾损伤；横纹肌溶解症。

进行了研究以确定centhaquin对肾髓质血流的影响，结果表明严重的出血产生肾髓质血流的减少和肾灌注的恶化，导致缺血和肾衰竭(Gulati等，2016a；Gulati等，2017)。众所周知，外侧肾髓质具有更高的代谢需求，并且大约33％的过滤后的氯化钠会被Henle环的厚上升支重新吸收(Cowley 2008)。因此，该区域在过度出血后极易发生缺氧或缺血性损伤。

内皮素

内皮素(ET)是一种内源性肽，可作用于两个不同的G蛋白偶联受体ET

内皮素B(ET

本公开内容考虑了内皮素B(ET

IRL-1620[N-琥珀酰-[Glu

根据本公开，可以以0.0001至0.5mg/kg的剂量施用ET

在各种实施方案中，以1至6小时的间隔向患者重复施用ET

Centhaquin

Centhaquin是一种α-2受体激动剂和心血管活性剂，已显示出产生正性肌力作用并增加了离体的灌注兔心脏的心室收缩(Bhatnagar等，1985)。centhaquin的直接或间接正性肌力作用可能导致心输出量(CO)升高。在针对出血性休克的猪模型进行的一项研究中，发现在液体复苏阶段施用的centhaquin(0.015mg/kg)可增加CO，降低全身血管阻力(SVR)，需要较小体积的液体进行复苏，与乳酸林格氏(LR)相比，存活率明显提高(Papalexopoulou等，2017；Papapanagiotou等，2016)。在另一项研究中，以出血量1/5施用centhaquin可使出血大鼠的平均动脉压(MAP)维持更长的时间，并提高了存活率(Gulati等，2013)。在出血性休克的大鼠模型中，centhaquin显著改善了CO，降低了血乳酸并改善了生存(Gulati等，2012；Lavhale等，2013)。Centhaquin的半衰期约为1小时，并且分布量大(Gulati等，2016；O'Donnell等，2016a；O'Donnell等，2016b)。成功的化学、制造和控制以及小鼠、大鼠和狗的毒理学研究导致成功完成了实验性centhaquin的人I期研究。这项研究是在24位人类受试者中进行的，发现centhaquin是安全的并且耐受性良好(Gulati等，2016)。目前，正在对患有出血性休克的人进行多中心II期研究(CTRI/2017/03/008184)。

可以预期的是，除了centhaquin，其它α

α

优选的盐是有机酸的盐，例如柠檬酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、富马酸盐、马来酸盐、抗坏血酸盐、乳酸盐、葡萄糖酸盐、二甘氨酸盐和天冬氨酸盐。更优选的盐是柠檬酸盐、乳酸盐或酒石酸盐。

相对于每千克被治疗个体的重量(mg/kg)，centhaquin作为游离碱的施用量可以为0.001至小于0.05mg，优选约0.003至约0.04mg/kg，更优选约0.005至约0.03mg/kg。更具体地讲，作为游离碱的centhaquin以mg/kg计的施用剂量为0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.011、0.012、0.013、0.014、0.015、0.016、0.017、0.018、0.019、0.020、0.021、0.022、0.023、0.024、0.025、0.026、0.027、0.028、0.029、0.030、0.031、0.032、0.033、0.034、0.035、0.036、0.037、0.038、0.039、0.040、0.041、0.042、0.043、0.044、0.045、0.046、0.047、0.048、或0.049，以及其中的所有范围和子范围。

centhaquin也可以以盐的形式施用，例如centhaquin柠檬酸盐，以实现本发明方法的益处。centhaquin柠檬酸盐的施用量为约0.0001至大约1.5mg/kg，优选约0.0002至大约0.8mg/kg，并且更优选约0.0004至约0.5mg/kg。在一些实施方案中，centhaquin柠檬酸盐以约0.0001至约1.0mg/kg的量施用。更特别地，centhaquin柠檬酸盐的施用剂量以mg/kg计(centhaquin柠檬酸盐)可以为任何以下剂量：0.0001、0.0002、0.0003、0.0004、0.0005、0.0006、0.0007、0.0008、0.0009、0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.011、0.012、0.013、0.014、0.015、0.016、0.017、0.018、0.019、0.020、0.021、0.022、0.023、0.024、0.025、0.026、0.027、0.028、0.029、0.030、0.031、0.032、0.033、0.034、0.035、0.036、0.037、0.038、0.039、0.040、0.041、0.042、0.043、0.044、0.045、0.046、0.047、0.048、0.049、0.05、0.051、0.052、0.053、0.054、0.055、0.06、0.065、0.07、0.075、0.08、0.085、0.09、0.095、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4，或1.5，以及其中的所有范围和子范围。

