法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2020-07-10
授权
授权
2018-11-30
实质审查的生效 IPC(主分类):G01N30/02 申请日:20180815
实质审查的生效
2018-11-06
公开
公开
技术领域
本发明属于啤酒技术领域,尤其涉及一种同时检测啤酒中萜烯、萜烯醇 异构体和萜烯酯类物质的方法。
背景技术
酒花是啤酒重要的原料之一,赋予啤酒有别于其它酒种或饮料的独特苦 感和香气。随着检测技术的提高,品评的细化,发现酒花制品中同时含有R 型和S型里那醇,S型在啤酒中的感官阈值高达180μg/L,而R型仅为2.2 μg/L,二者相差约81倍。R型里那醇异构化为S型里那醇是导致啤酒酒花 香气下降的原因之一。这就需要我们的检测技术进一步提高,具有鉴别啤酒 中萜烯醇异构体的能力,从而结合品评可对现有酒花香气物质进行阈值研究。
现有文献中有关于里那醇、酒花萜烯醇及其异构体的相关报道,例如《固 相微萃取(SPME)结合稳定同位素稀释试验(SIDA)定量啤酒中的(R)和(S)里那 醇》(J.Agric.FoodChem.2003,51,7100-7105)中利用同位素稀释试验 对(R)和(S)里那醇进行了分离,从图1中可以看出,利用同位素可改变两峰 的分离度,使其完全分离。但使用同位素不管是从经济还是环保安全角度都 无法进行大范围的推广意义,且该方法只能检测很少的物质。《酒花萜烯醇及 其立体异构体在啤酒酿造中的检测及其变化研究》(分析与检测,2014年第 40卷第7期)中对酒花萜烯醇及其异构体进行了分离,但从图2中可以看出, 不仅里那醇没有被有效分离,香茅醇更是没有被分离,基本属于一个峰形。 但这已经是同类中外文章中分离效果最好的示例。此外,在该篇文献中未涉 及萜烯氧化物如里那醇氧化物、法尼醇等的相关检测,而该成分也是酒花香 气的重要组成部分。因此,目前尚未提出一种能够同时检测啤酒中萜烯、萜 烯醇、萜烯酯等多种物质的有效检测方法。
发明内容
本发明提出一种同时检测啤酒中萜烯、萜烯醇异构体和萜烯酯类物质的 方法,能够同时有效检测啤酒中萜烯、萜烯醇、萜烯酯等多种物质。
为了达到上述目的,本发明提供了一种同时检测啤酒中萜烯、萜烯醇异 构体和萜烯酯类物质的方法,利用顶空固相微萃取联用气相色谱质谱技术同 时检测啤酒中的萜烯、萜烯醇和萜烯酯类物质。
作为优选,所述顶空固相微萃取具体包括:
将啤酒液排气,取5mL加入20mL顶空瓶中;
向顶空瓶中加入2g NaCl;
将DVB/CAR/PDMS纤维萃取头插入装有衍生液的顶空瓶中进行萃取。
作为优选,萃取条件为:将衍生液在50-65℃下预保温10-20min,然后 在震动速度500-600rpm、萃取温度50-65℃的条件下萃取60-80min。
作为优选,所述气相条件为:
进样口温度为250℃,进样口采用不分流模式,色谱柱为采用RTSTEK和 RT-bDEXsm两根色谱柱串联使用,载气条件为氦气,气速为1mL/min,色谱升 温程序为:在80℃保持400min,然后以2℃/min升温至100℃保持100min, 再以2℃/min升温至170℃保持60min,最后以15℃/min升温至220℃保持 30min,共638min。
作为优选,所述质谱条件为:
离子源EI为70eV,进样口温度为2300℃,离子源温度为230℃,四级杆 温度为180℃。
作为优选,所述萜烯、萜烯醇和萜烯酯类物质包括香叶烯、里那醇氧化 物(+)、里那醇氧化物(-)、R-(-)-里那醇、S-(+)-里那醇、(-)萜品醇、(+) 萜品醇、S-(+)-香茅醇、R-(-)-香茅醇、香叶醇、橙花醇、葎草烯、乙酸香 叶酯、橙花叔醇、葎草烯氧化物Ⅱ、法尼醇和反式法尼醇。
与现有技术相比,本发明的优点和积极效果在于:
本发明所提供的方法能够同时检测包括萜烯、萜烯醇、萜烯酯在内的三 大类共17种物质,且检测物质分离度好,检测误差小。该方法前处理简单, 不需要手动萃取,自动化程度高,且不需要使用同位素等有放射性物质,安 全可靠,适用范围更广。
附图说明
图1为现有技术中所提供的利用同位素稀释试验对R和S里那醇的分离 图,具体为:Effect of amount of salt dissolved in beer on the relative area counts oflinalool(m/z 137;MS/CI)obtained by dividing the area counts by the areacounts at saturation(3.3g of NaCl in 10ml of beer);
图2现有技术中所提供的酒花萜烯醇及其立体异构体的分离图,具体为
图3及图3(续)为本发明实施例1所提供的啤酒液中已分离鉴别的17 种化合物的气质全分析谱图。
具体实施方式
