红景天破壁饮片的检测方法及质量控制方法

摘要

本发明公开一种红景天破壁饮片的检测方法和质量控制方法。本发明的检测方法包括(1)获取红景天饮片(破壁)的HPLC图谱的步骤；(2)确认所得HPLC图谱的指纹信息的步骤，其中指纹信息包括峰的数量、相对保留时间和相对峰面积；(3)基于指纹信息检测红景天饮片(破壁)的质量。本发明的方法能够更有效的反映药材本身可吸收的活性成分及其含量。

说明书

技术领域

本发明涉及中药饮片炮制加工领域，特别涉及一种红景天药材，特别是破壁粉的检测方法及质量控制方法。

背景技术

红景天中药破壁饮片是以红景天为原料利用现代超微粉碎破壁技术制成的中药破壁饮片产品。红景天为景天科植物大花红景天Rhodiolacrenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba的干燥根和根茎。具有益气活血、通脉平喘的功效，用于气虚血瘀、胸痹心痛、中风偏瘫、倦怠气喘。经现代药理研究表明，红景天具有提高缺氧耐受力的作用，红景天可减弱体内缺氧堆对机体的伤害程度，主要含有醇及其苷类、黄酮类、萜类、酚及其苷类、多糖类、香豆素类、挥发油类等成分。

红景天中药破壁饮片是将符合法定标准要求的红景天药材经现代超微粉碎破壁技术加工至D90≤45μm(300目以上)的粉体，通过微粉包合技术，制成全成分无添加的30-200目的颗粒状饮片。相比传统饮片，中药破壁饮片具有质量均一、药物利用率高、稳定性好及应用方便快捷等优势。

中药破壁饮片已发展成为继传统饮片、配方颗粒、浸膏颗粒后兴起来的第四代新型中药饮片。到目前为止，已有近百味植物药材成功发展成为了中药破壁饮片，并上市销售。但目前对红景天破壁饮片的检测及质量控制方法的研究较少。

CN 104055826 A公开了一种中药制剂技术领域。具体地，涉及一种红景天破壁制剂。通过将红景天粉碎成为破壁粉，再进一步通过乙醇-水湿法制粒，并在一定的转速下挤压成型，干燥，由此制得的红景天破壁制剂具有较高的生物利用率，并且制剂稳定性强、崩解性好。该专利未提及破壁粉的质量控制方法。

再例如，CN108152431A公开一种红景天破壁饮片HPLC指纹图谱的构建方法及质量检测方法，其只对红景天破壁饮片指纹图谱的构建及质量检测方法进行了研究。但是该专利构建的质量检测方法仍不能很好的反映饮片的品质。

发明内容

为解决现有技术中的至少部分技术问题，发明人进行了深入研究，发现通过选取HPLC图谱的特定信息作为指标可有效的检测红景天破壁粉的质量或品质。至少部分地基于此完成了本发明。具体地，本发明包括以下内容。

本发明的第一方面，提供一种红景天饮片(破壁)的检测方法，其包括以下步骤：

(1)获取红景天饮片(破壁)的HPLC图谱的步骤；

(2)确认所得HPLC图谱的指纹信息的步骤，其中所述指纹信息包括峰的数量、相对保留时间和相对峰面积；

(3)基于所述指纹信息检测红景天饮片(破壁)的质量。

优选地，本发明的步骤(1)中，获取红景天饮片(破壁)的HPLC图谱的条件包括：色谱柱为Agilent C18柱；流动相：乙腈(A)-0.02％磷酸水(B)，梯度洗脱：6％A-6％A(0-18min)，6％A-20％A(18-45min)，20％A-20％A(45-55min)，20％A-22％A(55-65min)，22％A-22％A(65-90min)，DAD检测波长278nm，流速0.8mL·min

优选地，在所述步骤(1)之前还包括红景天饮片(破壁)的处理步骤：称取红景天饮片(破壁)1g，向其中加入50％甲醇，超声20-60min，放冷，用50％甲醇补足减失的重量，用微孔滤膜滤过。