在一些实施方案中，α

复苏液的施用体积量最多是个体损失的液体(例如血液、血浆、水)体积量的三倍。在一些实施方案中，以小于和等于个体损失的流体的体积量的量来施用复苏液，例如损失流体的体积量的5％，优选10％或20％，并且至多为100％。

组合物/施用

在一些方面，本公开内容提供了用于治疗肾损伤或肾衰竭的组合物，其包含治疗有效量的ET

在一些方面，本公开内容提供了用于治疗急性肾功能下降或肾损伤的组合物，其包含治疗有效量的centhaquin或其盐，其中以约0.0001mg/kg至约1.0mg/kg的剂量施用治疗有效量的centhaquin或其盐。在一些实施方案中，该centhaquin盐是centhaquin柠檬酸盐。

本公开的药物组合物包括其中以有效量施用活性成分以实现其预期目的的那些。更具体地说，“治疗有效量”是指有效治疗或预防肾损伤或衰竭或治疗急性肾功能下降的量。治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内，尤其是根据本文提供的具体实施方式。

“治疗有效剂量”是指导致达到所需效果的活性剂的量。所述活性剂的毒性和治疗功效可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药学程序测定，例如，测定LD

为了以本文公开的方法向人施用，对于普通的成年患者(70kg)，每天口服约0.01mg-约200mg的centhaquin，通常每天分为两至三剂。因此，对于典型的成年患者，单独的片剂或胶囊剂在合适的药学上可接受的载体或载体中包含约0.1至约200mg的centhaquin，以每天一次或多次的单剂量或多剂量给药。静脉、颊或舌下施用的剂量通常根据需要为每单剂量约0.1至约10mg/kg。在实践中，医生确定最适合于个体患者的实际给药方案，其可以随着特定患者的年龄、体重和反应而变化。上述剂量是平均情况的示例，但可以存在其中应为更高或更低剂量的个别情况，并且这些都在本公开的范围内。

如以上在本文中进一步详细讨论的，对于普通的成年患者，ET

本公开的活性剂通常单独施用或与药物载体混合施用，所述药物载体是根据预期的施用途径和标准药学实践来选择的。根据本公开使用的药物组合物因此可以利用一种或多种生理学上可接受的载体以常规方式配制，所述载体包括有助于加工活性剂为制剂的赋形剂和/或助剂。

这些药物组合物可以通过例如常规的混合、溶解、粒化、制糖衣、乳化、包封、包覆或冻干方法制造。合适的制剂取决于所选的施用途径。当口服施用治疗有效量的活性剂时，组合物通常呈片剂、胶囊、粉末、溶液或酏剂的形式。当以片剂形式施用时，所述组合物另外可以含有固体载体，例如明胶或佐剂。片剂、胶囊剂和粉末含有约5％至约95％的本发明的活性剂，优选约25％至约90％的本发明的活性剂。当以液体形式施用时，可以加入液体载剂，如水、石油或动物或植物来源的油。液体形式的组合物可以进一步含有生理盐水溶液、右旋糖或其它糖溶液或二醇。当以液体形式施用时，按重量计，组合物含有约0.5％到约90％的活性剂，并且优选地约1％到约50％的活性剂。

当通过静脉内、皮肤或皮下注射施用治疗有效量的活性剂时，该组合物是无热原的肠胃外可接受的水溶液形式。在适当考虑pH、等渗性、稳定性等的情况下这类肠胃外可接受的溶液的制备在本领域的技术范围内。除本公开的化合物外，用于静脉内、皮肤或皮下注射的优选组合物通常还包含等渗载剂。

合适活性剂可以容易地与本领域熟知的药学上可接受的载体组合。这类载体使得活性剂能够配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等，以用于待治疗患者的口服。可以通过以下方式获得口服的药物制剂，在活性剂中加入固体赋形剂，任选地研磨所得混合物，并在需要时加入合适的助剂后加工颗粒混合物，以获得片剂或糖衣丸核心。合适的赋形剂包含例如填充剂和纤维素制剂。如果期望，可以加入崩解剂。

活性剂可以调配用于通过注射，例如通过推注或连续输注进行肠胃外施用。用于注射的制剂可以以单位剂型存在于例如添加有防腐剂的安瓿或多剂量容器中。该组合物可以采取诸如油性或水性载剂中的悬浮剂、溶液或乳剂的形式，并且可以含有配制剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。

