一种稳定的阴道分泌物有形成分染色液及其制备方法

摘要

本发明涉及一种稳定的阴道分泌物有形成分染色液及其制备方法，属于染色液技术领域。解决了现有技术中的染色步骤繁琐，操作复杂，染色速度慢，使用效果较差，成本高，日阅片量少的问题。本发明的一种稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B；染色液A包括有机溶剂和染色剂，染色剂为红色体系染色剂、绿色体系染色剂、紫色体系染色剂或蓝色体系染色剂；染色液B包括缓冲溶液、防腐剂、助染剂、渗透压调节剂和表面活性剂。该染色液，检测细胞形态优、准确度高、稳定性好，有效期能够达到12个月。

说明书

技术领域

本发明属于染色液技术领域，具体涉及一种稳定的阴道分泌物有形成分染色液及其制备方法。

背景技术

阴道分泌物，在医学临床检验中，最常用的方法为光学显微镜检查，在检验之前，要对采集的原始样本进行过滤、稀释和混匀，使样本达到显微镜检验的要求，然后，需要将样本制成适用于镜检的玻片检体，检体分成“干片”和“湿片”。湿片的制片方法主要有计数池法、盖玻片法。计数池法是将样本液(染色或不染色)加注到光学计数池内，再经过自然沉降或人工沉降等方法，使微生物(细胞)固定在可观测的位置，再将计数池送到显微镜下观测。盖玻片法是在载玻片上滴加样本液，然后加盖盖玻片，形成厚度一定的液体薄层，再将计数池送到显微镜下观测。通过检查目标中的细胞、微生物或者其他的有形成分，往往根据有形成分的数量和状态，作为判断女性阴道是否健康的判决条件，同时也为医学的诊断提供重要参考信息。然而镜检下无添加任何细胞染色组分对于临床医生的镜检水平要求高，且误判率高，同时增加医生由于长期工作的视觉疲劳感，从而影响检测的准确性及检测效果。

现有的染色方法为巴氏及HE，属于细胞病理学染色方法，其优点是固定时间长，染色时间长，但是染色步骤繁琐，等待时间长，出报告速度慢，日阅片量少，成本高，操作复杂，费人、费时、费钱。

姬姆萨染色法也是新兴的染色方法，主要应用于眼结膜的细胞学检查及临床恶性肿瘤的细胞学诊断，其优点为速度快，仅需要3分钟，对细胞核着色效果好，缺点在于对细胞浆及细胞膜和其中的中性颗粒染色效果较差。

经过改良的瑞氏-姬姆萨混合染色法是在单纯姬姆萨染色法之上进行改良，主要用于血涂片检查，染色方法为先选用瑞氏染色液25分钟，除去瑞氏染液，再用姬姆萨染色液染色4分钟，用纯化水冲洗后，安置于空气中自行干燥即可，此法弥补了姬姆萨染色法对细胞浆及细胞膜着色效果不好的缺点，但是医护人员操作繁琐，此法染色速度慢，需要30分钟以上。

白带显微检查是当前临床常规化验检查项目之一，白带中的各种生物细胞状况反映了女性阴道的病理变化情况。现如今我国大多数的小型医院在白带检测中依然沿用显微镜检测，再进行人工处理，但人工检测由于受到人为因素的影响较大，所以只适合对于小范围的检测。而对于那些工作量较大的检测，检测人员长时间在显微镜下工作容易出现疲劳，从而影响医务人员对病情的判断。同时，医生对细胞图样的分析主观影响较大，医生很容易凭借自身经验来判断病情。故在白带的检测中，引入自动化检测设备来代替人工检测是必要之举，这样不仅能够提高检测准确度，还能提高工作效率，而且定量的客观性可以消除主观因素干扰以保证检验质量。随着数字图像处理技术的进步，很多领域开始使用数字图像处理，医学领域也不例外，数字图像处理为医学诊断带来了实质性的改变，从而推动了医学诊断的变革。迪瑞自主研发的GMD-S600全自动妇科分泌物分析仪的整体设计满足医学临床的镜检要求，对白带中各有形成份形态特征(细胞形态、细胞大小、核数量、核形态、核大小、核浆体积比、细胞边界、折光特性等)分别进行总结描述，并查阅相关细胞图谱提供不同种类细胞形态学形面示意图、不同类别细胞染色效果图片，方便相关非专业人员了解、熟悉、认识白带中各种可能检测出的有形成份，便于软件设计人员根据不同形态有形成分种类、及同一类别不同生长周期细胞的不同特征设计图像识别参数，使白带分析仪更准确、详细识别出白带检测中可见的有形成份，提高检出率及准确性。白带中的有形成分包括白细胞、上皮细胞、杆菌和球菌等，根据各个细胞形态特征进行准确的分类(如表1)所述。