优选地，所述红景天饮片(破壁)的制备方法包括：

(1’)将预处理的红景天原料干燥至水分含量7wt％以下，得到干燥后的红景天；

(2’)将干燥后的红景天粉碎至300-800目，得到红景天破壁粉；

(3’)将所述红景天破壁粉在不添加任何辅料或添加剂条件下进行微粉包合制粒，获得30-200目的红景天破壁饮片颗粒。

优选地，本发明的步骤(2’)包括：

(2’-1)使干燥的红景天进行第一粉碎得到60-100目第一粉碎料的步骤；

(2’-2)使所述第一粉碎料进行第二粉碎得到100-300目第二粉碎料的步骤；和

(2’-3)使所述第二粉碎料进行第三粉碎得到大于300至800目的第三粉碎料的步骤；其中，第一粉碎、第二粉碎和第三粉碎为不同类型的粉碎。

优选地，所述第一粉碎为万能粉碎，其进料为水分5-7wt％且粒度3.2-8mm的干燥红景天；所述第二粉碎为球磨粉碎；所述第三粉碎为气流粉碎，其中，所述气流粉碎的条件包括进料压力为0.5-0.9MPa，频率为35-45Hz，引风压差为0.2-0.8MPa，进料目数为100-300目，粉碎至大于300至800目，由此得到破壁粉。

优选地，在所述步骤(3)中，如果1号峰的相对保留时间为0.3000-0.3065之间，4号峰的相对保留时间为1.1000-1.1200之间，且14号峰的相对保留时间为2.1500-2.2300之间，则将所述红景天饮片(破壁)检测为符合要求；其中所述相对保留时间为以2号峰的保留时间作为参考得到的相对保留时间。

优选地，如果1号峰的相对峰面积为8.7000-9.0000之间，4号峰的相对峰面积为1.3000-1.5000之间，14号峰的相对峰面积为1.500-1.8000之间，则将所述红景天饮片(破壁)检测为符合要求；所述相对峰面积为以2号峰的峰面积作为参考得到的相对峰面积。

本发明的第二方面，提供一种红景天饮片(破壁)的质量控制方法，其以本发明第一方面所述的方法作为步骤。

本发明的红景天饮片(破壁)质量控制方法能够更有效的反映其本身的活性成分及其含量，可用于评价不同加工方法对于红景天药材的影响等。另外，本发明的方法也可用于判断样品中红景天饮片(破壁)的纯度。

附图说明

图1红景天饮片(破壁)指纹图谱叠加图。

图2红景天传统饮片指纹图谱叠加图。

图3红景天指纹图谱。

图4红景天饮片(破壁)与传统饮片指纹图谱对比图。

图5不同剂量红景天饮片(破壁)与传统饮片对缺血缺氧H9c2心肌细胞存活率的影响。

具体实施方式

现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。

应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。

除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。除非另有说明，否则“％”为基于重量的百分数。

本发明提供红景天饮片(破壁)的检测方法(有时简称为“本发明的检测方法”)不仅用于鉴定样品是否为红景天饮片(破壁)，更为重要的是用于判断或评价/评估红景天饮片(破壁)是否达到或符合规定要求。本发明中“规定的要求”包括与传统的饮片相比具有更多的可吸收活性成分和更高的含量，或者与现有破壁饮片相比具有更高的活性成分和更高的含量，从而具有更优异的效果，例如提升缺血缺氧心肌细胞的存活率。优选地，“规定的要求”包括在样品的HPLC指纹图谱中至少体现为1号峰的相对保留时间在0.3000-0.3065之间，4号峰的相对保留时间在1.1000-1.1200之间，且14号峰的相对保留时间在2.1500-2.2300之间；1号峰的相对峰面积在8.7000-9.0000之间，4号峰的相对峰面积在1.3000-1.5000之间，14号峰的相对峰面积在1.500-1.8000之间。

本发明的红景天饮片(破壁)的检测方法为基于HPLC图谱的方法，具体地，包括以下步骤：

(1)获取红景天饮片(破壁)的HPLC图谱的步骤；

(2)确认所得HPLC图谱中的指纹信息的步骤，其中所述指纹信息包括相对保留时间和相对峰面积；

(3)基于所述指纹信息检测红景天饮片(破壁)的质量。

下面详细说明各步骤。

[获取红景天饮片(破壁)的HPLC图谱的步骤]

步骤(1)为获取红景天饮片(破壁)的HPLC图谱的步骤，为了建立统一的标准，优选在相同的条件下获取红景天饮片(破壁)的HPLC图谱。更优选地，获取红景天饮片(破壁)的HPLC图谱的条件包括：