用于肠胃外施用的药物组合物包含水溶形式的活性剂的水溶液。另外，活性剂的悬浮剂可以制备成适当的油性注射悬浮剂。合适的亲脂性溶剂或载剂包括脂肪油或合成脂肪酸酯。水性注射悬浮液可以含有增加悬浮液粘度的物质。任选地，悬浮液还可以含有合适的稳定剂或增加化合物的溶解度，并且允许制备高浓度溶液的试剂。作为选择，本公开的组合物可以是粉末形式，用于在使用前用合适的载剂(例如无菌无热原水)构建。

活性剂还可以调配成直肠组合物，如栓剂或保留灌肠剂，其例如含有常规栓剂基质。除了先前描述的制剂之外，活性剂还可以配制成长效制剂。这类长效配制物可以通过植入(例如，皮下或肌内)或通过肌内注射施用。因此，例如，活性剂可以用合适的聚合或疏水材料(例如，作为可接受油中的乳剂)或离子交换树脂配制，或作为难溶衍生物，例如，难溶盐。

特别地，活性剂可以以含有赋形剂(例如淀粉或乳糖)的片剂的形式、或者以胶囊或珠的形式(单独或与赋形剂混合)，或以含有调味剂或着色剂的酏剂或悬浮剂形式口服、颊或舌下施用。这类液体制剂可以用药学上可接受的添加剂，例如悬浮剂制备。活性剂也可以肠胃外注射，例如静脉内、肌肉内、皮下、鞘内、脑池内或冠状内注射。对于肠胃外施用，活性剂最好以无菌水溶液的形式使用，其可以含有其它物质，例如盐或单糖，例如甘露醇或葡萄糖，以使溶液与血液等渗。

对于兽医用途，根据正常兽医实践，将活性剂以适当可接受的制剂形式施用。兽医可以容易确定最适合特定动物的给药方案和施用途径。

实施例

以下实施例研究了出血性休克和centhaquin复苏对各种组织中的内皮素(ET

内皮素-1(ET-1)作用于ET

实施例1

方法

动物在使用之前，将Sprague-Dawley雄性大鼠(340至380g)(Envigo,Indianapolis,IN)在受控温度(23±1℃)、湿度(50±10％)和光照(6：00AM到6:00PM)饲养。食物和水不断供应。动物护理和用于实验程序的用途已获得Midwestern University机构动物保护和使用委员会的批准。所有麻醉和手术程序均符合动物保护委员会制定的指导原则。

药品和化学品在Pharmazz India Private Limited,Greater Noida,India合成了centhaquin柠檬酸盐(PMZ-2010)。使用氨基甲酸酯(氨基甲酸乙酯)(Sigma-Aldrich StLouis,MO,USA)，高渗盐水注射剂USP(Hospira,Inc,Lake forest IL,USA)，和肝素钠注射剂(APP Pharmaceuticals,LLC,Schaumburg,IL,USA)。内皮素-1酶免疫分析试剂盒(目录号900-020A，Assay Designs,Inc.,Ann Arbor,MI,USA)、IL-6ELISA试剂盒(目录号KRC0061，Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)、IL-10ELISA试剂盒(目录号KRC0101，InvitrogenCorporation,Carlsbad,CA)和TNFαELISA试剂盒(目录号ER3TNFA，Thermo Scientific,Rockford,IL)用于各种评估。

心血管反应的测定用溶于等渗盐水中的氨基甲酸酯麻醉动物。通过腹膜内注射以每千克体重1.5g的剂量施用氨基甲酸酯。选择氨基甲酸酯作为麻醉剂是因为它可产生持久的麻醉(8-10小时)，并且心血管和呼吸系统的压抑程度最小。它产生一定程度的外科麻醉，其特点是可以保护心血管反射(Maggi and Meli，1986)。简而言之，麻醉的大鼠是固定在配有可控加热垫的手术板上。血Po

动脉血气和碱缺乏的测定在诱发休克前、诱发休克后30分钟、以及在载剂或centhaquin复苏后30和60分钟监测基线动脉血pH值、Po

SBD＝0.9287×[HCO

出血性休克的诱发通过以大约0.5到1mL/min的速度从股动脉中抽血直至MAP达到35mmHg来诱发出血。如有必要，可通过进一步抽血将该MAP维持30分钟。本研究中使用的出血性休克模型是建立良好的可处理压力性出血的啮齿动物模型(Buehler等，2000；Gulati等，1997a；Gulati和Sen，1998)。每只出血大鼠的量约为8.0ml，并且在各组中出血量相似，约占总血液的40％。在各组中测得的血细胞比容水平相似。抽血的时间约为15分钟。