表1细胞诊断依据及临床意义

自动妇科分泌物分析仪解决了人工检测白带操作繁杂、环境污染、随意性大等现存问题，使操作自动化、标准化，轨道式进样，使样品随到随检，更重要的是解决了生物安全一大难题，改善了工作环境，对白带的生物细胞医学显微图像自动识别技术的研究具有十分重要的社会价值和现实意义，而染色液是保证分析仪对有形成分检测的必备试剂，其影响检测的完整性、准确性及可靠性。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术中的染色步骤繁琐，操作复杂，染色速度慢，使用效果较差，成本高，日阅片量少的问题，提供一种稳定的阴道分泌物有形成分染色液及其制备方法。

本发明解决上述技术问题采用的技术方案如下。

本发明的一种稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B；

所述染色液A包括有机溶剂和染色剂，染色剂为红色体系染色剂、绿色体系染色剂、紫色体系染色剂或蓝色体系染色剂；

所述染色液B包括缓冲溶液、防腐剂、助染剂、渗透压调节剂和表面活性剂。

优选的是，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丙三醇、丁醇、戊醇、丙酮、乙腈、N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜中的一种或几种的混合物。

优选的是，所述红色体系染色剂为中性红、伊红、曙红G、曙红Y、噻嗪类染料、苏丹III、醋酸杨红、橘红G、苏木精中的一种或几种的混合物；

所述绿色体系染色剂为固绿、甲基绿中的一种或几种混合物；

所述紫色体系染色剂为龙胆紫、结晶紫中的一种或几种混合物；

所述蓝色体系染色剂为甲苯胺蓝、美兰、天青II、考马斯亮蓝、亚甲基蓝中的一种或几种混合物；

所述染色液A中，染色剂的浓度为0.5-2.0wt％。

优选的是，所述缓冲液为HEPES缓冲液、PBS缓冲液、MOPSO缓冲液、BTIS缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种的混合物，缓冲液的pH＝5.0-9.0，缓冲液的浓度为10mM-100mM。

优选的是，所述防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、庆大霉素、ProClin300、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、吡啶硫酮钠、脱氢乙酸钠中的一种或几种混合物，防腐剂的浓度为0.1wt％-0.75wt％。

优选的是，所述助染剂为乙酸钙、乙酸钠、乙酸胺、乙酸钾、乙酸镁中的一种或几种混合物，助染剂的浓度为10mM-100mM。

优选的是，所述渗透压调节剂为氯化钠或氯化钾，渗透压调节剂的浓度为0.5wt％-1.5wt％。

优选的是，所述表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚、曲拉通X-100、BRIJ35、BRIJ98、EMULGEN 24B、司盘60、吐温20、吐温40、泊洛沙姆、tritonX-100、辛基酚氧乙烯醚中的一种或几种的混合物，表面活性剂的浓度为0.01wt％-1.00wt％。

优选的是，所述染色剂A和染色剂B的pH值分别独立的为6.0-7.0(25±1)℃；电导率分别独立的为7.00±0.20mS/cm(25±1)℃；渗透压分别独立的为185±10mmol/L(mOsm/kg)。

本发明还提供上述稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法：

按照组成称取染色液B中各组分，搅拌均匀，用乙酸或1M氢氧化钠调节pH为6.50±0.50(25±1℃)，调节渗透压和电导率，过滤，得到染色液B；

且按照组成称取染色液A中各组分，搅拌均匀，过滤，得到染色液A。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1、本发明的稳定的阴道分泌物有形成分染色液，检测细胞形态优、准确度高、稳定性好，有效期能够达到12个月。

2、本发明的稳定的阴道分泌物有形成分染色液，染料及染料的浓度能够对细胞质和细胞核进行特异性染色，进行特异性区分；助染剂能够使各类细胞染色稳定，不产生脱色现象；染色液pH值及缓冲液的浓度，根据不同细胞的膜蛋白的等电点不同，对正负电荷的吸引能力的差异选择，保证各类细胞对染料的吸附能力达到最佳，缓冲液的浓度越大，离子强度越大，离子间的相互作用越强，能够使染料中离子与细胞成分充分结合；表面活性剂具有润湿、分散、乳化、增溶、保湿、渗透、防腐等功能，活跃于表面和界面上，具有极高的降低表、界面张力的能力和效率，本发明的有形成分染色液中引入表面活性剂，使细胞均匀分散，在95％以上，同时改善细胞膜的通透性，促进染色液进入细胞，满足各类细胞染色后着色均一的效果。

3、本发明的稳定的阴道分泌物有形成分染色液结合GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统，提高了界面背景清晰度，使染色后背景清晰，细胞通透度好，各类细胞颜色区分明显。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。

