质粒组合物、DNAPK基因敲除大鼠模型的构建方法及应用

摘要

本发明公开了一种质粒组合物、DNAPK基因敲除大鼠模型的构建方法及应用。通过构建特定的能够特异性地识别大鼠DNAPK基因上的两段相邻核苷酸序列的一对转录激活子样效应因子，并利用这对转录激活子样效应因子获得一对转录激活子样效应因子核酸酶，对大鼠DNAPK基因进行准确、高效的打靶，进而获得DNAPK基因敲除大鼠模型。

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地涉及一种质粒组合物、DNAPK基因敲除大鼠模型的构建方法及应用。

背景技术

全世界范围内针对人类不同疾病进行治病机理研究和药物开发从未停止，但由于受到人类自身伦理和技术实现的限制，很多研究不能在人类自体上直接进行，而需要在与人类相近的动物体上进行实验。大鼠作为啮齿类模式动物，已经成为人疾病相关基础研究和药物开发不可或缺的动物模型。近年来，通过基因工程技术改造大鼠特定基因从而得到特定基因型和表型的模式大鼠已经成为研究热点，其中免疫缺陷大鼠模型的建立对人类疾病研究和药物开发具有重大意义。

DNAPK基因编码的蛋白被称为DNA依赖蛋白激酶的催化亚基，具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性，在非同源重组的DNA修复(NHEJ)中起重要作用。在免疫细胞的V(D)J重排中起重要作用。已有研究发现，在DNAPK基因缺失的小鼠和人体内，可导致细胞内非同源重组能力的缺失，成熟B细胞和T细胞的比例严重降低，从而使得免疫能力严重缺失，因此又被称为重度联合免疫缺陷症(Severe Combined Immunodeficiency，SCID)。缺失了DNAPK基因功能的小鼠被称为SCID小鼠，已被广泛用于异体移植、免疫疾病研究和人源化小鼠的制备中。由于胚胎干细胞提取和培养方法在大鼠上还不成熟，长期以来利用传统方法制备大鼠基因敲除模型比较困难。与小鼠相比，大鼠生理结构更接近人类，其体形大，能够提供足够血样且易于进行手术操作，可以弥补小鼠模型的不足，而且有关大鼠免疫系统疾病的研究和模型开发仍处于起步阶段，因此本领域有必要制备DNAPK缺失大鼠模型。

现有研究表明，具有F344背景的基因敲除大鼠的免疫缺陷程度更严重，且表现一些不同的表型，包括体型较小、繁殖功能低下、生长迟缓、早衰且无免疫“渗漏”现象。已知F344大鼠因自身血清胰岛素含量低、脑垂体大、易自发生成肿瘤，被广泛用于癌症发生的研究，局限性较大。有鉴于此，有必要制备其他背景的基因敲除大鼠模型。

发明内容

为了解决至少部分上述技术问题，本发明通过构建特定的能够特异性地识别大鼠DNAPK基因上的两段相邻核苷酸序列的一对转录激活子样效应因子，并利用这对转录激活子样效应因子获得一对转录激活子样效应因子核酸酶，对大鼠DNAPK基因进行准确、高效的打靶，进而获得DNAPK基因敲除大鼠模型。至少基于上述部分内容完成了本发明。具体地，本发明包括以下内容。

本发明提供一种用于引起细胞内基因组结构改变的质粒组合物，所述质粒组合物包含第一质粒和第二质粒，所述第一质粒用于产生第一多肽，所述第二质粒用于产生第二多肽；

其中所述第一多肽能够特异性识别并结合SEQ ID NO:2所示的序列或其互补序列，所述第二多肽能够特异性识别并结合SEQ ID NO:3所示的序列或其互补序列；和

所述SEQ ID NO:2所示的序列和所述SEQ ID NO:3所示的序列各自为源自大鼠DNAPK基因第4外显子的序列。

根据本发明的质粒组合物，优选地，所述大鼠DNAPK基因第4外显子具有SEQ IDNO:1所示的序列。

根据本发明的质粒组合物，优选地，所述第一质粒的碱基序列如SEQ ID NO:5所示，和/或第二质粒的碱基序列如SEQ ID NO:6所示。

本发明还提供一种引起细胞内基因组结构改变的方法，所述方法包括使用上述质粒组合物的步骤。

根据本发明的方法，优选地，所述方法进一步包括使所述第一质粒和/或所述第二质粒进行体外转录得到体外转录产物的步骤，还包括使所述体外转录产物进行翻译的步骤。

根据本发明的方法，优选地，所述细胞为受精卵细胞。

根据本发明的方法，优选地，所述细胞为SD大鼠原核期受精卵。

本发明也提供一种DNAPK基因敲除大鼠的构建方法，所述构建方法包括使用上述质粒组合物的步骤；或者包括以上述引起细胞内基因组结构改变的方法作为其步骤。

根据本发明的构建方法，优选地，所述的构建方法进一步包括如下步骤：

使所述第一质粒和/或所述第二质粒转录产生相应的转录产物的步骤；

将所述转录产物引入所述大鼠原核期受精卵的细胞质或细胞核中的步骤；和

培养所述受精卵，并将所述受精卵移植进入母鼠的步骤。

本发明进一步提供一种DNAPK基因敲除大鼠在生物医药领域中的应用，所述DNAPK基因敲除大鼠通过上述构建方法构建获得。

通过本发明克服现有模型制备方法的缺陷，简化制备和筛选流程，提高免疫缺陷大鼠模型制备成功率，本发明建立的免疫缺陷大鼠可广泛用于肿瘤异体移植研究、人源化大鼠开发和自身免疫及感染性疾病研究。

附图说明

图1、DNAPK基因敲除位点中可以识别序列L的DNA构建载体示意图。

图2、DNAPK基因敲除位点中可以识别序列R的DNA构建载体示意图。

图3、DNAPK基因敲除基因组打靶后目的基因序列的测序结果。

图4、DNAPK基因敲除大鼠与野生型SD大鼠的流式分析结果，其中，WT为野生型SD大鼠，KO为DNAPK基因敲除大鼠。

具体实施方式

现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。

应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。

除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料(例如，组合物或试剂盒)，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。

