一种同时测定补嘘养勒颗粒中两种活性成分阿魏酸及补骨脂素含量的方法

摘要

本发明公开了一种同时测定补嘘养勒颗粒中阿魏酸及补骨脂素含量的方法，该方法采用的色谱条件如下：色谱柱为Shim‑pack GIST(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：乙腈(A)‑0.1％磷酸(B)，梯度洗脱(0～7min，20％A；25min，40％A；30min，50％A；40min，90％A)；检测波长：244nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量10μL。阿魏酸、补骨脂素计算不低于3000。在此色谱条件下，色谱峰分离良好，阿魏酸及补骨脂素浓度与峰面积呈良好的线性关系。本方法简单、快速、准确、重现性好，可为全面评价和控制补嘘养勒颗粒的质量提供理论依据。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药(壮药)创新药物补嘘养勒颗粒中活性成分的检测方法，具体的说是一一种同时测定补嘘养勒颗粒中两种活性成分阿魏酸及补骨脂素含量的方法，属于医药技术领域。

背景技术

产后缺乳为常见产后病，始于《诸病源候论》记录为“产后乳无汁候”。有学者探讨气血虚弱、肝郁气滞、痰湿壅盛是引起该病症重要原因。目前没有针对产后缺乳明确的诊疗方案，常以中药汤剂及针灸作为主流治疗手段。而壮医治疗产后缺乳方面有显著特色，国医大师班秀文教授在中医妇产科、壮医药方面独树一帜，其在壮医药促进产后康复方面积累了丰富的临床验方。

补嘘养勒方为借鉴名老中医的学术思想，根据壮医药理论开发的治疗产后缺乳的经验方，临床应用效果良好。壮药“补嘘养勒颗粒”是广西中医药大学制药厂与广西中医药大学拟联合研发的国家创新药物，其处方为壮医药专家方刚教授在挖掘总结壮医治疗产后缺乳的传统药物的基础上，按照壮医理论配伍组方的经验方，效果显著。该产品处方由五指毛桃、当归等壮药材按壮医理论配伍而成。方中主帮合用，能够通龙路、火路，调谷道，辅以带药，引导诸药直达病所，全方主帮带合用共奏补嘘养勒、催乳的功效。

中成药作为一个整体，强调的是各味药的协同作用。中成药中单一有效成分或指标成分控制，难以真正控制药品质量，而采用多指标多成份的含量测定方法将成为中成药未来质量控制方法的主流。现代研究表明，补嘘养勒颗粒中五指毛桃药材含有补骨脂素等活性成分，其中补骨脂素是其补益作用的主要活性成分。另外，处方中当归的主要活性成分为阿魏酸，因此，补骨脂素和阿魏酸可作为评价该制剂质量的重要依据。建立一种快速、准确、全面分离、检测补嘘养勒颗粒中补骨脂素、阿魏酸活性成分的方法，以期更好地对该产品进行质量监控，满足用药安全。

本发明建立了同时测定补嘘养勒颗粒制剂中主要成分阿魏酸及补骨脂素含量的检测方法，实验结果表明，本法建立的HPLC同时测定制剂中两个不同指标成分的含量测定方法，简单快速、准确可靠，重复性及稳定性均较好，可作为该制剂的质量控制方法。

发明内容

本发明目的在于提供一种同时测定补嘘养勒颗粒中两种活性成分阿魏酸及补骨脂素含量的方法，该方法简单、稳定、重现性好，可用于该药品的质量控制。

本发明的目的是这样实现的：利用高效液相色谱检测的方法，同时测定制剂中五指毛桃及当归药材中的阿魏酸及补骨脂素成分含量，具体步骤如下：

(1)混合对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸及补骨脂素对照品适量，加入适量70％甲醇溶解，使每1mL溶液含有阿魏酸18.31μg、补骨脂素9.70μg的混合对照品溶液，备用。

(2)供试品溶液制备 取补嘘养勒颗粒约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加70％甲醇定容至25mL，超声提取40min，离心3min(3000r/min)，微孔滤膜过滤(0.22μm)，即得。

(3)色谱条件及样品检测 将混合对照品溶液和供试品溶液分别注入LC-2030C 3D型高效液相色谱仪(岛津中国仪器有限公司)，采用如下色谱条件检测：色谱柱为Shim-packGIST(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：乙腈(A)-0.1％磷酸(B)，梯度洗脱(0～7min，20％A；25min，40％A；30min，50％A；40min，90％A)；检测波长：244nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量10μL。理论塔板数按阿魏酸峰、补骨脂素峰计算不低于3000。

本发明具有以下优点和积极效果：

1、本发明所述方法简单、准确、重现性和稳定性好，可为全面评价和控制补嘘养勒颗粒质量提供理论基础和科学依据。

2、本发明方法采用高效液相色谱法检测的方法，利用梯度洗脱方式，实现了同时测定补嘘养勒颗粒中2种有效成分的含量，本发明建立的色谱法能够较好的分离、测定补嘘养勒颗粒中有效成分阿魏酸及补骨脂素含量，色谱峰峰形好，分离度较高，在此色谱条件下阿魏酸及补骨脂素的浓度与峰面积呈现良好的线性关系，各种成分回收率均在95％以上。