图1为本发明的稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法的工艺流程图。

具体实施方式

为了进一步了解本发明，下面结合具体实施方式对本发明的优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点而不是对本发明专利要求的限制。

本发明的发明思想为：

首先，被测物分析是试剂产品开发的核心关键，也是配方设计的先决条件，不同被测物的分子结构及理化性质存在明显差异。根据被测物的不同，试剂的检测原理、方法学和技术路线均不相同。只有充分了解和掌握被测物的分子结构和理化性质，才能正确选择检测方法和进行技术路线的设计。只有充分了解被测物的分子结构和理化性质，才能正确评估其分子的稳定性，为后续染色液的配方设计提供理论依据。

其次，对分泌物中有形成分的性状、含量及理化指标等角度出发，对市售各类物质进行充分的调研与分析，白带中各有形成份形态特征(细胞形态、细胞大小、核数量、核形态、核大小、核浆体积比、细胞边界、折光特性等)分别进行总结描述，并查阅相关细胞图谱提供不同种类细胞形态学形面示意图、不同类别细胞染色效果图片，方便相关非专业人员了解、熟悉、认识白带中各种可能检测出的有形成分，便于软件设计人员根据不同形态有形成分种类、及同一类别不同生长周期细胞的不同特征设计图像识别参数，例如染色液主要对于有形成分中细胞核及细胞质的着色，为主要的评估指标，以中性红染色为例，其染色原理：细胞核的主要成分是脱氧核糖核酸，脱氧核糖核酸的磷酸基团朝向外侧，带负电荷，容易与带正电荷的中性红结合，从而使细胞核染成红色。细胞核颜色的深浅与脱氧核糖核酸的致密程度呈正比。染色效果为细胞质不着色或着成浅粉色或浅红色，细胞核着成深红色，从而使白带分析仪更准确、详细识别出白带检测中可见的有形成分，提高检出率及准确性。

再者，在已筛选出符合标准的染色液组分后，对配方进行整体调整，保证试剂的测试过程中具有良好的均一性、准确性及稳定性，并经过反复多次实验验证，保证在分泌物分析仪上系统地评价细胞成像的清晰准确、减少细胞间的相互粘连、核质清晰可辨，最终筛选出细胞形态优、准确度高、稳定性好的染色液配方。

本发明的稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B；

其中，染色液A包括有机溶剂和染色剂，染色剂为红色体系染色剂、绿色体系染色剂、紫色体系染色剂或蓝色体系染色剂；外观为红褐色液体，不得有沉淀、颗粒或絮状物；

染色液B包括缓冲溶液、防腐剂、助染剂、渗透压调节剂和表面活性剂；外观为无色透明液体，不得有沉淀、颗粒或絮状物。

上述技术方案中，有机溶剂优选为甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丙三醇、丁醇、戊醇、丙酮、乙腈、N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜中的一种或几种的混合物；更优选为乙醇和乙二醇的混合物、丙醇和丙三醇的混合物、乙二醇和甲醇混合溶剂；最优选为乙二醇和甲醇混合物。

上述技术方案中，红色体系染色剂优选为中性红、伊红、曙红G、曙红Y、噻嗪类染料、苏丹III、醋酸杨红、橘红G、苏木精中的一种或几种的混合物；更优选为中性红、曙红G、曙红Y、苏丹III中的一种或几种混合物；尤其优选为中性红、曙红G或曙红Y；最优选为中性红。

上述技术方案中，蓝色体系染色剂优选为甲苯胺蓝、美兰、天青II、考马斯亮蓝、亚甲基蓝中的一种或几种混合物；更优选为甲苯胺蓝、天青II或亚甲基蓝；最优选为天青II。

上述技术方案中，紫色体系染色剂优选为龙胆紫、结晶紫中的一种或几种混合物。

上述技术方案中，绿色体系染色剂优选为固绿、甲基绿中的一种或几种混合物。

上述技术方案中，染色液A中，染色剂的浓度优选为0.5-2.0wt％，更优选为1.5wt％。

上述技术方案中，缓冲液优选为HEPES缓冲液、PBS缓冲液、MOPSO缓冲液、BTIS缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种的混合物，更优选为BTIS缓冲液；缓冲液的pH优选为5.0-9.0，更优选为6.5；缓冲液的浓度优选为10mM-100mM，更优选为50mM。

上述技术方案中，防腐剂优选为叠氮钠、硫柳汞、庆大霉素、ProClin300、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、吡啶硫酮钠、脱氢乙酸钠中的一种或几种混合物，更优选为2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮；防腐剂的浓度优选为0.1wt％-0.75wt％，更优选为0.2wt％。