本发明中，名词术语既包括单数形式，也包括复数形式，除非上下文另行明确指出。本发明中所述的“至少之一”或“至少一种”不仅仅指包含“一个”或“一种”的情况，更重要的还包含“多个”或“多种”的情况。

本发明中所用术语“质粒组合物”是指包含至少第一质粒和第二质粒的组合物，其中第一质粒能够产生第一多肽，所述第一多肽能够特异性结合基因靶序列的特定区域，第二质粒能够产生第二多肽，所述第二多肽能够特异性结合靶序列的另一特定区域。优选地，两个特定区域不存在重叠区。进一步优选两个特定区域之间具有特定的序列间隔。例如，SEQ ID NO:4所示的序列间隔。

本发明通过优化第一多肽和第二多肽的结构，使所述两种多肽在适于反应的条件下能够组装形成具有核酸酶活性的二聚体，在特异性识别并结合SD大鼠DNAPK基因第4外显子中具有式T(Nn)A所示结构的序列的同时对特定区域的碱基进行裂解或切割，并且经细胞的非同源性末端接合以在细胞基因或基因组中产生改变的DNA。式T(Nn)A中，N为A、G、T和C中的任一碱基，n为13至21之间的任一整数。通过本发明优化得到的多肽或其聚合体能够以第4外显子上的序列(SEQ ID NO:1)作为其特异性靶序列。

在示例性实施方案中，第一质粒的碱基序列如SEQ ID NO:5所示，和/或第二质粒的碱基序列如SEQ ID NO:6所示。

本发明的质粒组合物可包含其他成分。其他成分的实例包括用于质粒转录为mRNA的试剂，或用于将mRNA翻译为多肽的试剂。所述转录或翻译所作用的试剂为本领域内已知的任何试剂。

本发明中，提供使用本发明的质粒组合物引起细胞内基因组结构改变的方法。其中所述细胞为可以引入外来核酸并使其表达的任何细胞。其实例包括但不限于，例如体细胞、干细胞、动物细胞。优选所述细胞为对待改变的DNA有利的或希望的细胞。例如，所述细胞可为哺乳动物细胞，例如鼠类细胞，特别优选为大鼠细胞，如SD大鼠细胞。另外，所述细胞优选为干细胞，包括生殖细胞，特别优选受精卵。本发明中，还优选所述细胞为未进行人工干预处理过的细胞。

本发明中，“基因组结构的改变”，有时可也称作基因编辑，是指基因组中由DNA分子内核酸之间的键的水解(切割)引起的序列的任何改变，包括但不限于碱基或碱基片段的缺失、插入以及序列的重新排列。优选地，所述改变是指能够引起基因功能异常的改变。所述异常包括基因功能的完全丧失、基因功能的减弱和表达关闭等。优选地，基因组结构的改变引起基因功能的完全丧失，即产生基因敲除。

在本发明中，基因组结构的改变是由于第一多肽和第二多肽所形成的二聚体产生的核酸酶活性引起。所述核酸酶活性是指识别长度范围为10～45个碱基对(bp)，通常长度范围为10～35个碱基对，更通常12～20个碱基对的核酸靶位点的核酸内切酶，更优选高度特异性的稀切核酸内切酶。

在本发明中，本发明的引起细胞内基因组结构改变的方法包括使本发明的质粒组合物进入细胞内进行转录的步骤。其中将质粒引入细胞内的方法为本领域内通常已知的任何方法，只要能够允许所述质粒在细胞或细胞亚细胞区室内部进行转录表达能够组装为具有核酸酶活性的多肽即可。具体方法的实例包括病毒转导、电穿孔以及脂质体递送、聚合物载体、化学载体、脂质复合物(lipoplex)、聚合复合物(polyplex)、树枝状聚合物、纳米粒子、乳剂、天然内吞作用或吞噬途径等。优选显微注射方式。

在本发明中，本发明的引起细胞内基因组结构改变的方法可以包括使所述第一质粒和/或所述第二质粒进行体外转录得到体外转录产物的步骤。其中所述体外转录是指在体外无细胞系统中，用DNA例如质粒作为模板，模仿体内转录过程生成RNA，例如mRNA的过程。体外转录可使用本领域内已知的任何技术。

在本发明中，体外转录包括线性化质粒的步骤，质粒的线性化有利于转录。在示例性实施方案中，体外转录还包括纯化质粒的步骤。在示例性实施方案中，体外转录包括避免RNase污染的步骤，例如苯酚·氯仿处理等步骤。在示例性实施方案中，体外转录包括构建适于反应的条件的步骤。所述条件包括37℃～42℃的温度环境，以及控制RNase-free的环境等。在示例性实施方案中，体外转录包括加尾或加帽过程。

在示例性实施方案中，体外转录的体系如下(总体积20μL)：

10*basal reaction buffer

2μL 5*accelerator solution

4μL 25mM rNTPs mixture

4.5μL RNase Inhibitor

0.5μL Template DNA

100ng-1μg Thermo T7 RNA polymerase

1μL Nuclease-free water

在示例性实施方案中，体外转录使用市售试剂盒进行。例如，T7体外转录试剂盒(Biomics Biotech)或Ambion体外转录试剂盒(Thermo Fisher)等。

在示例性实施方案中，第一质粒和所述第二质粒同时进行所述体外转录；或者第一质粒和所述第二质粒分别进行所述体外转录。同时进行转录包括使第一质粒和第二质粒的混合物与体外转录体系接触的过程。分别进行转录包括使第一质粒在第一体外转录体系反应，第二质粒在第二体外转录体系反应的过程，其中第一和第二体外转录体系中的反应可同时进行或依次进行。

