一种用于治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的联合用药组合物及其制备方法和用途

摘要

本发明涉及一种用于治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的联合用药组合物及其制备方法和用途，所述治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的药物联合用药组合物，由绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠，以及药学上可接受的载体组成，其中绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10与磷酸肌酸钠为相同或不同规格的单位制剂，用于同时或者分别给药，将绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10与磷酸肌酸钠组合后，取得了意料不到的协同治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的效果，从而提供了一种治疗效果优异的治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的联合用药组合物，可明显延缓肌萎缩性脊髓侧索硬化症的病情进展。

说明书

技术领域

本发明属于药物领域，具体涉及一种用于治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的联合用药组合物及其制备方法和用途。

背景技术

肌萎缩性脊髓侧索硬化症(Amyotrophic Lateral Scleroisi,ALS)也称运动神经元病(MND)，俗名“渐冻症”，好发于男性，发病年龄一般为 40-70岁，是一种由于大脑皮质、脑干、脊髓的运动神经元进行性变性，导致肌肉无力、萎缩、言语、吞咽、呼吸功能障碍的神经变性疾病。尽管患者的临床表现和病情的进展速度存在相当程度的个体差异，但无一例外呈进行性加重，60％以上患者在起病3年内死亡，约有10％的患者生存期可达8年以上。大部分肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)患者的遗传病因不明，有5-10％的ALS患者是家族性ALS，而另外90-95％的患者无家族史，为散发性ALS。现有研究显示肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)的发生除与遗传有关外，还与神经炎症反应、线粒体功能障碍、蛋白聚集、自身免疫、逆转录病毒感染等多重因素存在一定的关联，并在此基础上形成了诸如氧化自由基学说、免疫学说、神经生长因子缺乏学说、兴奋性氨基酸毒性学说等，但该病确切的病因及发病机制目前仍不清楚。

临床针对肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)目前主要以施用延缓病情发展的药物，如依达拉奉、利鲁唑等。目前针对肌萎缩性脊髓侧索硬化症 (ALS)的其他治疗方法如反义疗法(Antisense therapy)、基因治疗(Gene Therapy)以及干细胞疗法仍处于探索阶段，尚未应用于临床，因此，目前针对肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)仍然缺乏行之有效的治疗方法。

绿原酸(chlorogenic acid CGA)又名咖啡鞣酸，是由咖啡酸(caffeic acid CA)和奎尼酸(quinic acid QA)组成的缩酚酸，其化学名为3-o-咖啡酰奎尼酸(3-o-caffeoylquinic acid CGA)，具有心血管保护作用、抗氧化、抗紫外及抗辐射、抗诱变、抗癌、抗菌、抗病毒、降脂降糖、免疫调节等多种。已有报道称绿原酸具有一定的肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS) 的治疗效果，但其效果仍不理想。

本发明在现有技术的基础上对绿原酸治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症 (ALS)进行了深入研究，致力于提供一种治疗效果更为优异的肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)的治疗药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的联合用药组合物，其特征在于由绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠，以及药学上可接受的载体组成。

优选的，所述绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10与磷酸肌酸钠

为相同或不同规格的单位制剂，用于同时或者分别给药。

优选的，所述绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠的质量比为100-300：100-500：75-600：100-600：500-2500。

更优选的，所述绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠的质量比为150-250：250-400：200-400：200-400：800-2000。

最优选的所述绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠的质量比为180:300:300:300：1000。

优选的所述维生素E为α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯，所述辅酶Q10 选自脂溶性辅酶Q10或水溶性辅酶Q10。

所述联合用药组合物优选的为口服制剂或注射剂，优选的，所述口服制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、固体分散体、口服液，所述注射制剂为注射液或冻干粉针剂。

所述药学上可接受的载体选自：稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂或助流剂、矫味剂、包衣剂、明胶胶囊壳、溶剂、冻干保护剂等。

所述稀释剂选自淀粉、糊精、微晶纤维素等；所述粘合剂选自：淀粉浆、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚维酮等；所述崩解剂选自羧甲基淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠等；所述润滑剂或助流剂选自：硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶等；所述溶剂选自：水、注射用水等；所述冻干保护剂选自甘露醇等。

本发明用于治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的联合用药组合物中活性成分绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠占联合用药组合物总重量的1-99％，优选的联合用药组合物中活性成分绿原酸、维生素 E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠占联合用药组合物总重量的5-25％，最优选的，联合用药组合物中活性成分绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠占联合用药组合物总重量的15％。

本发明用于治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的联合用药组合物的使用剂量为1-100mg/Kg体重，优选的为5-60mg/Kg体重，最优选的为20mg/Kg 体重。

本发明的另一个目的是提供一种用于治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的联合用药组合物的制备方法：以绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶 Q10和磷酸肌酸钠为有效成分，加入药学上可接受的载体制成。