上述技术方案中，助染剂优选为乙酸钙、乙酸钠、乙酸胺、乙酸钾、乙酸镁中的一种或几种混合物，更优选为乙酸钙；助染剂的浓度优选为10mM-100mM，更优选为60mM。

上述技术方案中，渗透压调节剂优选为氯化钠或氯化钾；渗透压调节剂的浓度为0.5wt％-1.5wt％，更优选为0.7wt％-0.9wt％。

上述技术方案中，表面活性剂优选为聚氧乙烯月桂醚、曲拉通X-100、BRIJ35、BRIJ98、EMULGEN 24B、司盘60、吐温20、吐温40、泊洛沙姆、tritonX-100、辛基酚氧乙烯醚中的一种或几种的混合物，更优选为曲拉通X-100；表面活性剂的浓度优选为0.01wt％-1.00wt％，更优选为0.05wt％。

上述技术方案中，优选的，染色剂A和染色剂B的pH值分别独立为6.0-7.0(25±1)℃；电导率分别独立为7.00±0.20mS/cm(25±1)℃；渗透压分别独立为185±10mmol/L(mOsm/kg)。

本发明还提供上述一种稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法：

按照组成称取染色液B中各组分，搅拌均匀，用乙酸或1M氢氧化钠调节pH为6.50±0.50(25±1℃)；调节渗透压和电导率调制要求范围，过滤，得到染色液B；

且按照组成称取染色液A中各组分，搅拌均匀，过滤，得到染色液A。

上述技术方案中，优选的，染色液B中的各组分依次加入容器中溶解搅拌，一种组分溶解后再加入另一种组分，全部溶解后，搅拌20分钟。搅拌采用磁力搅拌器或顶置搅拌器。

上述技术方案中，优选的，将染色液A中各组分60℃加热搅拌2小时，搅拌采用磁力搅拌器或顶置搅拌器。。

上述技术方案中，优选的，过滤的滤孔为0.1μm。

上述技术方案中，优选的，还包括将染色液A和染色液B分装。

本发明的稳定的阴道分泌物有形成分染色液的操使用方法：将染色液A与染色液B按照体积比3:7置于离心管中，摇匀，记作染色液AB待用；同时用细胞保存液处理分泌物临床样本后待用；将染色液AB与临床样本按照1:4比例混合均匀，取20μl置于载玻片上，盖上盖玻片，显微镜在40倍目镜下观察细胞染色情况。

在本发明中所使用的术语，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义，除非另有说明。

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合实施例对本发明作进一步的详细介绍。

在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、装置、仪器、设备等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1

稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B，配方如下：

上述稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法：

①称量前的准备：

选择合适测量精度的仪器设备及玻璃器具，如电子天平、电子秤、量筒、不锈钢药勺的选择，称量前所用设备及器具的进行确认。

②称量溶解：染色液B按照配制工艺，依次称量化药，每种化药完全溶解后加入下一种化药，使用磁力搅拌器或顶置搅拌器进行搅拌溶解，待所有药品溶解后连续搅拌20分钟，用乙酸或1M氢氧化钠调节pH为6.50±0.50(25±1℃)；调节渗透压和电导率调制要求范围。

染色液A按照配制工艺，依次称量化药、溶剂，所使用的承装容器要求严格无水，机械搅拌的同时在60℃加热搅拌2小时，使用温度计插入液面以下对试剂温度进行监测。

③过滤：安装好0.1μm的聚醚砜滤芯，将滤芯安装在套筒的底座上，右旋45°至90°，依次安装胶垫，套筒以及旋塞，并将卡扣拧紧，确保无漏液现象。安装蠕动泵，开启速度为开启速度为100-200转/分钟；

④分装：使用蠕动泵对染色液B分装至100ml试剂中，每瓶分装100mL，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

使用蠕动泵对染色液A分装至100ml棕色瓶中，每个分装100ml，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

⑤清场

a.将所有化药试剂归位；清点药品；

b.有的容器具送至清洗间清洗；

c.填写清场记录，清场人，日期，并填好仪器使用记录；

所用设备明细为高密度聚乙烯瓶、10万级电子天平、PH计、渗透压仪、电导率仪、1000mL量筒、0.1μm聚醚砜滤芯、专用滤器及蠕动泵。

实施例2

稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B，配方如下：

上述稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法：

①称量前的准备：

选择合适测量精度的仪器设备及玻璃器具，如电子天平、电子秤、量筒、不锈钢药勺的选择，称量前所用设备及器具的进行确认。

②称量溶解：染色液B按照配制工艺，依次称量化药，每种化药完全溶解后加入下一种化药，使用磁力搅拌器或顶置搅拌器进行搅拌溶解，待所有药品溶解后连续搅拌20分钟，用乙酸或1M氢氧化钠调节pH为6.50±0.50(25±1℃)；调节渗透压和电导率调制要求范围。