实验设计为了确定出血性休克中centhaquin对心血管系统和血浆细胞因子的复苏作用，将大鼠随机分为五组，第1组：假对照组(无出血)(n＝5)，第2组：无复苏的出血(n＝5)；第3组：出血，然后用3％高渗盐水(载剂)进行复苏(n＝5)；第4组：出血，然后用载剂加centhaquin(0.017mg/kg)进行复苏(n＝5)；和第5组：出血，然后用载剂加centhaquin(0.05mg/kg)进行复苏(n＝5)。诱发出血性休克后30分钟使用输液泵(Harvard ApparatusInfusion/Withdrawal Pump,Millis,MA)通过股静脉静脉滴注(1mL/min)开始复苏。在复苏的30分钟时收集用于生化估计的血样，并监测心血管参数直至60分钟后处死动物。复苏溶液的体积保持等于出血的体积。虽然，这并不代表典型的人复苏，但选择此体积是为了最大程度地减少混杂因素，并允许更准确地确定centhaquin的复苏作用。

血浆中ET-1水平的测定为了分析出血后再进行centhaquin复苏后血浆ET-1的变化，在复苏后30分钟从各组大鼠收集血液样本，并将其收集到含抑肽酶(500KIU.mL

ET

测定血浆中IL-6、IL-10和TNF-α的水平使用市售的大鼠酶联免疫吸附测定试剂盒估计血浆IL-6、IL-10和TNF-α的水平：IL-6(Invitrogen Corporation，检测下限为5pg/ml；对大鼠IL-6高度特异性，与其他细胞因子无交叉反应)，IL-10(Invitrogen Corporation，检测下限为5pg/ml；对大鼠IL-10高度特异性，与其他细胞因子无交叉反应)，和ELISA试剂盒(Thermo Scientific，检测下限为15pg/ml；对大鼠TNF-α具有高度特异性，与其他细胞因子无交叉反应性)用于各种评估。根据制造商提供的方案，使用事先未解冻的血浆样品进行所有测定。

统计分析使用GraphPad Instat-2.00进行了功效分析。功效设置为80％(β＝0.8)，使用的显著性水平(α)为0.05。功效分析表明，当显著性水平α＝0.05时，每组5个心血管样本量和4个生化评估样本量足以达到80％的功效。数据表示为平均值±SEM。差异的显著性是通过对方差的单向分析，然后进行事后检验(Bonferroni方法)来估计。P值小于0.05被认为是显著的。统计分析使用GraphPad Prism 7.00(GraphPad，San Diego,CA,USA)进行。

结果

centhaquin对出血性大鼠的动脉血pH、pO

在整个实验期间，对照组大鼠的血细胞比容百分比没有变化，而出血后血细胞比容显著降低(p<0.001)。出血大鼠在用高渗盐水或0.017和0.05mg/kg剂量的centhaquin复苏后，显示治疗后血细胞比容没有变化。

在整个实验期间，对照组大鼠的血液乳酸水平没有变化，而出血后乳酸水平显著增加(p<0.001)。与高渗盐水组相比，出血大鼠在用0.017和0.05mg/kg剂量的centhaquin复苏时，显示出血乳酸水平显著降低(p<0.001)(表1)。在实验期间，对照组大鼠的碱缺乏没有变化。诱发出血后，碱缺乏明显增加(p<0.001)，不受高渗盐水复苏的影响。另一方面，与高渗盐水(-16.3±1.3)相比，用0.017和0.05mg/kg剂量的centhaquin复苏的大鼠的碱缺乏显著降低(分别为-12.0±0.2和-11.6±0.5)(p<0.001)(表1)。未复苏的出血大鼠不能存活到到60分钟，因此在该时间点无法获得任何数据。

表1.centhaquin对出血大鼠的血细胞比容、动脉血pH、pCO

centhaquin对出血大鼠的平均动脉压和心率的影响。对照大鼠在实验期间未显示任何MAP变化。诱导出血后，所有治疗组的MAP均显著降低(p<0.001)。用高渗盐水复苏的出血大鼠在复苏后30或60分钟未显示MAP的任何改善。用centhaquin(0.017和0.05mg/kg)复苏的大鼠在复苏后至少60分钟内显示MAP显著增加(p<0.01)(图1)。出血前，所有组的基线HR约为345次/分钟。出血使HR略有增加(约372次/分钟)。在高渗盐水中复苏的大鼠中，在60分钟时HR下降至353±11次/分钟，而在以0.017和0.05mg/kg剂量的centhaquin复苏的大鼠中，HR分别为361±10和363±10(图1)。高渗盐水或centhaquin复苏后观察到HR无明显差异。

