一种鲜驴奶中表皮生长因子的富集方法

摘要

本发明公开了一种鲜驴奶中表皮生长因子的富集方法，属于驴奶提取物富集制备方法技术领域，包括以下步骤：将鲜驴奶进行灭菌预处理，然后将处理后的鲜驴奶和去离子水加入离心机中进行离心，除去上层稀奶油，取上清液，将上清液进行冷冻和脱水后得到的固体粉末加入离心后的鲜驴奶中进行搅拌，制得鲜驴奶浓缩液；将上清液通过层析系统进行洗脱，收集洗脱液并将其进行冷冻和脱水，得到白色干粉状鲜驴奶表皮生长因子。本发明通过对上清液进行冷冻干燥和洗脱，能够用于制备鲜驴奶浓缩液和提取鲜驴奶中的表皮生长因子，在保留鲜驴奶营养价值的同时减少了鲜驴奶饮用的体积，工艺简单，有效解决了加工后驴奶粉和饮品的使用限制了每次服用量的问题。

说明书

技术领域

本发明属于驴奶提取物富集制备方法技术领域，具体涉及一种鲜驴奶中表皮生长因子的富集方法。

背景技术

驴奶是最接近人乳的奶中珍品，对人体的心、胃、脾、肺、肝、前列腺等多种器官有保健作用，其营养成分比例接近人乳的99％，味甘，性寒，主治消渴、黄疸等，除强身健体之外，驴奶还可以对肺结核、气喘、胃炎等起到一定的辅助疗效作用。驴奶中富含“上皮细胞生长因子”国际上简称EGF，EGF因子有神奇修复鼻腔气管粘膜作用，并能增强人体抵抗力和免疫力。医学专家研究指出：患有支气管炎和肺炎、肺结核病人，治疗期间喝驴奶具有辅助治疗效果。在民间七八十年代，就有把驴奶当作偏方，治疗肺结核病(当时叫痨病)的例子。

表皮生长因子具有刺激表皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞等多种细胞增殖的性质，可用于治疗或预防多种疾病，如促进溃疡、烧烫伤及手术等伤口创面的愈合、对慢性萎缩性胃炎、口腔糜烂和缺血性损伤等病症有一定的治疗和预防作用。此外，表皮生长因子已经广泛作为化妆品添加剂而应用，促进表皮细胞增殖，改善皮肤外观状况。然而在传统的驴奶加工过程中，驴奶在灭菌后制成饮品和奶粉进行使用，但加工后驴奶粉和饮品的使用限制了每次的服用量，不利于表皮生长因子的补充。因此本发明人提出了一种鲜驴奶中表皮生长因子的富集方法，能够提高了鲜驴奶浓缩液中表皮生长因子的纯度，实现了驴奶营养和表皮生长因子的同时补充，提高了鲜驴奶浓缩液中的营养价值。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种鲜驴奶中表皮生长因子的富集方法，用于提高鲜驴奶浓缩液中表皮生长因子的纯度和营养价值。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种鲜驴奶中表皮生长因子的富集方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：鲜驴奶预处理：将鲜驴奶经过灭菌后放入冷藏室中进行冷藏存储；

S2：鲜驴奶加工处理：将储奶瓶中的鲜驴奶和去离子水倒入离心机中，开启离心机，离心结束后，除去上层稀奶油，取上清液；再在离心沉淀中加入去离子水，重悬沉淀后再次离心，离心结束后，除去上层稀奶油，取上清液，保留离心后中下层的脱脂驴奶；合并各次离心分离所得上清液；

S3：鲜驴奶浓缩液制备：将步骤S2中得到的上清液进行冷冻升华和真空脱水，得到固体粉末；将固体粉末加入离心后中下层的脱脂驴奶中进行搅拌，让固体粉末溶解在离心后脱脂驴奶中，制得鲜驴奶浓缩液；

S4：表皮生长因子纯化：将步骤S2中得到的上清液通过层析系统进行洗脱，用紫外检测仪在波长280nm下进行检测并加以记录，收集洗脱液，得到纯化的鲜驴奶表皮生长因子溶液；