染色液A按照配制工艺，依次称量化药、溶剂，所使用的承装容器要求严格无水，机械搅拌的同时在60℃加热搅拌2小时，使用温度计插入液面以下对试剂温度进行监测。

③过滤：安装好0.1μm的聚醚砜滤芯，将滤芯安装在套筒的底座上，右旋45°至90°，依次安装胶垫，套筒以及旋塞，并将卡扣拧紧，确保无漏液现象。安装蠕动泵，开启速度为开启速度为100-200转/分钟；

④分装：使用蠕动泵对染色液B分装至100ml试剂中，每瓶分装100mL，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

使用蠕动泵对染色液A分装至100ml棕色瓶中，每个分装100ml，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

⑤清场

a.将所有化药试剂归位；清点药品；

b.有的容器具送至清洗间清洗；

c.填写清场记录，清场人，日期，并填好仪器使用记录；

所用设备明细为高密度聚乙烯瓶、10万级电子天平、PH计、渗透压仪、电导率仪、1000mL量筒、0.1μm聚醚砜滤芯、专用滤器及蠕动泵。

实施例3

稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B，配方如下：

上述稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法：

①称量前的准备：

选择合适测量精度的仪器设备及玻璃器具，如电子天平、电子秤、量筒、不锈钢药勺的选择，称量前所用设备及器具的进行确认。

②称量溶解：染色液B按照配制工艺，依次称量化药，每种化药完全溶解后加入下一种化药，使用磁力搅拌器或顶置搅拌器进行搅拌溶解，待所有药品溶解后连续搅拌20分钟，用乙酸或1M氢氧化钠调节pH为6.50±0.50(25±1℃)；调节渗透压和电导率调制要求范围。

染色液A按照配制工艺，依次称量化药、溶剂，所使用的承装容器要求严格无水，机械搅拌的同时在60℃加热搅拌2小时，使用温度计插入液面以下对试剂温度进行监测。

③过滤：安装好0.1μm的聚醚砜滤芯，将滤芯安装在套筒的底座上，右旋45°至90°，依次安装胶垫，套筒以及旋塞，并将卡扣拧紧，确保无漏液现象。安装蠕动泵，开启速度为开启速度为100-200转/分钟；

④分装：使用蠕动泵对染色液B分装至100ml试剂中，每瓶分装100mL，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

使用蠕动泵对染色液A分装至100ml棕色瓶中，每个分装100ml，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

⑤清场

a.将所有化药试剂归位；清点药品；

b.有的容器具送至清洗间清洗；

c.填写清场记录，清场人，日期，并填好仪器使用记录；

所用设备明细为高密度聚乙烯瓶、10万级电子天平、PH计、渗透压仪、电导率仪、1000mL量筒、0.1μm聚醚砜滤芯、专用滤器及蠕动泵。

实施例4

稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B，配方如下：

上述稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法：

①称量前的准备：

选择合适测量精度的仪器设备及玻璃器具，如电子天平、电子秤、量筒、不锈钢药勺的选择，称量前所用设备及器具的进行确认。

②称量溶解：染色液B按照配制工艺，依次称量化药，每种化药完全溶解后加入下一种化药，使用磁力搅拌器或顶置搅拌器进行搅拌溶解，待所有药品溶解后连续搅拌20分钟，用乙酸或1M氢氧化钠调节pH为6.50±0.50(25±1℃)；调节渗透压和电导率调制要求范围。

染色液A按照配制工艺，依次称量化药、溶剂，所使用的承装容器要求严格无水，机械搅拌的同时在60℃加热搅拌2小时，使用温度计插入液面以下对试剂温度进行监测。

③过滤：安装好0.1μm的聚醚砜滤芯，将滤芯安装在套筒的底座上，右旋45°至90°，依次安装胶垫，套筒以及旋塞，并将卡扣拧紧，确保无漏液现象。安装蠕动泵，开启速度为开启速度为100-200转/分钟；

④分装：使用蠕动泵对染色液B分装至100ml试剂中，每瓶分装100mL，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

使用蠕动泵对染色液A分装至100ml棕色瓶中，每个分装100ml，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