centhaquin对出血大鼠的心输出量和全身血管阻力的影响。所有组出血后CO均显著降低。用高渗盐水和centhaquin复苏的出血大鼠均会显著增加CO(图1)。与单独使用高渗盐水相比，在复苏后30分钟和60分钟时，使用Centhaquin复苏显著增加了CO。出血后SVR从148±5dyne*sec/cm

centhaquin对出血大鼠的血浆ET-1水平的影响。基线血浆ET-1水平为13.6±0.87pg.ml

centhaquin对出血大鼠的ET

centhaquin对出血大鼠ET

centhaquin对出血大鼠的血浆IL-6、IL-10和TNF-α水平的影响。为了进一步评估centhaquin治疗是否会影响炎症反应，我们在大鼠血浆中测量了一组选择的细胞因子。总体而言，所有采用或没采用高渗盐水和centhaquin复苏的出血大鼠的血浆IL-6、IL-10和TNF-α均升高。出血性休克和高渗盐水复苏后的TNF-α和IL-6水平高于假对照组。与单独的高渗盐水相比，Centhaquin进一步增加(p<0.01)TNF-α和IL-6的水平。出血性休克和高渗盐水或centhaquin复苏后，大鼠之间的血浆IL-10差异无统计学意义(图4)。

讨论

centhaquin显著降低血液中的乳酸并恢复MAP并增强高渗盐水的复苏作用，从而证实了先前的发现(Gulati等，2012；Gulati等，2013；Lavhale等，2013；Papapanagiotou等，2016)。单独使用高渗盐水或与centhaquin配合使用，对出血性休克和复苏对不同组织中的ET

血管ET

另一方面，据报道出血性休克后血浆ET-1水平升高是维持血压的补偿机制(Chang等，1993；Edwards等，1994；Gulati等，1997b；Sharma等，2002)。还发现，ET-1的前体改善严重出血大鼠中基于血红蛋白的血液替代性联阿司匹灵交联的血红蛋白的复苏作用(Gulati等，1995)。在正常大鼠中，ET-1产生双阶段反应：最初的短暂下降，随后血压持续升高(Gardiner等，1994；Yanagisawa等，1988)但是，在出血的大鼠中，ET-1产生单阶段效应，其中仅观察到血压升高以及存活率提高(Jochem等，2003)。ET-1在出血大鼠中的复苏作用是通过ET

ET受体相互之间以及与肾上腺素发生串扰。在存在ET

在此证明，在肾髓质中，出血性休克后ET

肾髓质ET

在本研究中，发现出血增加了ET-1、TNF-α、IL-6和IL-10的血浆浓度。用高渗盐水复苏不会改变血浆ET-1、TNF-α、IL-6或IL-10。然而，centhaquin显著增加了血浆ET-1、TNF-α和IL-6，却不影响血浆IL-10的浓度。在杂种犬中进行的一项研究发现，出血后血浆ET-1水平升高，这与出血量相关(Chang等，1993)。ET-1增加超氧阴离子的产生和细胞因子的分泌(Kowalczyk等，2015；Virdis和Schiffrin 2003)以及转录因子(例如NF-κB)的激活和促炎性细胞因子(例如TNF-α、IL-1和IL-6)的表达。相应地，已经证明细胞因子可以调节ET-1的分泌(Breuiller-Fouche等，2005；Yeager等，2012)。

出血性休克损害了新陈代谢、细胞和炎症反应，可能导致多器官功能衰竭(Bonanno，2011；Gutierrez等，2004；Marik和Flemmer，2012)。该反应通常以出血性休克后立即出现的促炎性细胞因子如IL-6或TNF-α释放为特征(Mees等，2009)。随后是持续释放的抗炎细胞因子，例如IL-10，可能会导致免疫抑制(Oberholzer等，2000)。出血中IL-6和TNF-α产生过多生产的总体影响仍存在争议。目前的发现证实出血后血浆中TNF-α、IL-6和IL-10的水平升高。高渗盐水复苏并没有改变血浆TNF-α、IL-6或IL-10。然而，centhaquin显著增加了血浆TNF-α和IL-6，却不影响血浆IL-10浓度。先前的研究表明，ET