优选的，所述联合用药组合物为口服制剂或注射制剂。

所述药学上可接受的载体选自：稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂或助流剂、矫味剂、包衣剂、明胶胶囊壳、溶剂、冻干保护剂等。

所述稀释剂选自淀粉、糊精、微晶纤维素等；所述粘合剂选自：淀粉浆、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚维酮等；所述崩解剂选自羧甲基淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠等；所述润滑剂或助流剂选自：硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶等；所述溶剂选自水、注射用水等；所述冻干保护剂选自甘露醇等。

本发明的再一个目的是，提供绿原酸与维生素E、维生素C、辅酶 Q10和磷酸肌酸钠的组合在制备治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的联合用药组合物中的用途。

优选的，所述绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠的质量比为100-300：100-500：75-600：100-600：500-2500。

更优选的，所述绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠的质量比为150-250：250-400：200-400：200-400：800-2000。

最优选的所述绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠的质量比为180:300:300:300:1000。

优选的所述维生素E为α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯，所述辅酶Q10 选自脂溶性辅酶Q10或水溶性辅酶Q10。

所述联合用药组合物优选的为口服制剂或注射剂，优选的，所述口服制剂选自：片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、固体分散体、口服液等，所述注射制剂为注射液或冻干粉针剂。

本发明有益效果

本发明在现有技术的基础上，通过大量筛选研究，意外发现了绿原酸与单独治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症效果并不明显的辅助治疗药物联合用药后，取得了意料不到的协同治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的效果，且各药物组成配比对联合用药组合物对肌萎缩性脊髓侧索硬化症的治疗效果有显著影响，本发明筛选得到了绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶 Q10与磷酸肌酸钠的最优配比，从而获得了一种治疗效果优异的肌萎缩性脊髓侧索硬化症的治疗联合用药组合物，可明显延缓肌萎缩性脊髓侧索硬化症的病情进展。

本发明治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的联合用药组合物中各成分均安全、无毒副作用，联合用药组合物制备方法简单、适合工业化生产。

具体实施方式

在下文中更详细地描述了本发明以有助于对本发明的理解。

实施例1:一种治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的联合用药组合物

由含绿原酸300mg的单位制剂、含维生素E500mg的单位制剂、含辅酶Q10 600mg的单位制剂、含磷酸肌酸钠2500mg的单位制剂组成，所述联合用药组合物中各单位制剂同时或分别给药。

实施例2：一种治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的片剂

绿原酸300g、维生素E500g、维生素C600g、辅酶Q10 600g、磷酸肌酸钠2500g，按照以下方法制备：

(1)备料：按照配方称取各原料药；

(2)混合：将绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠混合均匀后添加微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基淀粉钠后湿法制粒，添加硬脂酸镁后压片，共制成10000 片，每片含绿原酸30mg，即得本发明治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的片剂。

实施例:3、一种治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的胶囊剂

绿原酸180g、维生素E300g、维生素C300g、辅酶Q10 300g、磷酸肌酸钠1000g，按照以下方法制备：

(1)备料：按照配方称取各原料药；

混合：将绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10和磷酸肌酸钠混合均匀后添加微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基淀粉钠后湿法制粒，添加硬脂酸镁后填充，于明胶胶囊壳，共制成6000粒，每粒含绿原酸 30mg，即得本发明治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的胶囊剂。

实施例4、一种治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的冻干粉针剂

绿原酸100g、α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯100g、维生素C75g、水溶性辅酶Q10100g、磷酸肌酸钠500g，按照以下方法制备：

将以上处方完全溶解于注射用水中，过滤后，再用0.22μm的除菌微孔滤膜精滤，调节pH后，按照无菌粉针剂的常规操作共制成2ml 粉针剂2000支，每支含绿原酸50mg，即得本发明治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症的冻干粉针剂。

效果例1：本发明联合用药组合物对肌萎缩性脊髓侧索硬化症小鼠运动功能和存活时间的影响

1.1实验药物

阳性对照药：利鲁唑；

本发明联合用药组合物1：绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10 和磷酸肌酸钠，其质量比为180:300:300:300:500；

本发明联合用药组合物2：绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10 和磷酸肌酸钠，其质量比为180:300:300:300:1000；

本发明联合用药组合物3：绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10 和磷酸肌酸钠，其质量比为180:300:300:300:2000；

对照1：绿原酸

对照2：绿原酸、维生素E，其质量比为180:300；

对照3：绿原酸、维生素E、维生素C，其质量比为180:300:300。

对照4：绿原酸、维生素E、维生素C、辅酶Q10，其质量比为 180:300:300:300；

对照5：维生素E、维生素C、辅酶Q10、磷酸肌酸钠，其质量比为300:300:300:1000；

对照6：磷酸肌酸钠。

1.2实验动物及实验方法

2月龄野生型BALB/C小鼠10只，作为正常对照组，2月龄 hSOD1-G93A转基因小鼠110只，随机分为11组，每组10只，依次为：空白组、阳性对照组、本发明药物组合物1-3组、对照1-6组。

