一种啤酒酵母中过表达芳香氨基酸转氨酶II Aro9的构建方法

摘要

本发明旨在构建一种过表达芳香族氨基酸转氨酶ⅡAro9的啤酒酵母菌种，包括以下步骤：(1)菌体培养及啤酒酵母基因组的获得：首先将啤酒酵母TCCC 31194划三区培养，然后用SDS处理菌体获得啤酒酵母基因组；(2)目的基因片段的获取：设计合理的同源引物，通过PCR技术扩增出Aro9(S.c)、Aro9(S.b)目的基因；(3)基因过表达组件的构建：以pYPGE15质粒为载体，构建pYPGE15_KanMX_Aro9(S.c)、pYPGE15_KanMX_Aro9(S.b)表达载体；(4)获得重组菌株：将pYPGE15_KanMX_Aro9表达载体转入啤酒酵母TCCC 31194中，得到TCCC 31194::Aro9(S.c)、TCCC 31194::Aro9(S.b)的重组酵母；(5)啤酒发酵：将转化成功的酵母菌种在适宜条件下培养10天；(6)三醇四酯、芳香醇和芳香氨基酸含量及相关发酵性能检测。