在本发明中，引起细胞内基因组结构改变的方法可以包括使所述体外转录产物进行翻译的步骤。例如可使用RTS(Rapid Translation System)进行所述体外翻译。在示例性实施方案中，所述体外转录和体外翻译系统可一体化实现。在体外翻译的情况下，引起细胞内基因组结构改变的方法还包括将作为翻译产物的多肽引入细胞内的步骤。作为引物方法可使用本领域内已知的任何方法，例如显微注射等。

在本发明中，引起细胞内基因组结构改变的方法可以包括在细胞内进行翻译的步骤。所述细胞内翻译由于能够充分利用细胞内的有利环境，并且翻译产物可直接作用于靶基因，所以是优选的。

本发明还提供DNAPK基因敲除大鼠的构建方法。优选地，所述大鼠为SD大鼠。本发明的构建方法至少包括使用本发明所述的质粒组合物的步骤；或者包括以本发明所述的引起细胞内基因组结构改变的方法作为其步骤。关于质粒组合物以及引起细胞内基因组结构改变的方法的参见上述详细描述。

在本发明中，本发明的DNAPK基因敲除大鼠的构建方法可以包括将各所述转录产物分别或同时引入所述大鼠原核期受精卵的细胞质或细胞核中的步骤。所述引入方法可参见上述关于将转录物引入细胞的详细描述。

在本发明中，本发明的DNAPK基因敲除大鼠的构建方法还可以包括培养受精卵的步骤。其中受精卵优选原核期受精卵。培养方法包括为受精卵提供适于其生长的与体内类似的环境，从而促进其生长分裂。受精卵的培养通常需要较短的时间，只要受精卵分裂至两到四个细胞即可离开培养环境而置入动物子宫。

在本发明中，本发明的DNAPK基因敲除大鼠的构建方法还可以包括将受精卵移植进入母鼠的步骤。所述移植方法为本领域内已知的任何方法。

关于受精卵培养和受精卵移植的具体方法，可参见例如，《小鼠胚胎操作实验手册(第三版)》中记载的方法。

本领域技术人员应理解，只要能够实现本发明的目的，本发明的步骤的顺序并不特别限定。此外，两个以上的步骤可合并同时进行。另外，本领域技术人员还应理解的是，在本发明的各步骤前后，或这些任意步骤之间还可包含其他步骤或操作。

本发明还提供DNAPK基因敲除大鼠在生物医药领域中的应用。其中所述应用包括但不限于肿瘤异体移植研究、人源化大鼠开发和自身免疫及感染性疾病研究。

本说明书提到的所有专利和出版物都是通过参考文献作为整体而引入本发明的。本领域的技术人员应认识到，对本发明可作某些改变并不偏离本发明的构思或范围。

下面的实施例进一步详细说明本发明，不能认为是限制本发明或本发明所说明的具体方法的范围。

除非另有说明，否则本发明中所使用的试剂、材料和设备在本领域内通常可得，例如可通过市场容易的购买。在下述每一实施例中，设备和材料的来源如下：

SD大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司

Ambion体外转录试剂盒购自Thermo Fisher，货号:AM1344

Ambion加尾试剂盒购自Thermo Fisher，货号:AM1350

实施例1大鼠DNAPK基因特异TALEN序列的设计和识别模块的构建

1)TALEN靶位点的筛选

根据SD大鼠DNAPK基因的序列特征，选择第4外显子上的序列作为TALEN识别的靶序列，大鼠基因第4外显子核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本实验中将结构为T(Nn)A的核苷酸序列作为TALEN识别靶序列，其中N为A，G，T和C中的任一碱基，n为13至21之间的任一数字。

在SEQ ID NO:1中，选择其中的部分序列，例如SEQ ID NO:2所示的序列作为TALEN识别的上游靶序列(序列L)，同时选择SEQ ID NO:3所示的序列作为TALEN识别的下游靶序列(序列R)。另外，在SEQ ID NO:2和3之间具有SEQ ID NO:4所示的序列间隔。即，本实验中靶序列如SEQ ID NO:7所示。

其中，上游靶序列对应靶序列所示的2～19位核苷酸；下游靶序列对应靶序列所示的36～52位核苷酸序列。

如图1所示，构建能识别上游序列的DNA载体作为载体1，其序列参见SEQ ID NO:5。如图2所示构建能识别下游序列的DNA载体作为载体1，其序列参见SEQ ID NO:6。

实施例2显微注射及胚胎移植

取SD大鼠的原核期受精卵，利用显微注射仪将预混好的载体1和载体2质粒的体外转录产物注射至大鼠受精卵细胞质或细胞核中。参照《小鼠胚胎操作实验手册(第三版)》中的方法进行受精卵的显微注射，注射后的受精卵转移至培养液中短暂培养，然后移植至受体母鼠的输卵管，生产基因敲除大鼠。

体外转录过程：先使用Ambion体外转录试剂盒(mMESSAGEm MACHINE T7Kit，购自Thermo Fisher，货号:AM1344)转录成mRNA，再使用Ambion加尾试剂盒(poly(A)tailingkit,购自Thermo Fisher，货号:AM1350)在mRNA序列3’末端加尾，操作均按照说明书方法进行。

实施例3基因敲除大鼠的鉴定

1、基因型鉴定

应用本发明方法得到的免疫缺陷大鼠，利用DNA测序技术检验免疫缺陷大鼠体细胞中的DNAPK基因靶序列是否被成功敲除，测序分析结果如图3。从测序结果可知，所选取的DNAPK基因靶位点发生了突变，突变包括18个碱基的缺失和4个碱基的插入。由于DNA序列的片段缺失和碱基插入造成移码突变，导致大鼠体内的DNAPK基因功能的丧失。被成功突变DNAPK基因的序列与野生型大鼠序列对比见表1。