3、本发明方法操作简单、精密度、重现性和稳定性良好，为补嘘养勒颗粒有效成分质量控制和药效评价的进一步研究奠定了理论基础和科学依据。

附图说明

图1是本发明阿魏酸、补骨脂素混合对照品溶液(A)、样品溶液(B)、缺当归、川芎阴性对照(C)、缺五指毛桃阴性对照(D)

附图标记说明：1-阿魏酸峰、2-补骨脂素峰

A-阿魏酸、补骨脂素混合对照品溶液HPLC图

B-样品溶液HPLC图

C-缺当归、川芎阴性对照HPLC图

D-缺五指毛桃阴性对照HPLC图

具体实施方式

以下结合附图和具体实施方式对本发明作以进一步的阐述，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不以此限制本发明。

1材料与仪器

LC-2030C 3D型高效液相色谱仪(岛津中国仪器有限公司)AG135型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；202-2型电热恒温干燥箱(江苏省通州市)；S205DU型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

阿魏酸(中国食品药品检定研究所，110773-201614，含量以99.0％计)；补骨脂素(中国食品药品检定研究所，110739-201617，含量以99.70％计)；乙腈(色谱纯；Fisher公司)；磷酸、甲醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；蔗糖、乳糖、甘露醇、微晶纤维素、甜菊素(购自南宁市越前食品添加剂有限责任公司)。

补嘘养勒颗粒由广西中医药大学制药厂生产。处方中药材均采购于南宁市各大药店。

2具体步骤如下：

2.1色谱条件 色谱柱为Shim-pack GIST(250mm×4.6mm，5μm)，流动相： 乙腈(A)-0.1％磷酸(B)，梯度洗脱(0～7min，20％A；25min，40％A；30min，50％A；40min，90％A)；检测波长：244nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量10μL。理论塔板数按阿魏酸峰、补骨脂素峰计算不低于3000。

2.2溶液的制备

2.2.1供试品溶液的制备 取供试品补嘘养勒颗粒约5.0g，加70％甲醇定容至25mL，超声提取40min，离心3min(3000r/min)，微孔滤膜过滤(0.22μm)，即得。

2.2.2对照品溶液的制备 分别精密称取阿魏酸、补骨脂素适量，加入适量70％甲醇溶解，使每1mL溶液含有阿魏酸18.31μg、补骨脂素9.70μg。

2.2.3阴性对照液制备 按补嘘养勒颗粒处方比例称取缺五指毛桃、川芎和当归的药材，分别按处方工艺提取，再按“2.2.1”项下供试品溶液制备方法制备，即得。

2.3色谱条件与系统适应性试验 分别取对照品、样品及阴性对照溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，实验结果显示：对照品色谱中与样品色谱在相同保留时间处都有色谱峰，而阴性対照液中无相应峰，说明样品中其他成分对阿魏酸、补骨脂素这2个成分的测定无干扰，拖尾因子均在0.95～1.05之间，结果见图1。

2.4线性范围考察 分别将混标母液稀释成适量的浓度，按上述色谱条件测定，以峰面积为横坐标(Y)，以进样浓度为纵坐标(X)进行线性回归，阿魏酸回归方程为Y＝30192X-1454.7，R

2.5精密度实验 精密吸取混标溶液，按色谱条件测定，连续进样6次。阿魏酸RSD值为1.95％，补骨脂素RSD值为1.90％，均小于2％，说明仪器精密度良好。

2.6稳定性实验 取供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h按色谱条件测定。阿魏酸RSD值为1.95％，补骨脂素RSD值为1.90％，均小于2％，实验结果表明样品在24h内较稳定。

2.7重复性实验 按照“2.2.1”项制备6份供试品溶液并按色谱条件测定，阿魏酸RSD值为1.79％、补骨脂素RSD值为1.79％。实验结果表明重复性良好。

2.8加样回收实验 精密称定已知含量的颗粒，按照1:0.5、1:1、1:1.5的比例加入标准品，按“2.2.1”项下制备，测定，计算加样回收率。阿魏酸、补骨脂素的回收率分别为99.40％、100.53％，RSD值分别为2.83％、2.91％；表明回收率良好。见表1。

表1加样回收率实验结果表

2.9样品测定 取9批补嘘养勒颗粒各约5g，共9份，精密称定，按“2.2.1”项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，根据阿魏酸、补骨脂素的峰面积，计算阿魏酸、补骨脂素的含量，结果见表2。

表2样品含量测定结果(mg/g,n＝2)

综上，本发明所建立的HPLC法同时测定补嘘养勒颗粒中阿魏酸、补骨脂素二种活性成分含量的方法，具有操作简便、精密度好、重复性高的特点，可全面、更有效地控制该药品的质量。