色谱柱为Agilent C18柱；流动相：乙腈(A)-0.02％磷酸水(B)，梯度洗脱：6％A-6％A(0-18min)，6％A-20％A(18-45min)，20％A-20％A(45-55min)，20％A-22％A(55-65min)，22％A-22％A(65-90min)，DAD检测波长278nm，流速0.8mL·min

上述色谱条件为优化后的优选条件，并非实现本发明目的的唯一条件，实际上在上述条件的基础上，本领域技术人员完全可以进行改进或调整并容易地得到其他等同条件或相似条件，这些条件对于本发明的目的而言也是可行的。

为了建立标准化检测方法，还优选地，对红景天饮片(破壁)进行处理的步骤，即对红景天饮片(破壁)制备为可作为HPLC上样的样品的步骤。该处理步骤包括称取规定量(例如，1g)的红景天饮片(破壁)，向其中加入规定量的50％甲醇(例如，50mL)，超声20-60min，优选30-50min，更优选40-48min，放冷，用50％甲醇补足减失的重量，用微孔滤膜(例如，0.45μm)滤过。

本发明的红景天饮片(破壁)优选为红景天粉末，进一步优选将红景天原料经粉碎技术加工为300目以上的粉体，然后制成30-200目的颗粒状饮片。

在某些实施方案中，本发明的红景天饮片(破壁)为通过特定方法得到的饮片。该特定方法结合了气流粉碎技术和微粉包合技术的优点，并且通过优化各技术的特点使两种技术产生协同效果，避免红景天在加工过程中的活性成分损耗，从而使本发明的检测方法更加客观、准确。本领域已知，红景天药材的不同加工或处理方法对于药物活性成分或药效的影响不同。有些加工或处理方法可能大大降低活性成分的含量，甚至破坏其结构。现有破壁方法对于活性成分的影响较大，虽然也能得饮片，但是这种饮片的药效有待进一步提升。本发明的检测方法可很好的区分现有破壁方法得到的饮片和通过上述方法得到的药效更高的饮片。

在示例性实施方案中，本发明的红景天饮片(破壁)的制备方法至少包括以下步骤：

(1’)将预处理的红景天原料干燥至水分含量7wt％以下，得到干燥后的红景天；

(2’)将干燥后的红景天粉碎至300-800目，得到红景天破壁粉；

(3’)将所述红景天破壁粉在不添加任何辅料或添加剂条件下进行微粉包合制粒，获得30-200目的红景天破壁饮片颗粒。

本发明的步骤(1’)为得到干燥后的红景天的步骤。可使用任何已知方法进行干燥。在示例性实施方案中，本发明的干燥为冷冻干燥。红景天富含多糖类、挥发油等类物质，冷冻干燥技术适合于保留红景天中的这些成分，避免传统的烘干干燥法会对其成分造成破坏和流失。具体地，冷冻干燥步骤可包括以下三个子步骤。

(1’-1)冻结步骤：

将处理后的红景天原料在常压下进行预冷却至第一温度，并保持1-2小时，然后在第一压力下冷却至第二温度，并保持0.5-3小时，优选0.8-2.5小时，更优选1-2小时，之后进一步冷却至第三温度，并保持0.5-2小时，优选0.8-1.5小时，更优选0.9-1.0小时。这样的冻结步骤与传统的以线性速率降温方式不同，其更有利于冰晶形成特定的大小，减小水蒸气升华时的阻力，并且使得到的干燥物更脆，更有利于后续粉碎步骤的进行。优选地，第一温度为1.5-2.5℃，第二温度为-45℃至-35℃，第三温度为-60℃以下。优选地，第一压力为10-15KPa，第二压力为1-1.5KPa。

(1’-2)升华步骤：

在保持冰冻条件下，将压力由第一压力降至第二压力进行升华，在升华过程中使温度逐渐回升。在该过程中可除去大部分水分。例如，通过搁板加热方式提供热能。在升华过程中，需在高度真空下进行，在压力降低过程中，必须保持箱内物品的冰冻状态，以防溢出容器。待箱内压力降到1.33KPa，-60℃以下时，冰即开始升华，升华的水蒸气在冷凝器内结成冰晶。为保证冰的升华，优选开启加热系统，将搁板加热，温度达到共熔点，-28℃--10℃。一般而言，气压越低越有利于升华的发生和水蒸气的逸出，但本发明发现气压在低于1.00KPa时对于升华是不利的。因此，本发明的升华压力一般为1.00KPa至1.33KPa。在升华过程中，当温度达到-28℃至-10℃时终止步骤(1-2)。