内皮素-1(ET-1)作用于ET

总之，在出血性休克(HS)大鼠中，centhaquin显著改善了复苏。HS后施用centhaquin导致血管收缩剂ET

在大鼠、家兔和猪模型中大量出血后，证明centhaquin具有明显的复苏作用。出血会降低ET

实施例2

下面的实施例确定了出血性休克时低剂量的centhaquin柠檬酸盐(2-[2-(4-(3-甲基苯基)-1-哌嗪基)]乙基-喹啉)柠檬酸盐明显降低血乳酸，并升高平均动脉压(MAP)、脉搏血压(PP)和心输出量(CO)(Gulati等，2012；Gulati等，2013；Lavhale等，2013；Papapanagiotou等，2016)。在centhaquin和现有复苏剂之间进行比较研究，复苏剂分为3个不同类别：(a)液体，如乳酸林格氏液，高渗盐水；(b)肾上腺素能药物，如去甲肾上腺素，以及(c)新鲜血液。我们使用(i)恒压出血的大鼠模型，(ii)未控制的创伤出血的兔模型和(iii)大量出血的猪模型的结果表明，centhaquin对降低低血容量性休克后的死亡率非常有效(Gulati等，2012；Gulati等，2013；Lavhale等，2013；Papapanagiotou等，2016)。与其他复苏剂(升压药)不同，centhaquin通过增加中风体积(SV)和CO来增加MAP；并降低心率和全身血管阻力(SVR)。Centhaquin目前正在临床开发中用作出血性休克的复苏剂。

出血性休克是外伤后发病和死亡的主要原因，尤其是在受伤初期(Wu等，2009)。出血性休克造成的大多数死亡发生在创伤后的最初6小时内(Shackford等，1993)，并且这些死亡中的大多数可以避免(Acosta等，1998)。休克伴有循环衰竭，这主要是造成死亡率和发病率的原因。当前推荐的使用大量乳酸林格(LR)溶液的液体疗法可有效恢复血液动力学参数，但存在逻辑和生理学限制(Vincenzi等，2009)。以大量晶体复苏与继发性腹腔室综合征、肺水肿、心脏功能障碍和麻痹性肠梗阻有关(Balogh等，2003)。出血性休克的循环衰竭的继发性后遗症是肾衰竭，大量液体复苏可能会加重肾衰竭。出血性休克后急性肾损伤和肾衰竭的发生率非常高，许多患者需要肾替代治疗。出血性休克中肾衰竭的病理生理是内脏和肾血管收缩的结果，其将血流引导至心脏和大脑，但可能导致肾缺血性损伤。在近端小管的笔直部分和亨利the的厚上升肢中，肾小管细胞的损伤最为突出，尤其是当其浸入相对缺氧的髓质时。近端肾小管细胞的变化是根尖泡和刷状缘膜的丧失，继而丧失极性和紧密连接的完整性。在细胞水平上，局部缺血会导致三磷酸腺苷(ATP)耗竭、胞质钙增加、自由基形成、膜磷脂代谢以及细胞体积调节异常。

方法

动物研究在使用之前，将Sprague-Dawley雄性大鼠(340至380g)(Envigo,Indianapolis,IN)在受控温度(23±1℃)、湿度(50±10％)和光照(6：00AM到6:00PM)饲养。食物和水不断供应。动物护理和用于实验程序的用途已获得Midwestern University机构动物保护和使用委员会的批准。所有麻醉和手术程序均符合动物保护委员会制定的指导原则。

药品和化学品在Pharmazz India Private Limited,Greater Noida,India合成了centhaquin柠檬酸盐(PMZ-2010)。使用氨基甲酸酯(氨基甲酸乙酯)(Sigma-Aldrich StLouis,MO,USA)，盐水注射剂，USP(Hospira,Inc,Lake forest IL,USA)和肝素钠注射剂USP(APP Pharmaceuticals,LLC,Schaumburg,IL,USA)。

心血管反应的测定用溶于等渗盐水中的氨基甲酸酯麻醉动物。通过腹膜内注射以每千克体重1.5g的剂量施用氨基甲酸酯。选择氨基甲酸酯作为麻醉剂是因为它可产生持久的麻醉(8-10小时)，并且心血管和呼吸系统的压抑程度最小。它产生一定程度的外科麻醉，其特点是可以保护心血管反射(Maggi和Meli1986)。简而言之，麻醉的大鼠是固定在配有可控加热垫的手术板上。使用气管切开插管连接到啮齿动物呼吸机(Model 683,HarvardApparatus Inc.,Holliston,MA)，维持血Po