所有小鼠适应性饲养三周，每周进行一次转棒实验，转棒直径3.5cm，转棒转速为12r/min，每只小鼠平行进行3次，每次间隔5min，记录最长时间为小鼠的坠落时间，剔除第三周转棒实验中坠落时间短于7min的小鼠，随后开始灌胃给药，其中正常对照组与空白组灌胃生理盐水、阳性对照组、与本发明联合用药组合物1-3组、对照1-6组灌胃相应药物，灌胃体积均为0.5ml，其中阳性对照组灌胃剂量为2mg/Kg体重，本发明药物组合物1-3组与对照1-6组的灌胃剂量均为40mg/Kg体重，每天灌胃1 次，连续灌胃4周。第1、7、14、21、28次灌胃1h后，进行转棒试验，每次每只小鼠实验3次，每次间隔5min，记录最长时间为小鼠的坠落时间，超过10min仍未坠落的，停止实验，坠落时间记为10min。第28次灌胃后小鼠继续饲养，并观察记录各组存活超120天小鼠的数量，其中将小鼠仰卧位放置后，30S内无法翻身为俯卧位即判定小鼠死亡，具体结果见表1。

1.3实验结果

应用统计软件SPSS的多因素方差分析模块进行数据分析，P<0.05表示差异有统计学意义。

表1实验结果显示在转棒实验中hSOD1-G93A转基因小鼠相对于BALB/C小鼠在灌胃第一天时坠落时间已明显缩短，实验中存活超过120天的小鼠数量也明显低于BALB/C小鼠，表明随肌萎缩性脊髓侧索硬化症病情的进展，hSOD1-G93A小鼠运动能力逐渐丧失，并逐步导致了小鼠的死亡。

表1药物组合物对hSOD1-G93A小鼠运动功能和存活时间的影响

与正常对照组比较：##P<0.01；与空白组比较：*P<0.05,**P<0.01。

hSOD1-G93A小鼠在灌胃阳性对照药利鲁唑后，小鼠在转棒实验中坠落时间相对于与空白组小鼠明显延长，存活超过120天的小鼠数量也由空白组的2只增加为4只，显示了利鲁唑具有延缓肌萎缩性脊髓侧索硬化症病情进展的效果。

hSOD1-G93A小鼠在灌胃绿原酸、绿原酸与维生素E的组合、绿原酸与维生素E和维生素C的组合、绿原酸与维生素E、维生素C和辅酶Q10的组合后也均显示了一定的延缓肌萎缩性脊髓侧索硬化症病情进展的效果，其中绿原酸与维生素E、维生素C和辅酶Q10组合具有与阳性对照药物利鲁唑大体相当的延缓肌萎缩性脊髓侧索硬化症病情进展的效果。

灌胃本发明联合用药组合物的本发明药物组合物1-3组小鼠的坠落时间相对于空白组显著延长，存活超过120天的小鼠数量也显著增加，其中小鼠坠落时间及存活超过120天小鼠只数指标均明显优于利鲁唑，证明了本发明联合用药组合物取得了优异的延缓肌萎缩性脊髓侧索硬化症病情进展的效果。

对比本发明药物组合物1-3组与对照1-6组的实验结果可以发现，虽然灌胃维生素E、维生素C、辅酶Q10、磷酸肌酸钠的对照5组与单独灌胃磷酸肌酸钠的对照6组小鼠在坠落时间及存活超过120天的小鼠只数指标上均与空白组大体相当，但添加磷酸肌酸钠的本发明联合用药组合物1-3组小鼠的坠落时间及存活超过120天小鼠只数指标均明显优于未包含酸肌酸钠的对照4组小鼠，从而证明了在绿原酸与维生素E、维生素C和辅酶Q10 的组合中添加延缓肌萎缩性脊髓侧索硬化症病情进展效果并不明显的磷酸肌酸钠后，联合用药组合物延缓肌萎缩性脊髓侧索硬化症病情进展的效果取得了意料不到的显著的增强。

对比本发明联合用药组合物1-3组的实验结果可以发现，随着磷酸肌酸钠含量的增加，本发明药物组合物2组小鼠显示了明显优于本发明联合用药组合物1组的延缓肌萎缩性脊髓侧索硬化症病情进展的效果，而随着磷酸肌酸钠含量的进一步增加，本发明联合用药组合物3组延缓肌萎缩性脊髓侧索硬化症病情进展的效果相对于本发明联合用药组合物2组出现了相当程度的降低，猜测其可能的原因为随着磷酸肌酸钠含量的进一步增加，导致了联合用药组合物中绿原酸、维生素E、维生素C和辅酶Q10的含量降低，从而影响了联合用药组合物整体延缓肌萎缩性脊髓侧索硬化症病情进展的效果。

以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。