(1’-3)再干燥步骤：将温度升至30-35℃，并在该过程中进行再干燥，至水分含量为5wt％-9wt％。通过再干燥除去结合水分，此时固体表面的水蒸气压呈不同程度的降低，干燥速度明显下降。优选地，在此阶段内应适当提高搁板温度，以利于水分的蒸发，一般是将搁板加热至30-35℃，直至样品温度与搁板温度重合达到干燥为止。冻干后的样品水分控制在5wt％以下，优选3wt％以下，更优选1wt％。

需要说明的是，本发明的步骤(1’)通过设置各步骤的参数不仅仅在于得到所需的干燥红景天，更为重要的是，这些参数还能提高红景天的脆性，更有利于后续粉碎。

本发明的步骤(2’)为三级粉碎步骤，其包括：

(2’-1)使干燥的红景天进行第一粉碎得到60-100目第一粉碎料的步骤；

(2’-2)使所述第一粉碎料进行第二粉碎得到100-300目第二粉碎料的步骤；和

(2’-3)使所述第二粉碎料进行第三粉碎得到大于300至800目的第三粉碎料的步骤；其中，第一粉碎、第二粉碎和第三粉碎为不同类型的粉碎。

本发明的三级粉碎中，第一粉碎、第二粉碎和第三粉碎为不同类型的粉碎。本发明发现通过三种不同类型的粉碎，优选将原料药经过万能粉碎→球磨粉碎→气流粉碎，这样经三次粉碎后可以提高破壁粉碎的收率，如红景天原药材不经万能粉碎和球磨粉碎而直接进行气流粉碎，会造成许多纤维无法达到破壁粉碎的要求而造成原药材的可浪费，在经过万能粉碎和球磨粉碎后的中药材粉再进行气流粉碎所得破壁粉末收率95％以上(如果不先进行前面的两次粉碎，只用气流粉碎收率只能在84％左右)。气流粉碎以压缩空气或过热蒸汽通过喷嘴，产生高速气流，且在喷嘴附近形成很高的速度梯度，通过喷嘴产生的超音速高湍流作为颗粒载体进行粉碎，尤适用于含有热敏性成分等不稳定物质的粉碎，保证了中药材中富含的醇及其苷类、黄酮类、萜类、酚及其苷类、多糖类、香豆素类、挥发油类等成分的保留。

本发明中，第一级粉碎优选为利用万能粉碎将干燥原料粉碎至60-100目，优选70-100目。第二级粉碎包括通过球磨粉碎将第一级粉碎物粉碎至100-500左右目，优选100-300目。第三级粉碎包括通过气流粉碎将第二级粉碎物粉碎至大于300目，优选400-1200目，更优选400-800目，从而得到中药破壁粉。如果小于400目，则后期包合制粒时包合效果差，不能有效地形成30-200目，优选30-100目，更优选35-80目的颗粒。另一方面，如果大于800目，则所得到颗粒的溶散性变差。

本发明的第一级粉碎优选为万能粉碎。在示例性实施方案中，本发明的万能粉碎如下：生产能力300-1000kg/h，进料粒度8-32mm，进料物水分7wt％以下，优选5-7wt％，主轴转速3600rpm，收率在98％以上。上述粉碎条件能够得到所需的60-100目颗粒。

本发明的第二级粉碎优选为球磨粉碎，其包括将第一级粉碎物球磨为中药材粗粉的过程。经球磨粉碎的收率在97％-98％。

本发明的气流粉碎包括将中药材粗粉置于气流粉碎机中进行气流粉碎，粉碎至300-1500目，得到中药材破壁粉。具体地，粉碎条件包括料压力为0.5-0.9MPa，优选0.6-0.8MPa，频率为35-45Hz，引风压差为0.2-0.8MPa，物料含水量为7wt％以下，优选5-7wt％。