S5：表皮生长因子生化干燥：将步骤S4中得到的鲜驴奶表皮生长因子溶液进行冷冻升华和真空脱水，得到白色干粉状鲜驴奶表皮生长因子。

所述步骤S1中，鲜驴奶的预处理步骤为：先将鲜驴奶经过冷却器急速降温至0～3℃，然后在1℃的工作条件下通过过胶体磨研磨两次后装入储奶瓶中，将储奶瓶送入超高压设备进行低温超高压灭菌，灭菌结束后通过将储奶瓶放入0～3℃的贮藏室中。

所述鲜驴奶低温超高压灭菌过程为：所述超高压灭菌设备的工作温度为0℃～3℃，控制设备内压力在3分钟内由常压升至300MPa～400MPa，并保持此压力条件下3分钟后，设备内压力在3分钟内降至150MPa，并维持3分钟，再将压力在3分钟内由150MPa升至300MPa～400MPa，保持此压力条件下3分钟，重复实施上述2～4次，压力降回常压，灭菌结束。

所述步骤S2中，鲜驴奶加工处理的具体过程为：将储奶瓶从贮藏室中取出，并将储奶瓶中的鲜驴奶倒入离心机中，同时向鲜驴奶中加入预冷的去离子水在1～3℃的作业环境下、以3000转/分钟离心10～15分钟，除去上层稀奶油，取上清液；再在离心沉淀中加入预冷的去离子水，重悬沉淀后再次以3000转/分钟离心10～15分钟，除去上层稀奶油，取上清液，保留离心后中下层的脱脂驴奶；合并各次离心分离所得上清液。

所述预冷的去离子水温度为0～3℃。

所述步骤S3中，鲜驴奶浓缩液制备的具体过程为：将步骤S2中得到的上清液在-10℃～-50℃下冻结成固态，然后在1.3～13Pa的真空条件下使其中的水分不经液态直接升华成气态，最终使上清液脱水，得到固体粉末；将固体粉末加入离心后中下层的脱脂驴奶中，在1～3℃的作业环境下搅拌3～5分钟，让固体粉末溶解在离心后脱脂驴奶中，制得鲜驴奶浓缩液。

所述步骤S4中，表皮生长因子纯化的具体过程为：将步骤S2中得到的上清液用蠕动泵加入到凝胶层析柱中，然后用蒸馏水用蠕动泵进行洗脱直至出峰完毕，用紫外检测仪在280nm波长处进行检测并加以记录，收集洗脱液，得到纯化的鲜驴奶表皮生长因子溶液。

所述步骤S5中，表皮生长因子生化干燥的具体过程为：将步骤S4中得到的鲜驴奶表皮生长因子溶液在-10℃～-50℃下冻结成固态，然后在1.3～13Pa的真空条件下升华干燥，得到白色干粉状鲜驴奶表皮生长因子。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1)通过对鲜驴奶进行离心过滤，能够有效去除驴奶中的上层稀奶油，扩大了饮用人群的范围，提高了适用性，同时对上清液冷冻干燥，能够有效实现鲜驴奶浓缩液的制备，在保留鲜驴奶营养价值的同时减少了鲜驴奶饮用的体积，有效解决了加工后驴奶粉和饮品的使用限制了每次服用量的问题，提高了营养补充量；

2)通过鲜驴奶提取表皮生长因子，工艺简单，表皮生长因子活性、含量更高，便于在化妆品和食品中进行使用，具有维持人体正常细胞增殖的功效。

具体实施方式

下面将结合具体实施例来详细说明本发明，在此本发明的示意性实施例以及说明来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。

实施例1

本发明所述的一种鲜驴奶中表皮生长因子的富集方法，包括以下步骤：

S1：先将鲜驴奶经过冷却器急速降温至0℃，然后在1℃的工作条件下通过过胶体磨研磨两次后装入200ml的储奶瓶中，将储奶瓶送入超高压设备进行低温超高压灭菌，超高压灭菌设备的工作温度为2℃，控制设备内压力在3分钟内由常压升至350MPa，并保持此压力条件下3分钟后，设备内压力在3分钟内降至150MPa，并维持3分钟，再将压力在3分钟内由150MPa升至350MPa，保持此压力条件下3分钟，重复实施上述2～4次，压力降回常压，灭菌结束，灭菌结束后通过将储奶瓶放入0℃的贮藏室中。