表1 DNAPK基因敲除大鼠与野生型大鼠靶序列对比

注:WT为野生型SD大鼠，△18为删除18bp，In4为插入4bp，<>中为插入的核苷酸序列，-代表对应WT序列中具体删除的核苷酸序列。

2、表型分析

取F0代成功敲除的阳性DNAPK大鼠与野生型交配获得F1代，通过上述基因型鉴定选取基因敲除阳性杂合鼠，雌雄互相交配获得F2代，再通过基因型鉴定筛选阳性纯合大鼠用于后续实验。选取1只DNAPK敲除大鼠纯合子，另选1只野生型SD大鼠作为对照，处死后取脾细胞和心脏外周血进行流式分析，以检测DNAPK基因敲除后大鼠体内T、B、NK细胞的变化。具体样品制备过程如下：

2.1裂解液、抗体来源及稀释比例如下：

10×Lysis buffer(旷博)：稀释比例：1：9

CD3流式抗体(旷博，APCMouse anti-Rat CD3)：稀释比例1:200

CD4流式抗体(旷博，FITC Mouse anti-Rat CD4)：稀释比例1:500

CD8流式抗体(旷博，FITC Mouse anti-Rat CD8)：稀释比例1:500

CD45RA流式抗体(旷博，FITC Mouse anti-Rat CD45RA)：稀释比例1:500

CD161a流式抗体(旷博，FITC Mouse anti-Rat CD161a)：稀释比例1:500

2.2处死敲除大鼠与野生大鼠，心脏取血，采集100-200μl血到1.5ml EP管中，然后加入1×Lysis buffer(1ml)，放在4℃冰上，孵育5min，然后离心5000rpm/min，5min，弃上清，FACS Buffer(1ml)重悬洗，离心5000rpm/min，5min，重复裂解2次。

2.3取敲除大鼠与野生大鼠的脾组织，置于事先加入2ml DMEM的35mm皿中，研磨后过70μm细胞筛网，将过滤好的细胞悬液置于15ml离心管离心，1200rpm/min，5min，弃上清，加入1×Lysis buffer(5ml)，放在4℃冰上，孵育5min。用5ml FACS Buffer终止。离心1200rpm/min，5min，弃上清，加入2.5ml FACS Buffer重悬。

2.4取200ul外周血和1×10⁶脾细胞，放于96孔板中，1000rpm/min离心，5min，弃上清，加上200ul稀释抗体重悬(T细胞：CD3+/CD4+，CD3+/CD8+；B细胞：CD3-/CD45RA+；NK细胞：CD3-/CD161a+)，冰上孵育30min。FACS>

流式分析结果(见图4)显示，与野生型SD大鼠相比，DNAPK敲除大鼠脾脏和外周血中缺少成熟的T、B细胞，主要表现为流式细胞技术检测到T细胞(CD3+/CD4+、CD3+/CD8+)、B细胞(CD3-/CD45RA+)明显缺失，由于T、B细胞介导的免疫功能受损，具有天然杀伤作用的NK细胞介导的细胞毒性细胞功能增强，使大鼠的免疫功能得到补偿，主要表现为外周血中NK细胞(CD3-/CD161A+)数量明显增多。

本发明的方法可以用于DNAPK基因敲除大鼠的改造，制备啮齿动物突变体。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