本发明中，通过经过滤干燥后的压缩空气高速喷射入粉碎腔，在多股高压气流的交汇点处物料被反复碰撞、磨擦、剪切而粉碎，粉碎后的物料在风机抽力作用下随上升气流运动至分级区，在高速旋转的分级涡轮产生的强大离心力作用下，使粗细物料分离，符合粒度要求的细颗粒通过分级轮进入旋风分离器和除尘器收集，粗颗粒下降至粉碎区继续粉碎。本发明的冷冻干燥条件为得到脆性材料的条件，由于冷冻干燥得到脆性更高的中药材原料，从而保证了气流粉碎能够更容易地粉碎中药材，并得到优异的破壁饮片。

另外，需注意的是，球磨粉碎设备粉碎一次需对其进行清洁才能进行下一次的操作，操作繁琐、复杂、费时费力。而本发明的气流粉碎以压缩空气或过热蒸汽通过喷嘴，产生高速气流，且在喷嘴附近形成很高的速度梯度，通过喷嘴产生的超音速高湍流作为颗粒载体进行粉碎，尤适用于含有热敏性成分等不稳定物质的粉碎。

步骤(3’)微粉包合制粒步骤：

本发明的步骤(3’)为微粉包合制粒步骤，其包括将红景天超微粉在不添加任何辅料或添加剂条件下进行微粉包合制粒，获得30-200目的红景天破壁饮片颗粒。

红景天经破壁粉碎后，粉末表面积增大，流动性降低，吸附性增大，易吸附空气中水分，灌装过程中吸附机械难清洗，而造成的分装困难等瓶颈技术。为了解决该问题，本发明对红景天中药材经破壁粉碎后所得的破壁饮片进行微粉包合制粒的研究。本发明以休止角为评价指标，在不添加任何助流剂的前提下进行微粉制粒。即，将破壁好的红景天粉末采用物理的方法实现粉体的聚集。在步骤(3’)中，将经过破壁粉碎后的粉末进行微粉包合。其中物理的方法是指一个破壁粉末分子包裹另一个或多个破壁粉末分子形成独特的分子络合物，该络合物的包材和芯材都是同一种药材破壁粉末。优选地，本发明的分子络合物的休止角在30°-40°之间，稳定性和流动性得到显著提升。

通过微粉包合技术的优点包括使得到的饮片具有流动性强、稳定性好、安全性高、易分散、服用方便等特点。

本发明的步骤(1)中优选地还包括对所得HPLC数据进行处理的过程。优选地，将所得色谱图数据参数导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012.1版软件中，考察各色谱峰的信息。

[确认所得HPLC图谱中的指纹信息的步骤]

本发明的步骤(2)为确认所得HPLC图谱中的指纹信息的步骤。在通过上述步骤得到的红景天饮片(破壁)的HPLC指纹图谱中共有22个峰，从左至右依次编号为1、2、3、4、5、6、7、……、22。本发明的指纹信息不仅包括HPLC图谱中峰的数量信息，还包括峰的保留时间、峰面积，特别是相对保留时间和相对峰面积。相对保留时间和相对保留峰面积的计算在本领域内是已知的。

[基于指纹信息检测红景天饮片(破壁)的质量]

本发明的步骤(3)为基于指纹信息检测红景天饮片(破壁)的质量的步骤。本发明中，首先需要从上述指纹信息中选定特定的信息作为检测指标。本发明的检测指标可以是指纹信息中的一部分，也可以是全部指纹信息。优选地，本发明的检测指标仅为指纹信息中的一部分。例如，部分峰的指纹信息。

本发明中，研究发现，当1号峰的相对保留时间为0.3000-0.3065之间，优选0.3005-0.3060之间，4号峰的相对保留时间为1.1000-1.1200之间，优选1.1050-1.1180之间，且14号峰的相对保留时间为2.1500-2.2300之间，优选2.1700-2.2250之间时，所得红景天饮片(破壁)具有更加优异的效果。因此，本发明以包括1、4和14号峰的上述范围的相对保留时间等信息作为红景天性能的检测指标可以检测或判断红景天饮片(破壁)的品质或质量。进一步优选地，1号峰的相对峰面积为8.7000-9.0000之间，优选8.7000-8.9500之间；4号峰的相对峰面积为1.3000-1.5000之间，优选1.3500-1.4500之间；14号峰的相对峰面积为1.500-1.8000之间，优选1.6000-1.7500之间。上述相对峰面积进一步表明其具有更优的活性或药效。特别是具有更高的治疗缺血缺氧性病况的药效。本发明的缺血缺氧性病况包括气虚血瘀、胸痹心痛、中风偏瘫和倦怠气喘等。