⑤清场

a.将所有化药试剂归位；清点药品；

b.有的容器具送至清洗间清洗；

c.填写清场记录，清场人，日期，并填好仪器使用记录；

所用设备明细为高密度聚乙烯瓶、10万级电子天平、PH计、渗透压仪、电导率仪、1000mL量筒、0.1μm聚醚砜滤芯、专用滤器及蠕动泵。

实施例5

稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B，配方如下：

上述稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法：

①称量前的准备：

选择合适测量精度的仪器设备及玻璃器具，如电子天平、电子秤、量筒、不锈钢药勺的选择，称量前所用设备及器具的进行确认。

②称量溶解：染色液B按照配制工艺，依次称量化药，每种化药完全溶解后加入下一种化药，使用磁力搅拌器或顶置搅拌器进行搅拌溶解，待所有药品溶解后连续搅拌20分钟，用乙酸或1M氢氧化钠调节pH为6.50±0.50(25±1℃)；调节渗透压和电导率调制要求范围。

染色液A按照配制工艺，依次称量化药、溶剂，所使用的承装容器要求严格无水，机械搅拌的同时在60℃加热搅拌2小时，使用温度计插入液面以下对试剂温度进行监测。

③过滤：安装好0.1μm的聚醚砜滤芯，将滤芯安装在套筒的底座上，右旋45°至90°，依次安装胶垫，套筒以及旋塞，并将卡扣拧紧，确保无漏液现象。安装蠕动泵，开启速度为开启速度为100-200转/分钟；

④分装：使用蠕动泵对染色液B分装至100ml试剂中，每瓶分装100mL，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

使用蠕动泵对染色液A分装至100ml棕色瓶中，每个分装100ml，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

⑤清场

a.将所有化药试剂归位；清点药品；

b.有的容器具送至清洗间清洗；

c.填写清场记录，清场人，日期，并填好仪器使用记录；

所用设备明细为高密度聚乙烯瓶、10万级电子天平、PH计、渗透压仪、电导率仪、1000mL量筒、0.1μm聚醚砜滤芯、专用滤器及蠕动泵。

实施例6

稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B，配方如下：

上述稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法：

①称量前的准备：

选择合适测量精度的仪器设备及玻璃器具，如电子天平、电子秤、量筒、不锈钢药勺的选择，称量前所用设备及器具的进行确认。

②称量溶解：染色液B按照配制工艺，依次称量化药，每种化药完全溶解后加入下一种化药，使用磁力搅拌器或顶置搅拌器进行搅拌溶解，待所有药品溶解后连续搅拌20分钟，用乙酸或1M氢氧化钠调节pH为6.50±0.50(25±1℃)；调节渗透压和电导率调制要求范围。

染色液A按照配制工艺，依次称量化药、溶剂，所使用的承装容器要求严格无水，机械搅拌的同时在60℃加热搅拌2小时，使用温度计插入液面以下对试剂温度进行监测。

③过滤：安装好0.1μm的聚醚砜滤芯，将滤芯安装在套筒的底座上，右旋45°至90°，依次安装胶垫，套筒以及旋塞，并将卡扣拧紧，确保无漏液现象。安装蠕动泵，开启速度为开启速度为100-200转/分钟；

④分装：使用蠕动泵对染色液B分装至100ml试剂中，每瓶分装100mL，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

使用蠕动泵对染色液A分装至100ml棕色瓶中，每个分装100ml，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

⑤清场

a.将所有化药试剂归位；清点药品；

b.有的容器具送至清洗间清洗；

c.填写清场记录，清场人，日期，并填好仪器使用记录；

所用设备明细为高密度聚乙烯瓶、10万级电子天平、PH计、渗透压仪、电导率仪、1000mL量筒、0.1μm聚醚砜滤芯、专用滤器及蠕动泵。

实施例7

稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B，配方如下：

上述稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法：

①称量前的准备：

选择合适测量精度的仪器设备及玻璃器具，如电子天平、电子秤、量筒、不锈钢药勺的选择，称量前所用设备及器具的进行确认。

②称量溶解：染色液B按照配制工艺，依次称量化药，每种化药完全溶解后加入下一种化药，使用磁力搅拌器或顶置搅拌器进行搅拌溶解，待所有药品溶解后连续搅拌20分钟，用乙酸或1M氢氧化钠调节pH为6.50±0.50(25±1℃)；调节渗透压和电导率调制要求范围。

染色液A按照配制工艺，依次称量化药、溶剂，所使用的承装容器要求严格无水，机械搅拌的同时在60℃加热搅拌2小时，使用温度计插入液面以下对试剂温度进行监测。

③过滤：安装好0.1μm的聚醚砜滤芯，将滤芯安装在套筒的底座上，右旋45°至90°，依次安装胶垫，套筒以及旋塞，并将卡扣拧紧，确保无漏液现象。安装蠕动泵，开启速度为开启速度为100-200转/分钟；

④分装：使用蠕动泵对染色液B分装至100ml试剂中，每瓶分装100mL，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

使用蠕动泵对染色液A分装至100ml棕色瓶中，每个分装100ml，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