SEQUENCE LISTING

<110> 北京百奥赛图基因生物技术有限公司

<120> 质粒组合物、DNAPK基因敲除大鼠模型的构建方法及应用

<130> YC12017030008-A

<160> 8

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 75

<212> DNA

<213> Rattus norvegicus

<400> 1

aatacttgta tcagtgttta tacaaaagat agaactgcta aatgtaaaat tccagcctta 60

gatcttctga ttaag 75

<210> 2

<211> 18

<212> DNA

<213> Rattus norvegicus

<400> 2

acaaaagata gaactgct 18

<210> 3

<211> 17

<212> DNA

<213> Rattus norvegicus

<400> 3

ccttagatct tctgatt 17

<210> 4

<211> 16

<212> DNA

<213> Rattus norvegicus

<400> 4

aaatgtaaaa ttccag 16

<210> 5

<211> 9418

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

agctctctgg ctaactagag aacccactgc ttactggctt atcgaaatta atacgactca 60

ctataggggc caccatggac tataaggacc acgacggaga ctacaaggat catgatattg 120

attacaaaga cgatgacgat aagatggccc caaagaagaa gcggaaggtc ggtatccacg 180

gagtcccagc agccgtagat ttgagaactt tgggatattc acagcagcag caggaaaaga 240

tcaagcccaa agtgaggtcg acagtcgcgc agcatcacga agcgctggtg ggtcatgggt 300

ttacacatgc ccacatcgta gccttgtcgc agcaccctgc agcccttggc acggtcgccg 360

tcaagtacca ggacatgatt gcggcgttgc cggaagccac acatgaggcg atcgtcggtg 420

tggggaaaca gtggagcgga gcccgagcgc ttgaggccct gttgacggtc gcgggagagc 480

tgagagggcc tccccttcag ctggacacgg gccagttgct gaagatcgcg aagcggggag 540

gagtcacggc ggtcgaggcg gtgcacgcgt ggcgcaatgc gctcacggga gcacccctca 600

acctgacccc tgagcaggtg gtggccatcg ccagcaacat cggcggcaag caggccctgg 660

agaccgtgca gaggctgctg cctgtgctgt gccaggccca cggcctgacc cctgagcagg 720

tggtggccat cgccagccac gacggcggca agcaggccct ggagaccgtg cagaggctgc 780

tgcctgtgct gtgccaggcc cacggcctga cccctgagca ggtggtggcc atcgccagca 840

acatcggcgg caagcaggcc ctggagaccg tgcagaggct gctgcctgtg ctgtgccagg 900

cccacggcct gacccctgag caggtggtgg ccatcgccag caacatcggc ggcaagcagg 960

ccctggagac cgtgcagagg ctgctgcctg tgctgtgcca ggcccacggc ctgacccctg 1020

agcaggtggt ggccatcgcc agcaacatcg gcggcaagca ggccctggag accgtgcaga 1080

ggctgctgcc tgtgctgtgc caggcccacg gcctgacccc tgagcaggtg gtggccatcg 1140

ccagcaacat cggcggcaag caggccctgg agaccgtgca gaggctgctg cctgtgctgt 1200

gccaggccca cggcctgacc cctgagcagg tggtggccat cgccagcaac aacggcggca 1260

agcaggccct ggagaccgtg cagaggctgc tgcctgtgct gtgccaggcc cacggcctga 1320

cccctgagca ggtggtggcc atcgccagca acatcggcgg caagcaggcc ctggagaccg 1380

tgcagaggct gctgcctgtg ctgtgccagg cccacggcct gacccctgag caggtggtgg 1440

ccatcgccag caacggcggc ggcaagcagg ccctggagac cgtgcagagg ctgctgcctg 1500

tgctgtgcca ggcccacggc ctgacccctg agcaggtggt ggccatcgcc agcaacatcg 1560

gcggcaagca ggccctggag accgtgcaga ggctgctgcc tgtgctgtgc caggcccacg 1620

gcctgacccc tgagcaggtg gtggccatcg ccagcaacaa cggcggcaag caggccctgg 1680

agaccgtgca gaggctgctg cctgtgctgt gccaggccca cggcctgacc cctgagcagg 1740

tggtggccat cgccagcaac atcggcggca agcaggccct ggagaccgtg cagaggctgc 1800

tgcctgtgct gtgccaggcc cacggcctga cccctgagca ggtggtggcc atcgccagca 1860

acatcggcgg caagcaggcc ctggagaccg tgcagaggct gctgcctgtg ctgtgccagg 1920

cccacggcct gacccctgag caggtggtgg ccatcgccag ccacgacggc ggcaagcagg 1980

ccctggagac cgtgcagagg ctgctgcctg tgctgtgcca ggcccacggc ctgacccctg 2040

agcaggtggt ggccatcgcc agcaacggcg gcggcaagca ggccctggag accgtgcaga 2100

ggctgctgcc tgtgctgtgc caggcccacg gcctgacccc tgagcaggtg gtggccatcg 2160

ccagcaacaa cggcggcaag caggccctgg agaccgtgca gaggctgctg cctgtgctgt 2220

gccaggccca cggcctgacc cctgagcagg tggtggccat cgccagccac gacggcggca 2280

agcaggccct ggagaccgtg cagaggctgc tgcctgtgct gtgccaggcc cacggcctca 2340

cgcctgagca ggtagtggct attgcatcca acggaggggg cagacccgca ctggagtcaa 2400

tcgtggccca gctttcgagg ccggaccccg cgctggccgc actcactaat gatcatcttg 2460

tagcgctggc ctgcctcggc ggacgacccg ccttggatgc ggtgaagaag gggctcccgc 2520

acgcgcctgc attgattaag cggaccaaca gaaggattcc cgagaggaca tcacatcgag 2580

tggcaggttc ccaactcgtg aagagtgaac ttgaggagaa aaagtcggag ctgcggcaca 2640

aattgaaata cgtaccgcat gaatacatcg aacttatcga aattgctagg aactcgactc 2700

aagacagaat ccttgagatg aaggtaatgg agttctttat gaaggtttat ggataccgag 2760

ggaagcatct cggtggatca cgaaaacccg acggagcaat ctatacggtg gggagcccga 2820

ttgattacgg agtgatcgtc gacacgaaag cctacagcgg tgggtacaat cttcccatcg 2880

ggcaggcaga tgagatggag cgttatgtcg aagaaaatca gaccagggac aaacacctca 2940

atccaaatga gtggtggaaa gtgtatcctt catcagtgac cgagtttaag tttttgtttg 3000

tctctgggca tttcaaaggc aactataagg cccagctcac acggttgaat cacattacga 3060

actgcaatgg tgcggttttg tccgtagagg aactgctcat tggtggagaa atgatcaaag 3120

cgggaactct gacactggaa gaagtcagac gcaagtttaa caatggcgag atcaatttcc 3180

gctcataaaa aatcagcctc gactgtgcct tctagttgcc agccatctgt tgtttgcccc 3240

tcccccgtgc cttccttgac cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc ctaataaaat 3300

gaggaaattg catcacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat ttataaggga 3360

ttttgccgat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa tttaacgcga 3420

attaattctg tggaatgtgt gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg 3480

cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg 3540

ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc 3600

gcccctaact ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca 3660

tggctgacta atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctctgcct ctgagctatt 3720

ccagaagtag tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc tcccgggagc 3780