S2：将储奶瓶从贮藏室中取出，并将储奶瓶中的200ml鲜驴奶倒入离心机中，同时向鲜驴奶中加入200ml 1℃的预冷去离子水，在1℃的作业环境下、以3000转/分钟离心10分钟，除去上层稀奶油，取上清液；再在离心沉淀中加入200ml 1℃的预冷去离子水，重悬沉淀后再次以3000转/分钟离心10分钟，除去上层稀奶油，取上清液，保留离心后中下层的脱脂驴奶；合并各次离心分离所得上清液380ml。

S3：将步骤S2中得到的380ml上清液在-30℃下冻结成固态，然后在6Pa的真空条件下使其中的水分不经液态直接升华成气态，最终使上清液脱水，得到固体粉末；将固体粉末加入离心后中下层的脱脂驴奶中，在1℃的作业环境下搅拌3分钟，让固体粉末溶解在离心后脱脂驴奶中，制得鲜驴奶浓缩液110ml。

S4：将步骤S2中得到的上清液用蠕动泵以6cm/h的线速度加入到凝胶层析柱中，然后用蒸馏水用蠕动泵以6cm/h的线速度进行洗脱直至出峰完毕，用紫外检测仪在280nm波长处进行检测并加以记录，收集洗脱液160ml，得到纯化的鲜驴奶表皮生长因子溶液。

S5：将步骤S4中得到的160ml鲜驴奶表皮生长因子溶液在-30℃下冻结成固态，然后在6Pa的真空条件下升华干燥，得到白色干粉状鲜驴奶表皮生长因子。

实施例2

本发明所述的一种鲜驴奶中表皮生长因子的富集方法，包括以下步骤：

S1：先将鲜驴奶经过冷却器急速降温至0℃，然后在1℃的工作条件下通过过胶体磨研磨两次后装入200ml的储奶瓶中，将储奶瓶送入超高压设备进行低温超高压灭菌，超高压灭菌设备的工作温度为2℃，控制设备内压力在3分钟内由常压升至350MPa，并保持此压力条件下3分钟后，设备内压力在3分钟内降至150MPa，并维持3分钟，再将压力在3分钟内由150MPa升至350MPa，保持此压力条件下3分钟，重复实施上述2～4次，压力降回常压，灭菌结束，灭菌结束后通过将储奶瓶放入0℃的贮藏室中。

S2：将储奶瓶从贮藏室中取出，并将储奶瓶中的200ml鲜驴奶倒入离心机中，同时向鲜驴奶中加入200ml 1℃的预冷去离子水，在2℃的作业环境下、以3000转/分钟离心12分钟，除去上层稀奶油，取上清液；再在离心沉淀中加入200ml 1℃的预冷去离子水，重悬沉淀后再次以3000转/分钟离心12分钟，除去上层稀奶油，取上清液，保留离心后中下层的脱脂驴奶；合并各次离心分离所得上清液375ml。

S3：将步骤S2中得到的380ml上清液在-30℃下冻结成固态，然后在6Pa的真空条件下使其中的水分不经液态直接升华成气态，最终使上清液脱水，得到固体粉末；将固体粉末加入离心后中下层的脱脂驴奶中，在1℃的作业环境下搅拌4分钟，让固体粉末溶解在离心后脱脂驴奶中，制得鲜驴奶浓缩液105ml。

S4：将步骤S2中得到的上清液用蠕动泵以6cm/h的线速度加入到凝胶层析柱中，然后用蒸馏水用蠕动泵以6cm/h的线速度进行洗脱直至出峰完毕，用紫外检测仪在280nm波长处进行检测并加以记录，收集洗脱液160ml，得到纯化的鲜驴奶表皮生长因子溶液。

S5：将步骤S4中得到的160ml鲜驴奶表皮生长因子溶液在-30℃下冻结成固态，然后在6Pa的真空条件下升华干燥，得到白色干粉状鲜驴奶表皮生长因子。

对实施例1和实施例2中得到白色干粉状鲜驴奶表皮生长因子进行测定，实施例1中表皮生长因子纯度为97.28％，总收率43.9％，实施例2中表皮生长因子纯度为97.35％，总收率为44.6％。

以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理。