需要说明的是，相对保留时间为以2号峰的保留时间作为参考得到的相对保留时间；相对峰面积为以2号峰的峰面积作为参考得到的相对峰面积。另外，只要以1、2、4、14号峰的信息作为判断的指标即在本发明的检测方法的保护范围内，在其他实施方案中，本发明的指标还包括其他峰的信息中的任何之一。例如，作为指标还可包括3号峰的信息等，对此不作限定。进一步研究发现，上述1号峰对应于没食子酸，2号峰对应于红景天苷，4号峰对应于酪醇，和14号峰对应于芦丁。

实施例1

一、红景天饮片(破壁)主要制备工艺如下：

1、红景天原药材拣选、除去非药用部位；

2、淋洗、破碎：淋洗拣选好的红景天并破碎至10-15cm小段；

3、干燥：对红景天进行干燥，至原药材水分在5％-9％取出；

4、粗粉碎：将红景天用万能粉碎至60-100目后，再球磨粉碎至100-500目，得原料粗粉；

5、破壁粉碎：将红景天粗粉置于气流粉碎机中，在进料压力为0.6-0.8MPa、频率35-45Hz、引风压差0.2-0.7MPa，物料含水量为7％以下、目数在60-100目的条件下进行气流粉碎，粉碎至300-800目，得红景天破壁粉；

6、微粉包合：将红景天超微粉在不添加任何辅料或添加剂进行微粉包合制粒，获得30-200目的红景天破壁饮片颗粒；

7、总混：将红景天颗粒置于三维运动混合机中混匀，确保休止角在30°-40°之间。

8、灌装：5g以下小袋包装，便于服用和携带。

二、红景天超微粉碎方式的选择

将红景天用万能粉碎至60-100目后，再球磨粉碎至100-500目，得原料药粉。

球磨粉碎是会产生热，造成多糖类、挥发油类等成分的严重损失，且球磨粉碎设备粉碎一次需对其进行清洁才能进行下一次的操作，操作繁琐、复杂、费时费力。气流粉碎以压缩空气或过热蒸汽通过喷嘴，产生高速气流，且在喷嘴附近形成很高的速度梯度，通过喷嘴产生的超音速高湍流作为颗粒载体进行粉碎，尤适用于含有热敏性成分等不稳定物质的粉碎，因红景天药材富含醇及其苷类、黄酮类、萜类、酚及其苷类、多糖类、香豆素类、挥发油类等成分，所以尤适用用气流超微粉碎方式，经过对红景天破壁饮片的系列研究，最终确定气流粉碎红景天最佳参数为：进料压力为0.6-0.8MPa、频率35-45Hz、引风压差0.2-0.7MPa，物料含水量为7％以下、目数在80-100目的条件下进行气流粉碎。

三、最佳制粒的破壁粉目数选择考察实验

在颗粒生产制备工艺中，理论认为制粒的粉体粒径大，采用干压制粒时可压性差，造成颗粒在生产过程中易松散，颗粒不均匀；制粒的粉末粒径太细，粉体吸附性大大增强，在生产过程中以吸附设备和空气中的水分，造成生产中制粒困难，且颗粒的溶散性较差。为证明上述理论，现以测定其流动性、成型性、容散性等为指标，对其最佳的制粒破壁粉目数选择进行试验。1、检测仪器

JA2003X型电子分析天平(厂家：上海精密科学仪器有限公司)、堆密度测试仪(自制)、量筒、漏斗。

2、试药

将小于400目的中药破壁粉末(Ⅰ级破壁粉)，400-800目均匀混合的中药破壁粉(Ⅱ级破壁粉)，大于800目的中药破壁粉(Ⅲ级破壁粉)在不添加任何辅料或添加剂的条件下，采用其成型压力为100kg，螺旋转速为100rpm，压轴转速为18rpm，整粒转速180rpm的微粉包合干压制粒法制粒后，分别得Ⅰ级颗粒、Ⅱ级颗粒和Ⅲ级颗粒。

3、试验方法

3.1休止角：采用固定量斗法，将三支漏斗串联起来并固定于水平放置的坐标纸上1cm高度处，小心的将不同等级粉末制成的颗粒沿漏斗倒入最上的漏斗中，直到坐标纸上形成药粉圆锥休尖端接触到漏斗下目为止，由坐标纸测出圆锥底部的直径(反复测3次)，计算出休止角(Ig∞＝H/R)，通常休止角越小，流动性较好，粒间摩擦力小。见表1。

3.2成型性：将3种不同目数的破壁粉在相同条件下通过干压法制粒成型性，结果见表1.