ttgtatatcc attttcggat ctgatcagca cgtgatgaaa aagcctgaac tcaccgcgac 3840

gtctgtcgag aagtttctga tcgaaaagtt cgacagcgtc tccgacctga tgcagctctc 3900

ggagggcgaa gaatctcgtg ctttcagctt cgatgtagga gggcgtggat atgtcctgcg 3960

ggtaaatagc tgcgccgatg gtttctacaa agatcgttat gtttatcggc actttgcatc 4020

ggccgcgctc ccgattccgg aagtgcttga cattggggaa ttcagcgaga gcctgaccta 4080

ttgcatctcc cgccgtgcac agggtgtcac gttgcaagac ctgcctgaaa ccgaactgcc 4140

cgctgttctg cagccggtcg cggaggccat ggatgcgatc gctgcggccg atcttagcca 4200

gacgagcggg ttcggcccat tcggaccgca aggaatcggt caatacacta catggcgtga 4260

tttcatatgc gcgattgctg atccccatgt gtatcactgg caaactgtga tggacgacac 4320

cgtcagtgcg tccgtcgcgc aggctctcga tgagctgatg ctttgggccg aggactgccc 4380

cgaagtccgg cacctcgtgc acgcggattt cggctccaac aatgtcctga cggacaatgg 4440

ccgcataaca gcggtcattg actggagcga ggcgatgttc ggggattccc aatacgaggt 4500

cgccaacatc ttcttctgga ggccgtggtt ggcttgtatg gagcagcaga cgcgctactt 4560

cgagcggagg catccggagc ttgcaggatc gccgcggctc cgggcgtata tgctccgcat 4620

tggtcttgac caactctatc agagcttggt tgacggcaat ttcgatgatg cagcttgggc 4680

gcagggtcga tgcgacgcaa tcgtccgatc cggagccggg actgtcgggc gtacacaaat 4740

cgcccgcaga agcgcggccg tctggaccga tggctgtgta gaagtactcg ccgatagtgg 4800

aaaccgacgc cccagcactc gtccgagggc aaaggaatag cacgtgctac gagatttcga 4860

ttccaccgcc gccttctatg aaaggttggg cttcggaatc gttttccggg acgccggctg 4920

gatgatcctc cagcgcgggg atctcatgct ggagttcttc gcccacccca acttgtttat 4980

tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt 5040

tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt atcatgtctg 5100

tataccgtcg acctctagct agagcttggc gtaatcatgg tcattaccaa tgcttaatca 5160

gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg 5220

tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagcgct gcgatgatac 5280

cgcgagaacc acgctcaccg gctccggatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg 5340

ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc 5400

gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccatcgcta 5460

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gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc 5580

ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac 5640

tgcataattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact 5700

caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa 5760

tacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt 5820

cttcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca 5880

ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa 5940

aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac 6000

tcatattctt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg 6060

gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggtcagtgtt acaaccaatt 6120

aaccaattct gaacattatc gcgagcccat ttatacctga atatggctca taacacccct 6180

tgctcatgac caaaatccct taacgtgagt tacgcgcgcg tcgttccact gagcgtcaga 6240

ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg 6300

cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc 6360

aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgttcttct 6420

agtgtagccg tagttagccc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc 6480

tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt 6540

ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg 6600

cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct 6660

atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag 6720

ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag 6780

tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg 6840

gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg 6900

gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac 6960

cgcctttgag tgagctgata ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt 7020

gagcgaggaa gcggaaggcg agagtaggga actgccaggc atcaaactaa gcagaaggcc 7080

cctgacggat ggcctttttg cgtttctaca aactctttct gtgttgtaaa acgacggcca 7140

gtcttaagct cgggccccct gggcggttct gataacgagt aatcgttaat ccgcaaataa 7200

cgtaaaaacc cgcttcggcg ggttttttta tggggggagt ttagggaaag agcatttgtc 7260

agaatattta agggcgcctg tcactttgct tgatatatga gaattattta accttataaa 7320

tgagaaaaaa gcaacgcact ttaaataaga tacgttgctt tttcgattga tgaacaccta 7380

taattaaact attcatctat tatttatgat tttttgtata tacaatattt ctagtttgtt 7440

aaagagaatt aagaaaataa atctcgaaaa taataaaggg aaaatcagtt tttgatatca 7500

aaattataca tgtcaacgat aatacaaaat ataatacaaa ctataagatg ttatcagtat 7560

ttattatcat ttagaataaa ttttgtgtcg cccttaattg tgagcggata acaattacga 7620

gcttcatgca cagtggcgtt gacattgatt attgactagt ccaaacaatt ctgcaggaat 7680

ctagttatta atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc 7740

gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat 7800

tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc 7860

aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc 7920

caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt 7980

acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta 8040

ccatggtcga ggtgagcccc acgttctgct tcactctccc catctccccc ccctccccac 8100

ccccaatttt gtatttattt attttttaat tattttgtgc agcgatgggg gcgggggggg 8160

ggggggggcg cgcgccaggc ggggcggggc ggggcgaggg gcggggcggg gcgaggcgga 8220

gaggtgcggc ggcagccaat cagagcggcg cgctccgaaa gtttcctttt atggcgaggc 8280

ggcggcggcg gcggccctat aaaaagcgaa gcgcgcggcg ggcggggagt cgctgcgacg 8340

ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact 8400

gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctccgg gctgtaatta 8460

gcgcttggtt taatgacggc ttgtttcttt tctgtggctg cgtgaaagcc ttgaggggct 8520

ccgggagggc cctttgtgcg gggggagcgg ctcggggggt gcgtgcgtgt gtgtgtgcgt 8580

ggggagcgcc gcgtgcggct ccgcgctgcc cggcggctgt gagcgctgcg ggcgcggcgc 8640

ggggctttgt gcgctccgca gtgtgcgcga ggggagcgcg gccgggggcg gtgccccgcg 8700

gtgcgggggg ggctgcgagg ggaacaaagg ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg tgggggggtg 8760