动脉血气和碱缺乏的测定在诱发休克前、诱发休克后30分钟、以及在载剂或centhaquin复苏后30和60分钟监测基线动脉血pH值、Po

SBD＝0.9287×[HCO

出血性休克的诱发通过以大约0.5到1mL/min的速度从股动脉中抽血直至MAP达到35mmHg来诱发出血。如有必要，可通过进一步抽血将该MAP维持30分钟。本研究中使用的出血性休克模型是建立良好的可处理压力性出血的啮齿动物模型(Buehler等，2000；Gulati等，1997；Gulati和Sen，1998)。每只出血大鼠的量约为8.0ml，并且在各组中出血量相似，约占总血液的40％。在各组中测得的血细胞比容水平相似。抽血的时间约为15分钟。

实验设计为了确定出血性休克中centhaquin对心血管系统的复苏作用，将大鼠随机分为三组：在复苏的前10分钟内给出血的大鼠施用100％出血量的生理盐水(载剂)；100％出血量的生理盐水加centhaquin(0.01mg/kg)；或100％出血量的生理盐水加centhaquin(0.10mg/kg)。还进行了其他实验，以确定在正常生理盐水(NS)或centhaquin(0.01mg/kg)处理的大鼠(体积等于出血量)中将MAP维持在70mmHg时所需的去甲肾上腺素(复苏过程中非常常用的血管加压药)的量。

统计分析使用GraphPad Instat-2.00进行了功效分析。功效设置为80％(β＝0.8)，使用的显著性水平(α)为0.05。功效分析表明，当显著性水平α＝0.05时，每组5个心血管样本量和4个生化评估样本量足以达到80％的功效。数据表示为平均值±SEM。差异的显著性是通过对方差的单向分析，然后进行事后检验(Bonferroni方法)来估计。P值小于0.05被认为是显著的。统计分析使用GraphPad Prism 7.00(GraphPad，San Diego,CA,USA)进行。

结果

centhaquin对出血大鼠的动脉血pH、pO

在整个实验期间，对照组大鼠的血细胞比容百分比没有变化，而出血后血细胞比容显著降低。用生理盐水或centhaquin复苏的出血大鼠在治疗后血细胞比容无变化。

在整个实验期间，对照大鼠的血乳酸水平没有变化，而出血后乳酸水平显著增加。与生理盐水组相比，用centhaquin复苏的出血大鼠的血乳酸水平降低。

centhaquin对出血大鼠的平均动脉压(MAP)的影响。对照大鼠在实验期间未显示任何MAP变化。诱导出血后，所有治疗组的MAP均显著降低。用盐水复苏的出血大鼠在复苏后仅显示MAP的短暂改善。用centhaquin(0.01和0.10mg/kg)复苏的大鼠在复苏后显示MAP显著增加(p<0.01)。

centhaquin对出血大鼠的肾血流灌注的影响。用载剂(盐水)或低剂量centhaquin(0.01mg/kg)或高剂量centhaquin(0.1mg/kg)使出血大鼠复苏。在诱发休克前，休克(出血)后30分钟，以及复苏后10、30、60、90和120分钟，测量了centhaquin对肾血液灌注的影响。与等量的生理盐水相比，低剂量的centhaquin显著改善出血的雄性大鼠的肾血液灌注。这种改善的肾髓质血液灌注提示使用centhaquin来预防或治疗肾损伤(图5)。与等体积的生理盐水相比，centhaquin显著改善了出血雌性大鼠的肾血液灌注(图6)。还发现低剂量的0.02mg/kg的centhaquin有效增加进行20分钟肾动脉闭塞的出血大鼠的肾血流量。0.2mg/kgcenthaquin的十倍高剂量在增加肾血流方面没有与低剂量0.02mg/kgc enthaquin相同的功效。因此，低剂量(0.02mg/kg)的centhaquin比高剂量(0.2mg/kg)的centhaquin在改善遭受20分钟肾动脉闭塞的出血大鼠的肾血流方面更有效。

雄性大鼠用氨基甲酸乙酯麻醉。将股静脉插管以进行药物施用，将股动脉插管以测量平均动脉压(MAP)，并且将激光多普勒血流探头置于肾髓质中以测量血液灌注。通过抽血使MAP维持在35mmHg 30分钟来引发出血性休克。进行去甲肾上腺素输注以使MAP维持在70mmHg。在诱发休克前，休克(出血)后30分钟以及复苏后15、30、45、60、75和90分钟测量了centhaquin对心血管功能的影响。与复苏后的载剂对照相比，centhaquin改善了出血的雄性大鼠的肾血液灌注。去甲肾上腺素引起的血管收缩的不良反应可以通过centhaquin减轻(图7)。同样，复苏后与载剂对照相比，centhaquin改善了出血雌性大鼠的肾血液灌注，并且直到实验结束时观察到血液灌注也有所改善(图8)。去甲肾上腺素引起的血管收缩的不良反应可以被centhaquin减轻。