3.3溶散性：分别取不同等级的中药破壁粉制成的颗粒10g，加热水200ml，搅拌5分钟，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊。结果见表1。

4、结果

表1最佳制粒的破壁粉目数选择考察实验

5、结论：

(1)流动性：休止角θ是粉体流动性的重要参数，休止角越小，流动性好，粒间摩擦力小。一般认为θ＜30°流动性很好30°＜θ＜40°流动性能基本能满足生产要求，θ＞45°流动性差。由上表可知，Ⅲ级颗粒和Ⅱ级颗粒休止角差异小，说明两级破壁粉制成的颗粒流动性相近，Ⅰ级颗粒测量的休止角均大于Ⅱ级颗粒和Ⅲ级颗粒且流动性只能基本满足工艺生产要求，表明：Ⅱ级和I级破壁粉制成的颗粒流动性均优于Ⅰ级破壁粉制成的颗粒；

(2)成型性：由于Ⅰ级颗粒是采用小于400目的粉体干压成型的，相对于Ⅱ级颗粒(400-800目均匀混合)和Ⅲ级颗粒(大于800目)的粉体粒径大，成型时外观凹凸不平，产生了裂纹，主要是由于粉末中含有较大的颗粒，这些大颗粒在调质时，很难充分吸收水蒸汽中的水分和热量，不像较细的破壁粉那么易软化，而在冷却时，由于软化程度不同，导致收缩量的差异，以致干压制粒成型时易松散、制成的颗粒不均均等问题。一般来说，粒度小的原料容易压缩，粒度大的原料较难于压缩，原料的粒径越小，在相同的压力及其条件下，其粒子的延伸率或变形较大。即粒径越小更容易成型，所以制备Ⅱ级颗粒和Ⅲ级颗粒的粉体更容易干压成型。但粉体粒径小是有限度的，粒径过小则会出现丰体表面积增大，吸附性增强，导致生产设备难以清理，影响生产效率。上述实验结果表明，成型结果由优到劣是：Ⅱ级破壁粉制成的颗粒＞Ⅲ级破壁粉制成的颗粒＞Ⅰ级破壁粉制成的颗粒；

(3)溶散性：粉末粒径越大，表面张力越大，越不容易聚集，与水接触面积增大，越易溶散到水中，粉末粒度越小，粉体间相互吸附，集聚成团，越难溶散到水中。由表1实验结果可知，Ⅰ级、Ⅱ级粉体制备的颗粒在5min之内完全溶解；Ⅲ级粉体制备的颗粒在5min内未完全溶。表明Ⅰ级、Ⅱ级粉体制备的颗粒溶散性优于Ⅲ级粉体制备的颗粒，Ⅰ级和Ⅱ级粉体制备的颗粒容散性相近。

综上，从休止角、成型结果和溶散性三方面考察结果显示粉体目数在400-800目(Ⅱ级)之间的粉体是制粒的最佳目数。

实施例2

本实施例为红景天饮片(破壁)与传统饮片指纹图谱对比研究。

原样品10批来源于西藏、四川、内蒙古等产地，经鉴定为景天科植物大花红景天Rhodiolacrenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba。传统饮片粉碎过3号筛，破壁饮片经破壁粉碎加工、制粒而成。

色谱条件为：色谱柱为Agilent C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈(A)-0.02％磷酸水(B)，梯度洗脱：6％A-6％A(0-18min)，6％A-20％A(18-45min)，20％A-20％A(45-55min)，20％A-22％A(55-65min)，22％A-22％A(65-90min)，DAD检测波长278nm，流速0.8mL·min

供试品制备方法为：精密称取红景天样品约1g，置于100mL锥形瓶中，精密加入50％甲醇50mL，称定重量，超声(300W，33kHz)45min，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，再用微孔滤膜(0.45μm)滤过，备用。