agcagggggt gtgggcgcgt cggtcgggct gcaacccccc ctgcaccccc ctccccgagt 8820

tgctgagcac ggcccggctt cgggtgcggg gctccgtacg gggcgtggcg cggggctcgc 8880

cgtgccgggc ggggggtggc ggcaggtggg ggtgccgggc ggggcggggc cgcctcgggc 8940

cggggagggc tcgggggagg ggcgcggcgg cccccggagc gccggcggct gtcgaggcgc 9000

ggcgagccgc agccattgcc ttttatggta atcgtgcgag agggcgcagg gacttccttt 9060

gtcccaaatc tgtgcggagc cgaaatctgg gaggcgccgc cgcaccccct ctagcgggcg 9120

cggggcgaag cggtgcggcg ccggcaggaa ggaaatgggc ggggagggcc ttcgtgcgtc 9180

gccgcgccgc cgtccccttc tccctctcca gcctcggggc tgtccgcggg gggacggctg 9240

ccttcggggg ggacggggca gggcggggtt cggcttctgg cgtgtgaccg gcggctctag 9300

agcctctgct aaccatgttc atgccttctt ctttttccta cagctcctgg gcaacgtgct 9360

ggttattgtg ctgtctcatc attttggcaa agaattgatt tgataccgcg ggccctag 9418

<210> 6

<211> 9316

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

agctctctgg ctaactagag aacccactgc ttactggctt atcgaaatta atacgactca 60

ctataggggc caccatggac tataaggacc acgacggaga ctacaaggat catgatattg 120

attacaaaga cgatgacgat aagatggccc caaagaagaa gcggaaggtc ggtatccacg 180

gagtcccagc agccgtagat ttgagaactt tgggatattc acagcagcag caggaaaaga 240

tcaagcccaa agtgaggtcg acagtcgcgc agcatcacga agcgctggtg ggtcatgggt 300

ttacacatgc ccacatcgta gccttgtcgc agcaccctgc agcccttggc acggtcgccg 360

tcaagtacca ggacatgatt gcggcgttgc cggaagccac acatgaggcg atcgtcggtg 420

tggggaaaca gtggagcgga gcccgagcgc ttgaggccct gttgacggtc gcgggagagc 480

tgagagggcc tccccttcag ctggacacgg gccagttgct gaagatcgcg aagcggggag 540

gagtcacggc ggtcgaggcg gtgcacgcgt ggcgcaatgc gctcacggga gcacccctca 600

acctgacccc tgagcaggtg gtggccatcg ccagcaacat cggcggcaag caggccctgg 660

agaccgtgca gaggctgctg cctgtgctgt gccaggccca cggcctgacc cctgagcagg 720

tggtggccat cgccagcaac atcggcggca agcaggccct ggagaccgtg cagaggctgc 780

tgcctgtgct gtgccaggcc cacggcctga cccctgagca ggtggtggcc atcgccagca 840

acggcggcgg caagcaggcc ctggagaccg tgcagaggct gctgcctgtg ctgtgccagg 900

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ccctggagac cgtgcagagg ctgctgcctg tgctgtgcca ggcccacggc ctgacccctg 1020

agcaggtggt ggccatcgcc agcaacatcg gcggcaagca ggccctggag accgtgcaga 1080

ggctgctgcc tgtgctgtgc caggcccacg gcctgacccc tgagcaggtg gtggccatcg 1140

ccagcaacaa cggcggcaag caggccctgg agaccgtgca gaggctgctg cctgtgctgt 1200

gccaggccca cggcctgacc cctgagcagg tggtggccat cgccagcaac atcggcggca 1260

agcaggccct ggagaccgtg cagaggctgc tgcctgtgct gtgccaggcc cacggcctga 1320

cccctgagca ggtggtggcc atcgccagca acatcggcgg caagcaggcc ctggagaccg 1380

tgcagaggct gctgcctgtg ctgtgccagg cccacggcct gacccctgag caggtggtgg 1440

ccatcgccag caacaacggc ggcaagcagg ccctggagac cgtgcagagg ctgctgcctg 1500

tgctgtgcca ggcccacggc ctgacccctg agcaggtggt ggccatcgcc agcaacatcg 1560

gcggcaagca ggccctggag accgtgcaga ggctgctgcc tgtgctgtgc caggcccacg 1620

gcctgacccc tgagcaggtg gtggccatcg ccagcaacgg cggcggcaag caggccctgg 1680

agaccgtgca gaggctgctg cctgtgctgt gccaggccca cggcctgacc cctgagcagg 1740

tggtggccat cgccagccac gacggcggca agcaggccct ggagaccgtg cagaggctgc 1800

tgcctgtgct gtgccaggcc cacggcctga cccctgagca ggtggtggcc atcgccagca 1860

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ccctggagac cgtgcagagg ctgctgcctg tgctgtgcca ggcccacggc ctgacccctg 2040

agcaggtggt ggccatcgcc agcaacatcg gcggcaagca ggccctggag accgtgcaga 2100

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gacccgcact ggagtcaatc gtggcccagc tttcgaggcc ggaccccgcg ctggccgcac 2340

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agaggacatc acatcgagtg gcaggttccc aactcgtgaa gagtgaactt gaggagaaaa 2520

agtcggagct gcggcacaaa ttgaaatacg taccgcatga atacatcgaa cttatcgaaa 2580

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aggtttatgg ataccgaggg aagcatctcg gtggatcacg aaaacccgac ggagcaatct 2700

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gtggagaaat gatcaaagcg ggaactctga cactggaaga agtcagacgc aagtttaaca 3060

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ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc tggaaggtgc cactcccact 3180

gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcacaacact caaccctatc tcggtctatt 3240

cttttgattt ataagggatt ttgccgattt cggcctattg gttaaaaaat gagctgattt 3300

aacaaaaatt taacgcgaat taattctgtg gaatgtgtgt cagttagggt gtggaaagtc 3360

cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccag 3420

gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta 3480

gtcagcaacc atagtcccgc ccctaactcc gcccatcccg cccctaactc cgcccagttc 3540

cgcccattct ccgccccatg gctgactaat tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc 3600

ctctgcctct gagctattcc agaagtagtg aggaggcttt tttggaggcc taggcttttg 3660

caaaaagctc ccgggagctt gtatatccat tttcggatct gatcagcacg tgatgaaaaa 3720

gcctgaactc accgcgacgt ctgtcgagaa gtttctgatc gaaaagttcg acagcgtctc 3780

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ttatcggcac tttgcatcgg ccgcgctccc gattccggaa gtgcttgaca ttggggaatt 3960

cagcgagagc ctgacctatt gcatctcccg ccgtgcacag ggtgtcacgt tgcaagacct 4020

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aactgtgatg gacgacaccg tcagtgcgtc cgtcgcgcag gctctcgatg agctgatgct 4260