实施例3

进行一项前瞻性的多中心随机双盲平行II期研究(CTRI/2017/03/008184)，以盐水为对照，PMZ-2010(centhaquin)作为出血过多引起的低血容量性休克的复苏剂。所有受试者均接受标准的休克治疗(登记机构将提供的治疗类型和护理)。将患者随机分配至接受标准治疗和生理盐水治疗的对照组(N＝7)，或接受标准治疗和PMZ-2010的PMZ-2010组(N＝12)。中期分析显示两组中患者的可比人口统计数据(表2)。

表2.一项中期分析显示了II期研究的两组中患者的可比人口统计数据。

研究用药物PMZ-2010达到了安全性的主要终点，并且未报告不良事件。在PMZ-2010中治疗所需的给药次数少于对照组(表3)。在总住院时间中，接受PMZ-2010治疗的患者在重症监护病房的时间仅为39.3％，而对照组为57.3％。PMZ-2010组患者在呼吸机上花费的时间仅为0.85±0.71天，而对照组患者则为5.09±3.14天。在复苏的前48小时内，接受PMZ-2010治疗的患者需要的总液体量减少了19.9％；类似地，与对照组相比，PMZ-2010治疗组在前48小时内施用的总血液制品减少了23.4％。对照组在复苏后48小时，收缩压较基线(入组时)增加了34.5％，而在PMZ-2010治疗组中则观察到增加45.2％(图9)。同样，复苏后48小时，对照组的舒张压升高了15.4％，而PMZ-2010治疗组的舒张压却升高了34.9％(图9)。复苏前48小时所需的血管加压药总量在对照组中为18.4±12.1mg，而在PMZ-2010治疗的患者中仅需要1.3±1.2mg。对照组的血液乳酸水平降低了47％，接受PMZ-2010治疗的患者中血液乳酸水平降低了63％。对少量患者的中期分析表明，PMZ-2010改善了许多参数，这些参数表明了其作为复苏剂的有效性。

表3.II期研究的患者被随机分配至：接受标准治疗并接受生理盐水治疗的对照组，或接受标准治疗和PMZ-2010治疗的患者。根据批准的方案进行的中期分析显示，治疗PMZ-2010所需的给药次数少于对照组。尽管在统计学上不显著，但有一种趋势表明复苏比标准治疗更有效，并且所需剂量减少了约25％。

患者在研究中入院时(基线)和出院时(研究结束)确定血清肌酐水平。根据批准的方案进行的中期分析显示，对照组中的血清肌酐水平降低了25.35％，在PMZ-2010治疗的患者中降低了42.61％。数据表明，PMZ-2010对血清肌酐水平的降低比标准治疗增加17.26％。参见图10。

患者在研究中入院时(基线)和出院时(研究结束)确定了血液尿素氮。根据批准的方案进行的中期分析显示，对照组和PMZ-2010治疗患者的血尿素氮相似。参见图11。

患者在研究中入院时(基线)和出院时(研究结束)确定肾小球滤过率。根据批准的方案进行的中期分析显示，对照组中的肾小球滤过率提高了40.00％，在PMZ-2010治疗的患者中提高了81.52％。数据表明，与标准治疗相比，PMZ-2010的肾小球滤过率增加了41.52％。参见图12。

讨论

急性肾功能衰竭的主要特征是肾小球滤过率(GFR)突然下降，导致含氮废物(尿素，肌酐)的滞留。在全世界，每年每百万人口中有170-200例严重的急性肾衰竭病例。迄今为止，尚无针对急性肾衰竭的特异性治疗方法。已发现几种药物可改善毒性和缺血性实验性急性肾衰竭，表现为较低的血清肌酐水平，减少的组织学损伤和不同动物模型中肾功能的更快恢复。这些包括抗氧化剂、钙通道阻滞剂、利尿剂、血管活性物质、生长因子、抗炎药等，但是，已经在临床试验中研究过的那些药物没有显示出任何益处，并且尚未批准将其在急性肾衰竭中的应用。前述实施例证明了centhaquin及其盐在预防和/或治疗急性肾衰竭的患者中的应用。

在大鼠、家兔和猪模型中大量出血后，证明centhaquin具有明显的复苏作用。在低血容量性休克患者中发现，centhaquin是一种有效的复苏剂，并且导致肾髓质血流量增加，并降低血清肌酐水平。此外，在低血容量性休克患者中，centhaquin增加肾小球滤过率。预期的是，centhaquin及其盐将导致血管舒张作用并促进利尿和排钠，并通过增加肾小球滤过率和降低血清肌酐水平来改善肾功能。

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