对照品的制备

精密称取没食子酸、红景天苷、酪醇、芦丁对照品适量，置棕色量瓶中，分别加50％甲醇制成没食子酸0.1mg·mL

1.重复性实验稳定性实验

分别取红景天饮片(破壁)样品和传统饮片样品各1g，6份，制备供试品溶液，进行色谱检测，对采集的数据进行计算，运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012.1版进行相似度分析结果表明色谱检测方法重复性良好，且供试液在24h内稳定性良好。

2.红景天传统饮片和破壁饮片共有指纹峰的标定及确认和相似度分析

取10批红景天饮片(破壁)样品和传统饮片样品，各1g，制备供试品溶液进行色谱测定，将所得到的图谱数据参数导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012.1版，以中位数法分析，自动匹配，生成指纹图谱，10批红景天饮片(破壁)与传统饮片指纹图谱叠加图结果见图1和2。将色谱峰中峰面积较大、稳定性和重复性较好的标为共有峰，结果实验标定共有峰22个，此数据与对照品HPLC色图谱比对，确定1号峰为没食子酸，2号峰为红景天苷，4号峰为酪醇，14号峰为芦丁，色谱图结果见图3。红景天苷为红景天的主要指标成分，且出峰时间较稳定，分离度较好，故选择红景天苷为参照峰，计算各样品指纹图谱共有峰的相对峰面积和相对保留时间，结果红景天饮片(破壁)与传统饮片指纹图谱共有峰相对保留时间RSD％均小于3％，相对峰面积RSD％较大，说明各批次红景天指纹图谱共有峰的全貌基本基本一致，化学成分的组成和数量差异不大，而化学成分的含量差别较大。

将10批红景天传统饮片和破壁饮片所得色谱图数据参数，导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012.1版软件中，进行考察色谱峰相似度的一致性。相似度结果表明，10批次红景天饮片(破壁)与传统饮片的相似度差异较小，样品相似度均在0.9以上，表明本实验建立的红景天饮片(破壁)样品指纹图谱质量较稳定。

3.红景天饮片(破壁)与传统饮片指纹图谱对比研究

对比红景天药材破壁前后的HPLC指纹图谱，结果显示，红景天饮片(破壁)与传统饮片各主要色谱峰总体面貌基本一致，共有峰22个，红景天经破壁粉碎后，其色谱峰个数未见增加或消失，说明破壁粉碎后红景天的化学成分的种类和个数没有改变；通过对比破壁前后各色谱峰峰面积，结果除1、10、12、15、16、18号色谱峰峰面积略有降低外，红景天苷(2号)、酪醇(4号)、芦丁(14号)峰面积都有增加，其中3号、5号、11号、21号、22号峰峰面积显著增加，其余色谱峰峰面积也有不同程度的增加。结果见图4。

实施例3

本实施例为本发明所得到的红景天饮片(破壁)与传统饮片对缺血缺氧H9c2心肌细胞保护作用的对比研究。

称取红景天饮片(破壁)与传统饮片各1g，置具塞锥形瓶中，分别加入50％甲醇溶液50mL，密塞，称定重量，超声(300W，33kHz)提取45min，放冷，再称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.22μm微孔滤膜过滤后，制成浓度为20mg·mL

细胞铺板：取对数生长期的H9c2细胞(购于中国科学院上海细胞库)，用胰蛋白酶消化，细胞完全培养液重悬制成细胞悬液，以1×10

配制红景天破壁饮片与传统饮片的不同浓度含药培养基：0.2mg·mL

细胞分组后，正常组及模型组采用完全培养基，其余组用对应含药培养基于37℃，5％CO

CCK-8检测：取出细胞培养液(单独存放用于进行后续LDH检测)，向孔内细胞加入30μL CCK-8，于37℃恒温培养箱孵育4h后加入150μL ddH

细胞存活率＝(实验组OD值-空白孔OD值)/(正常组OD值-空白孔OD值)×100％。

结果如图5所示，与正常组比较，模型组H9c2细胞存活率显著降低(P＜0.05)，红景天破壁饮片高剂量组(B3)、传统饮片高剂量组(A3)H9c2细胞存活率无明显降低。

与模型组比较，红景天破壁饮片低(B1)、中(B2)、高(B3)剂量组及红景天传统饮片高剂量组(A3)均可显著提高H9c2细胞的存活率(P＜0.05)。相同浓度下，红景天破壁饮片对H9c2细胞存活率的提升优于红景天传统饮片。

在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。