ttgggccgag gactgccccg aagtccggca cctcgtgcac gcggatttcg gctccaacaa 4320

tgtcctgacg gacaatggcc gcataacagc ggtcattgac tggagcgagg cgatgttcgg 4380

ggattcccaa tacgaggtcg ccaacatctt cttctggagg ccgtggttgg cttgtatgga 4440

gcagcagacg cgctacttcg agcggaggca tccggagctt gcaggatcgc cgcggctccg 4500

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cgatgatgca gcttgggcgc agggtcgatg cgacgcaatc gtccgatccg gagccgggac 4620

tgtcgggcgt acacaaatcg cccgcagaag cgcggccgtc tggaccgatg gctgtgtaga 4680

agtactcgcc gatagtggaa accgacgccc cagcactcgt ccgagggcaa aggaatagca 4740

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tttccgggac gccggctgga tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg agttcttcgc 4860

ccaccccaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa 4920

tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa 4980

tgtatcttat catgtctgta taccgtcgac ctctagctag agcttggcgt aatcatggtc 5040

attaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca 5100

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ccagcgctgc gatgataccg cgagaaccac gctcaccggc tccggattta tcagcaataa 5220

accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc 5280

agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca 5340

acgttgttgc catcgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat 5400

tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag 5460

cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac 5520

tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt 5580

ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt 5640

gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc 5700

tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat 5760

ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca 5820

gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga 5880

cacggaaatg ttgaatactc atattcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg 5940

gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg 6000

tcagtgttac aaccaattaa ccaattctga acattatcgc gagcccattt atacctgaat 6060

atggctcata acaccccttg ctcatgacca aaatccctta acgtgagtta cgcgcgcgtc 6120

gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt 6180

tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt 6240

gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat 6300

accaaatact gttcttctag tgtagccgta gttagcccac cacttcaaga actctgtagc 6360

accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa 6420

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ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag 6540

atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag 6600

gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa 6660

cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt 6720

gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg 6780

gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc 6840

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cgagcgcagc gagtcagtga gcgaggaagc ggaaggcgag agtagggaac tgccaggcat 6960

caaactaagc agaaggcccc tgacggatgg cctttttgcg tttctacaaa ctctttctgt 7020

gttgtaaaac gacggccagt cttaagctcg ggccccctgg gcggttctga taacgagtaa 7080

tcgttaatcc gcaaataacg taaaaacccg cttcggcggg tttttttatg gggggagttt 7140

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ataagatgtt atcagtattt attatcattt agaataaatt ttgtgtcgcc cttaattgtg 7500

agcggataac aattacgagc ttcatgcaca gtggcgttga cattgattat tgactagtcc 7560

aaacaattct gcaggaatct agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata 7620

gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc 7680

ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag 7740

ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac 7800

atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg 7860

cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg 7920

tattagtcat cgctattacc atggtcgagg tgagccccac gttctgcttc actctcccca 7980

tctccccccc ctccccaccc ccaattttgt atttatttat tttttaatta ttttgtgcag 8040

cgatgggggc gggggggggg ggggggcgcg cgccaggcgg ggcggggcgg ggcgaggggc 8100

ggggcggggc gaggcggaga ggtgcggcgg cagccaatca gagcggcgcg ctccgaaagt 8160

ttccttttat ggcgaggcgg cggcggcggc ggccctataa aaagcgaagc gcgcggcggg 8220

cggggagtcg ctgcgacgct gccttcgccc cgtgccccgc tccgccgccg cctcgcgccg 8280

cccgccccgg ctctgactga ccgcgttact cccacaggtg agcgggcggg acggcccttc 8340

tcctccgggc tgtaattagc gcttggttta atgacggctt gtttcttttc tgtggctgcg 8400

tgaaagcctt gaggggctcc gggagggccc tttgtgcggg gggagcggct cggggggtgc 8460

gtgcgtgtgt gtgtgcgtgg ggagcgccgc gtgcggctcc gcgctgcccg gcggctgtga 8520

gcgctgcggg cgcggcgcgg ggctttgtgc gctccgcagt gtgcgcgagg ggagcgcggc 8580

cgggggcggt gccccgcggt gcgggggggg ctgcgagggg aacaaaggct gcgtgcgggg 8640

tgtgtgcgtg ggggggtgag cagggggtgt gggcgcgtcg gtcgggctgc aaccccccct 8700

gcacccccct ccccgagttg ctgagcacgg cccggcttcg ggtgcggggc tccgtacggg 8760

gcgtggcgcg gggctcgccg tgccgggcgg ggggtggcgg caggtggggg tgccgggcgg 8820

ggcggggccg cctcgggccg gggagggctc gggggagggg cgcggcggcc cccggagcgc 8880

cggcggctgt cgaggcgcgg cgagccgcag ccattgcctt ttatggtaat cgtgcgagag 8940

ggcgcaggga cttcctttgt cccaaatctg tgcggagccg aaatctggga ggcgccgccg 9000

caccccctct agcgggcgcg gggcgaagcg gtgcggcgcc ggcaggaagg aaatgggcgg 9060

ggagggcctt cgtgcgtcgc cgcgccgccg tccccttctc cctctccagc ctcggggctg 9120

tccgcggggg gacggctgcc ttcggggggg acggggcagg gcggggttcg gcttctggcg 9180

tgtgaccggc ggctctagag cctctgctaa ccatgttcat gccttcttct ttttcctaca 9240

gctcctgggc aacgtgctgg ttattgtgct gtctcatcat tttggcaaag aattgatttg 9300

ataccgcggg ccctag 9316

<210> 7

<211> 53

<212> DNA

<213> Rattus norvegicus

<220>

<221> italic script

<222> (20)..(35)

<400> 7

tacaaaagat agaactgcta aatgtaaaat tccagcctta gatcttctga tta 53

<210> 8

<211> 39

<212> DNA

<213> Rattus norvegicus

<220>

<221> misc_feature

<222> (19)..(22)

<223> 插入的核苷酸序列

<400> 8

tacaaaagat agaactgcag gtcttagatc ttctgatta 39