⑤清场

a.将所有化药试剂归位；清点药品；

b.有的容器具送至清洗间清洗；

c.填写清场记录，清场人，日期，并填好仪器使用记录；

所用设备明细为高密度聚乙烯瓶、10万级电子天平、PH计、渗透压仪、电导率仪、1000mL量筒、0.1μm聚醚砜滤芯、专用滤器及蠕动泵。

实施例8

稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B，配方如下：

上述稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法：

①称量前的准备：

选择合适测量精度的仪器设备及玻璃器具，如电子天平、电子秤、量筒、不锈钢药勺的选择，称量前所用设备及器具的进行确认。

②称量溶解：染色液B按照配制工艺，依次称量化药，每种化药完全溶解后加入下一种化药，使用磁力搅拌器或顶置搅拌器进行搅拌溶解，待所有药品溶解后连续搅拌20分钟，用乙酸或1M氢氧化钠调节pH为6.50±0.50(25±1℃)；调节渗透压和电导率调制要求范围。

染色液A按照配制工艺，依次称量化药、溶剂，所使用的承装容器要求严格无水，机械搅拌的同时在60℃加热搅拌2小时，使用温度计插入液面以下对试剂温度进行监测。

③过滤：安装好0.1μm的聚醚砜滤芯，将滤芯安装在套筒的底座上，右旋45°至90°，依次安装胶垫，套筒以及旋塞，并将卡扣拧紧，确保无漏液现象。安装蠕动泵，开启速度为开启速度为100-200转/分钟；

④分装：使用蠕动泵对染色液B分装至100ml试剂中，每瓶分装100mL，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

使用蠕动泵对染色液A分装至100ml棕色瓶中，每个分装100ml，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

⑤清场

a.将所有化药试剂归位；清点药品；

b.有的容器具送至清洗间清洗；

c.填写清场记录，清场人，日期，并填好仪器使用记录；

所用设备明细为高密度聚乙烯瓶、10万级电子天平、PH计、渗透压仪、电导率仪、1000mL量筒、0.1μm聚醚砜滤芯、专用滤器及蠕动泵。

实施例9

稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B，配方如下：

上述稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法：

①称量前的准备：

选择合适测量精度的仪器设备及玻璃器具，如电子天平、电子秤、量筒、不锈钢药勺的选择，称量前所用设备及器具的进行确认。

②称量溶解：染色液B按照配制工艺，依次称量化药，每种化药完全溶解后加入下一种化药，使用磁力搅拌器或顶置搅拌器进行搅拌溶解，待所有药品溶解后连续搅拌20分钟，用乙酸或1M氢氧化钠调节pH为6.50±0.50(25±1℃)；调节渗透压和电导率调制要求范围。

染色液A按照配制工艺，依次称量化药、溶剂，所使用的承装容器要求严格无水，机械搅拌的同时在60℃加热搅拌2小时，使用温度计插入液面以下对试剂温度进行监测。

③过滤：安装好0.1μm的聚醚砜滤芯，将滤芯安装在套筒的底座上，右旋45°至90°，依次安装胶垫，套筒以及旋塞，并将卡扣拧紧，确保无漏液现象。安装蠕动泵，开启速度为开启速度为100-200转/分钟；

④分装：使用蠕动泵对染色液B分装至100ml试剂中，每瓶分装100mL，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

使用蠕动泵对染色液A分装至100ml棕色瓶中，每个分装100ml，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

⑤清场

a.将所有化药试剂归位；清点药品；

b.有的容器具送至清洗间清洗；

c.填写清场记录，清场人，日期，并填好仪器使用记录；

所用设备明细为高密度聚乙烯瓶、10万级电子天平、PH计、渗透压仪、电导率仪、1000mL量筒、0.1μm聚醚砜滤芯、专用滤器及蠕动泵。

实施例10

稳定的阴道分泌物有形成分染色液，包括染色液A和染色液B，配方如下：

上述稳定的阴道分泌物有形成分染色液的制备方法：

①称量前的准备：

选择合适测量精度的仪器设备及玻璃器具，如电子天平、电子秤、量筒、不锈钢药勺的选择，称量前所用设备及器具的进行确认。

②称量溶解：染色液B按照配制工艺，依次称量化药，每种化药完全溶解后加入下一种化药，使用磁力搅拌器或顶置搅拌器进行搅拌溶解，待所有药品溶解后连续搅拌20分钟，用乙酸或1M氢氧化钠调节pH为6.50±0.50(25±1℃)；调节渗透压和电导率调制要求范围。