为了更清楚详细地介绍本发明实施例所提供的同时检测啤酒中萜烯、萜烯 醇异构体和萜烯酯类物质的方法,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清 楚、完整地描述,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的 实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动 前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1啤酒样品检测
将啤酒液排气,取5mL加入20mL顶空瓶中,向顶空瓶中加入2g NaCl, 混匀,将衍生液在50-65℃孵化箱中预保温10-20min,然后在震动速度 500-600rpm、萃取温度50-65℃的条件下,将DVB/CAR/PDMS纤维萃取头插入 装有衍生液的顶空瓶中2cm萃取60-80min。萃取后,将萃取液送入气质检测, 其中,气相条件具体为:
进样口温度为250℃,进样口采用不分流模式,色谱柱为采用RTSTEK和 RT-bDEXsm两根色谱柱串联使用,载气条件为氦气,气速为1mL/min,色谱升 温程序为:在80℃保持400min,然后以2℃/min升温至100℃保持100min, 再以2℃/min升温至170℃保持60min,最后以15℃/min升温至220℃保持 30min,共638min。
质谱条件具体为:离子源EI为70eV,进样口温度为2300℃,离子源温度 为230℃,四级杆温度为180℃。
待检测后,得到气质分析谱图,如图3及图3续所示。其中,分离鉴别 得到17种酒花香气物质,分别为:香叶烯、里那醇氧化物(+)、里那醇氧化 物(-)、R-(-)-里那醇、S-(+)-里那醇、(-)萜品醇、(+)萜品醇、S-(+)-香茅 醇、R-(-)-香茅醇、香叶醇、橙花醇、葎草烯、乙酸香叶酯、橙花叔醇、葎 草烯氧化物Ⅱ、法尼醇和反式法尼醇。
实施例2定性、定量离子的设定
痕量物质的检测中定性离子的设定:定性离子一般为质荷比大且响应值高 的离子。质荷比小的离子不具有代表性,很多物质都可以裂解出来。响应值高 是为了提高检测限,便于定量。总之,响应越高,越不易被干扰。定量离子一 般选响应值最大的离子,如有干扰,可以选次高的。通过定性离子比例的自动 判断,可以减少共馏出物的干扰。Q0是定量离子,Q1、Q2、Q3是定性离子。本 实施例中选用的定性、定量离子如表1所示。
表1各物质的定性、定量离子
实施例3标准曲线的建立
本实施例中所使用的各物质的标品浓度及厂家如表2所示,标准曲线建立 方法具体为:单独称取每一个物质的标品到10mL棕色容量瓶内,用无水乙醇进 行溶解,定容,计算每一个的最终配成溶液浓度,然后将每一个单标按照计算 后的体积,混合配制成表3中的浓度梯度4,然后逐级稀释成为其它浓度梯度。 详见表3及表3(续)。
表2各物质的标品浓度及厂家
表3标准曲线
表3(续)
实施例4加标回收率试验
将啤酒液排气,取5mL加入20mL顶空瓶中,向顶空瓶中加入2g NaCl,混 匀,取平行样品瓶五份。第一份不添加,其余四份分别加入标液浓度1、2、3、 4,分别上机检测。加入标液的啤酒检测结果扣除第一份空白啤酒的检测值,除 以各自的添加浓度,得到相应的加标回收率,相关数据如表4及表4续所示。
表4加标回收率试验数据
表4(续)
实施例5重现性
将啤酒液排气,取5mL加入20mL顶空瓶中,向顶空瓶中加入2g NaCl,旋 盖扭紧,混匀,做六个平行样。上机检测,每一个检测物质通过计算相对标准 偏差,得到最终的RSD,相关数据如表5所示。
表5重现性试验数据
实施例6应用实例
利用无糖苷结合物的酒花精油和二氢浸膏作为实验酒研究酒花香气,进行 30L发酵试验,初沸添加0.2g精致酒花油46-514(青岛特制),煮终添加1g精 致酒花油46-514和3.2g凯斯克二氢46-508。麦汁10.5°P。酵母接种量2000 万/mL,9.5-10.5℃主酵还原,糖度4.8°P封罐,双乙酰降至20μg/L降零,冷 贮。各工艺条件下各物质含量详见表6及表6续。
表6各工艺条件下各物质含量
表6(续)各工艺条件下各物质含量
由上述实施例可知,本发明实施例所提供的方法能够同时检测包括萜烯、 萜烯醇、萜烯酯在内的三大类共17种物质,检测物质分离度好,检测误差小, 能够有效检测得到各工艺条件下各酒花香气物质的含量。
机译: 分离的,合成的或重组的核酸序列,嵌合基因,载体,宿主细胞,多肽,增加至少一种萜烯的产生,减少至少一种萜烯的产生,降低萜烯水平,产生萜烯,萜烯异构体的方法或萜烯类似物,并通过至少产生一种萜烯,植物和组织培养物的标记进行渗入
机译: 松萜烯萜烯制萜烯醇的方法
机译: 与萜烯,倍半萜烯和丙二醇二丙二醇一起稳定含肉桂醛的调味剂,并将其用于牙科剂组合物中。