染色液A按照配制工艺，依次称量化药、溶剂，所使用的承装容器要求严格无水，机械搅拌的同时在60℃加热搅拌2小时，使用温度计插入液面以下对试剂温度进行监测。

③过滤：安装好0.1μm的聚醚砜滤芯，将滤芯安装在套筒的底座上，右旋45°至90°，依次安装胶垫，套筒以及旋塞，并将卡扣拧紧，确保无漏液现象。安装蠕动泵，开启速度为开启速度为100-200转/分钟；

④分装：使用蠕动泵对染色液B分装至100ml试剂中，每瓶分装100mL，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

使用蠕动泵对染色液A分装至100ml棕色瓶中，每个分装100ml，蠕动泵设置参数为100-200转/分钟，贴签。

⑤清场

a.将所有化药试剂归位；清点药品；

b.有的容器具送至清洗间清洗；

c.填写清场记录，清场人，日期，并填好仪器使用记录；

所用设备明细为高密度聚乙烯瓶、10万级电子天平、PH计、渗透压仪、电导率仪、1000mL量筒、0.1μm聚醚砜滤芯、专用滤器及蠕动泵。

对实施例1、实施例3、实施例6和实施例9的稳定的阴道分泌物有形成分染色液的性能进行评价。

①外观评价

检测方法：随机抽取5瓶染色液A，以正常视力检查外观性能指标，应符合要求：染色A为红褐色液体，不得有沉淀、颗粒或絮状物；

随机抽取5瓶染色液B，以正常视力检查外观性能指标，应符合要求：染色B为无色透明液体，不得有沉淀、颗粒或絮状物。

经检测，实施例1、实施例3、实施例6和实施例9的稳定的阴道分泌物有形成分染色液目测结果均合格。

②准确度评价

检测方法：使用实施例1的染色液，随机测试5份分泌物样本对阴道分泌物中的各类细胞进行染色，染色结果细胞质不着色或着成浅粉色或浅红色，细胞核着成深红色。结果如表2所示。

操作方法：将染色液A与染色液B按照3:7(300μl：700μl)的比例置于1mL离心管中，摇匀，记作染色液AB待用；同时用细胞保存液处理分泌物临床样本后待用；将染色液AB与临床样本按照1:4比例混合均匀，取20μl置于载玻片上，盖上盖玻片，显微镜在40倍目镜下观察细胞染色情况。

表2实施例1的染色液准确度评价数据

检测方法：使用实施例3的染色液，随机测试5份分泌物样本对阴道分泌物中的各类细胞进行染色，染色结果细胞质不着色或着成浅粉色或浅红色，细胞核着成深红色。结果如表3所示。

操作方法：将染色液A与染色液B按照3：7(300μl:700μl)的比例置于1mL离心管中，摇匀，记作染色液AB待用；同时用细胞保存液处理分泌物临床样本后待用；将染色液AB与临床样本按照1:4比例混合均匀，取20μl置于载玻片上，盖上盖玻片，显微镜在40倍目镜下观察细胞染色情况。

表3实施例3的染色液准确度评价数据

检测方法：使用实施例6的染色液，随机测试5份分泌物样本对阴道分泌物中的各类细胞进行染色，染色结果细胞质不着色或着成浅蓝色或天蓝色，细胞核着成深蓝色。结果如表4所示。

操作方法：将染色液A与染色液B按照3:7(300μl:700μl)的比例置于1mL离心管中，摇匀，记作染色液AB待用；同时用细胞保存液处理分泌物临床样本后待用；将染色液AB与临床样本按照1:4比例混合均匀，取20ul置于载玻片上，盖上盖玻片，显微镜在40倍目镜下观察细胞染色情况。

表4实施例6的染色液准确度评价数据

检测方法：使用实施例9的染色液，随机测试5份分泌物样本对阴道分泌物中的各类细胞进行染色，染色结果细胞质不着色或着成浅粉色或浅红色，细胞核着成深红色。结果如表5所示。

操作方法：将染色液A与染色液B按照3:7(300μl：700μl)的比例置于1mL离心管中，摇匀，记作染色液AB待用；同时用细胞保存液处理分泌物临床样本后待用；将染色液AB与临床样本按照1:4比例混合均匀，取20ul置于载玻片上，盖上盖玻片，显微镜在40倍目镜下观察细胞染色情况。

表5实施例9的染色液准确度评价数据

③稳定性评价

将实施例1-10的染色液在2-8℃贮存，经检测，至少可稳定12个月，性能不发生改变。

综上，本发明的阴道分泌物有形成分染色液，适用于迪瑞公司自主研发的GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统设备上使用，主要用于配合GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统流式成像原理，从而保证仪器形态学检测系统成像的完整性、准确性及可靠性，使所成图像真实有效、清晰可辨、细胞核质染色均匀，且分布错落有致，是保证有形成分分析仪检测有形成分精密度的必备试剂。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施例的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有实施例予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。